Бациллярные и кокковые формы Helicobacter pylori в слизистых ротовой полости и антрума желудка (иммуноцитохимическое исследование)

МАТЕРИАЛ И МЕТОДЫ

Группы обследованных пациентов. Для выполнения исследования изначально был использован целенаправленный отбор больных, проходивших лечение в клинике ФГУЗ ВЦРЭМ им. А.М. Никифорова МЧС России, в Военно-медицинской академии им. С.М. Кирова МО РФ и в Городской клинической больнице № 20 (Санкт-Петербург) в период с 20042008 гг.

Иммуноцитохимические исследования НР проводили в двух группах пациентов. Группу 1 составили 70 человек (46 женщин и 24 мужчины в возрасте от 24 до 55 лет) с различными вариантами течения хронического гастрита. Группу 2 составили 40 человек (23 мужчины и 17 женщин в возрасте от 20 до 60 лет) с диагнозом хронический парадонтит перед началом хирургического лечения. Пациенты группы 2 имели глубину десневого кармана более 4 мм, абсцедирующуюся форму парадонтита и 3-ю степень подвижности зубов.

фекции полностью соответствовал результату, когда вариантом первых антител являлись поликлональные кроличьи от фирмы «Novocastra».

Микроскопирование проводили под иммерсией на микроскопе Leica DM 4000.

Для определения НР в мазках с поверхности зубодесневой борозды просматривали по 300 полей зрения. Бактериальные клетки, позитивные по антигенам HP, при использовании в качестве субстрата ДАБ проявляются, как правило, тёмно-коричневым цветом с чёткими контурами.

РЕЗУЛЬТАТЫ И ОБСУЖДЕНИЕ

Принцип применённого в настоящей работе иммуноцитохимического метода основан на специфическом связывании антител с антигенами клеточной стенки HP, что в дальнейшем выявляется с помощью системы визуализации, основанной на сродстве авидина к биотинилированным молекулам антител. В результате иммуноцитохимической реакции между пероксидазой, связанной на авидине и субстратом-красителем, только те бактериальные клетки, в том числе и кокки, которые имеют антигены, специфичные для НР, должны иметь характерное окрашивание.

Прежде чем перейти к результатам иммуноцитохимических исследований НР в мазках с поверхности зубодесневой борозды, напомним, что в качестве первых антител мы использовали поликлональные антитела к антигенам клеточной стенки НР, и исключить их реагирование с общими антигенами бактерий рода Helicobacter , но уже других видов полностью нельзя. Применяемые для выявления НР поликлональные антитела (Novocastra) адаптированы и дают гарантию для исследования гастробиоптатов [9]. Поэтому в дальнейшем при описании результатов исследования материала из ротовой полости для обозначения бактериальных клеток, выявленных вышеописанным иммуноцитохимическим методом, корректнее будет использовать термин «НР-антиген-позитивные бактерии».

Стоит отметить еще одно интересное наблюдение. Как правило, бактериальные клетки с антигенами НР находились в ассоциациях с микрофлорой, внешне схожей с актиномицетами (см. рис. 7, обложка 2) и псевдомицелием кандиды, а также с эпителиоцитами.

Частота обнаружения НР в соскобах с зубодесневой борозды у пациентов группы 1 составила 63,4%, а у пациентов группы 2 – 67,5%.

Бактериальные клетки НР спиралевидных и кокковых форм в зубном налете были впервые визуализированы сканирующей электронной микроскопией Йонг и соавт. в 2001 г. [13]. В этой работе образцы зубного налета предварительно подвергали им-муномагнетическому разделению, в котором использовались поликлональные кроличьи антитела, специфичные к НР. После такого разделения в бактериальных агрегатах сканирующей электронной микроскопией удалось визуализировать спиралевидные и кокковые формы НР [13]. В нашей работе также были использованы поликлональные кроличьи антитела, но, в отличие от исследования Йонг и соавт., мы проводили прямую визуализацию бактериальных клеток НР (минуя пробоподготовку в суспензиях, где возможна трансформация НР из бациллярных форм в кокковые). Отметим еще раз, что в исследованные нами мазки, полученные методом браш с поверхности зубодесневой борозды, попадал материал из зубного налета и вместе с ним эпителий слизистой десны.

По представленным данным, полученным иммуноцитохимическим методом, НР в ротовой полости выявляется в 63,4-67,5% случаев (городские жители Санкт-Петербурга). У пакистанских пациентов с хроническим гастритом частота обнаружения НР уреазным тестом в ротовой полости составила 92,3% [14]. Присутствие НР в ротовой полости было выявлено у 54,1% [7] и у 69,7% [6], обследованных культуральным методом. Реже всего НР в ротовой полости выявляется методом ПЦР – 35,1% [8], 12,5-37,5% [2].