Биохимические показатели крови в оценке степени тяжести состояния организма при экспериментальном подпеченочном холестазе у крыс

Введение. В работах С.М. Зиматкина и С.В. Емельянчика была найдена связь выявленных морфологических нарушений головного мозга с нарастанием эндотоксикоза в организме в условиях холестаза (Емельянчик, Зиматкин, 2011, 2012; Emel’yanchik, Zimatkin, 2014). Их результаты согласуются с данными других авторов (например, Assimakopoulos et al., 2010). Упомямнутыми авторами проведена оценка выраженности эндогенной интоксикации по содержанию тирозинсодержащих пептидов (ТСП) в сыворотке крови и головном мозге у крыс спустя 2-10 сут после моделирования острого полного подпеченочного холестаза. Ими показаны изменения этого показателя эндогенной интоксикации в динамике наблюдений: содержание ТСП в плазме крови на протяжении всего эксперимента оставалось повышенным. Содержание тирозинсодержащих пептидов в мозге крыс

Вестник ТвГУ. Серия "Биология и экология". 2015. № 4 во все периоды после перевязки общего желчного протока, за исключением 2 сут, было понижено (Емельянчик и соавт., 2015).

Была также проанализирована роль нарушений окислительной модификации белков и липидов в мониторинге внутрипеченочного и внепеченочного холестаза, а также обоснованы методологические подходы разработки модельных биологических систем для оценки степени тяжести состояния организма при подпеченочном холестазе (в эксперименте in vitro) (Рубцов и др., 2015).

Вместе с тем, остается актуальным исследование биохимических показателей крови для выявления их маркерных изменений в оценке степени тяжести состояния организма при подпеченочном холестазе в отдаленные периоды наблюдений (15, 25, 50 сут после моделирования).

В нашем исследовании мы задались целью определить активность некоторых ферментов в плазме крови, а также содержание в ней холестерина и билирубина - показателей степени тяжести подпеченочного холестаза у крыс в динамике наблюдений.

Методика. Исследование проведено на 70 беспородных белых крысах самцах массой 225±25 г. Опытным животным (35 крысы) операционным путём под эфирным наркозом перевязывали общий желчный проток на 4-5 мм ниже места слияния долевых протоков с полным пересечением его между двумя шёлковыми лигатурами. Крысам контрольной группы (35 крысы) проводили те же манипуляции, только проток не перевязывали, так что оставался физиологический отток желчи в течение всего эксперимента.

Спустя 7, 9, 15, 25 и 50 сут животных (по 14 в каждой группе) выводили из эксперимента с соблюдением требований международных конвенций о гуманном обращении с животными в условиях лабораторных исследований.

Из гепаринизированной крови получали плазму, биохимические исследования проводили общепринятыми методами (Камышников, 2002). Определяли количество или активность: холестерина (ммоль/л), билирубина (общего, прямого и непрямого) (мкмоль/л), аспартатаминотрансферазы (АсАТ; L-аспартат: 2-оксоглутаратаминотрансфераза; КФ 2.6.1.1), аланинаминотрансферазы (АлАТ; L-аланин: 2-оксоглутарат-аминотрансфераза; КФ 2.6.1.2), щелочной фосфатазы (ЩФ; фосфомоноэстераза 1, фосфогидролаза ортофосфорной кислоты; КФ 3.1.3.1), лактатдегидрогеназы (ЛДГ; L-лактат; НАДоксидоредуктаза, КФ 1.1.1.27). Все показатели в U/L и лактатдегидрогеназы (ЛДГ) - в E/L. Расчет, произведенный в международных единицах соответствовал для 1 U/L- 16,67 нмоль/(с-л), а для 1 E/L - 16,67 нмоль/л (с-л). Работу проводили в лабораториях УЗ «Гродненская областная детская клиническая больница» и УЗ «Гродненская клиническая больница № 1» используя биохимический микроанализатор Architect С 8000 (Abbott Laboratories, США) и Biological Alkali Micro-Analyzer, Type: ОР-266/1 (Radelkis, США).

Статистическую обработку полученных результатов проводили методами непараметрической статистики (U-критерий Манна-Уитни, по тексту - медиана и интерквартильный ранг (Me±IQR) с использованием программы Statistica 6.0 for Windows. Значимыми считали различия между сравниваемыми группами при р<0,05.

Результаты и обсуждение. Через 7 сут холестаза активность АлАТ увеличилась на 47,8% (Z=-3,13; р=0,002), ЛДГ - на 10,3% (Z=-3,13; р=0,002), ЩФ - на 45,5% (Z=-3,13; р=0,002). Количество холестерина возросло на 16,6% (Z=-2,43; р=0,015). Общий билирубин вырос в 7,3 раза (Z=-3,13; р=0,002), а непрямой - в 4,7 раза (Z=-3,13; р=0,002).

На 9 сут активность АлАТ увеличилась на 49,9% (Z=-3,13; р=0,002), ACT - на 3 8,5% (Z=-3,13; р=0,002), ЛДГ - на 47,4% (Z=-3,13; р=0,002), ЩФ - в 2,6 раза (Z=-3,13; р=0,002). Количество холестерина повысилось и составило 133,3% (Z=-2,68; р=0,007) от контрольных значений. Общий билирубин вырос в 7,5 раза (Z=-3,13; р=0,002), непрямой - в 4,7 раза (Z=-3,13; р=0,002).

На 15 сут холестаза активность АлАТ увеличилась в 2,1 раза (Z=-3,13; р=0,002), ACT - на 64,0% (Z=-3,13; р=0,002), ЛДГ - в 3,0 раза (Z=l,98; р=0,048). Количество холестерина повысилось на 42,7% (Z=-2,56; р=0,011). Общий билирубин вырос в 9,1 раза (Z=-3,13; р=0,002), а непрямой - в 5,1 раза (Z=-3,13; р=0,002).

Подпеченочный холестаз вызывает в организме прерывание энтерогепатической циркуляции компонентов желчи, что приводит к изменению практически всех исследованных биохимических показателей в сыворотке крови. Это согласуется с данными Кизюкевич (2005), показавшего подобные сдвиги не только в крови, но и во всех органах и тканях организма.

Как видно из табл. 1, длительный срок после перевязки общего желчного протока приводит к улучшению исследованных показателей. Однако к 50 сут (табл. 2) происходит нормализация практически всех показателей. Это связано с явлениями реканализации желчных протоков - своевременным прорастанием желчных протоков, восстановлением энтерогепатической циркуляции компонентов желчи и сохранением, тем самым, жизни. Отстутвие прорастания обходных желчевыводящих протоков или его позднее завершение привели бы животных к гибели.

Таблица 1

Некоторые биохимические показатели сыворотки крови через 25 сут после перевязки общего желчного протока (Me±IQR)

Примечание. * - р < 0,05; ** - р < 0,01 по сравнению с контролем; (-) -прямой билирубин отрицательный.

Таблица 2

Некоторые биохимические показатели сыворотки крови через 50 сут после перевязки общего желчного протока (Me±IQR)

Примечание. * - р < 0,05 по сравнению с контролем.

Таким образом, все выявленные изменения могут характеризовать степень участие изученных параметров в процессах адаптации на сложившиеся условия в организме крыс. Это свидетельствует о существенной роли желчи в деятельности всего организма, в поддержании метаболического гомеостаза при дефиците компонентов желчи в организме.

Выводы: 1. Повышенный уровень билирубина (особенно его непрямой фракции) плазмы крови указывает на наличие подпеченочного холестаза в течение эксперимента. 2. Повышенная активность Ал АТ и ЩФ в крови, с 7 по 25 сут эксперимента, может служить маркерным тестом подпеченочного холестаза. 3. Некоторая компенсация метаболических нарушений происходит с 25 сут, хотя полной нормализации изученных тестов не наблюдается из-за реканализации желчных протоков.

Емельянчик С.В. Биохимические показатели крови в оценке степени тяжести состояния организма при экспериментальном подпочечном холестазе у крыс / С.В. Емельянчик, Г.К. Рубцов, Н.В. Безручко, Г.П. Лапина // Вести. ТвГУ. Сер.: Биология и экология. 2015. №4. С. 27-32. ' ’