Цитогенетический анализ культуры клеток линии LEK

Материалы и методы. Контроль на стерильность исследуемой культуры клеток проводился путем высева клеточной суспензии на МПА, МПБ, среды Сабуро, Чапека, Китта-Тарроци, ТПС-агар и ТПС - бульон. Для изучения общей морфологии и кариологии клеточной культуры LEK использовался микроскоп NikonType 120. Клетки LEK культивировали на стекле по общепринятой методике (Р.Адамс, 1983) в стандартных условиях монослойно с посевной концентрацией 40-80 тыс.кл/мл в термостате при температуре 37⁰ С на 0,5% ГЛА с 10%-м содержанием сыворотки крови взрослого крупного рогатого скота, антибиотиками и глутамином. Подсчет клеток, для установления индекса их пролиферации, проводился трижды в камере Горяева. После восстановления морфологических параметров культур проводили кариологические исследования хромосомных пластинок с использованием 0,1%-ного колхицина по методу Мурхеда (1960). В ходе работы было подсчитано 1000 метафазных пластинок.

Результаты исследований. В результате проведенных исследований на выше перечисленных бактериальных средах было установлено, что культура клеток LEK оказалась стерильной. После образования монослоя под микроскопом просматривались клетки эллипсоидной формы с прозрачной цитоплазмой, без включений и зернистости. Индекс пролиферации клеток варьировал от 5,55 до 6,01. Для улучшения роста клеток сухой гидролизат лактальбумина подвергался гамма облучению в дозе 1 млн. рентген. В результате подсчета 1000 метафазных пластинок установлено, что модальное число хромосом равно 40, а пределы изменчивости по числу хромосом 55-58. Одна из метафазных пластинок культуры клеток LEK представлена на рис.1

1. Метафазная пластинка культуры клеток LEK

Полученные данные покариологической характеристике перевиваемой линии клеток LEK несколько не соответствуют требованиям, указанным в каталоге Специализированной коллекции перевиваемых соматических клеточных культур сельскохозяйственных и промысловых животных РККК(П), (СХЖ РАСХН), откуда предположительно в свое время была получена данная культура.

Заключение. Изменения в кариотипе перевиваемой линии клеток LEK возможно объяснить либо неправильными условиями криоконсервации, длительным культивированием, качеством сыворотки, зависящем от источника получения и концентрации в среде, а так же частой сменой и нестандартностью питательных сред. Результаты проведенных исследований легли в основу разработанных нами лабораторных регламентов по использованию культур клеток LEK для вирусологических и диагностических целей.

ЛИТЕРАТУРА: 1. Адамс, Р. Методы культуры клеток для биохимиков/ Р. Адамс - М.:Мир. 1983.-264 с. 2. Дьяконов, Л.П. Животная клетка в культуре (Методы и применение в биотехнологии)/ Под ред. проф. Л.П. Дьяконова, проф. В.И. Ситькова – М.: Компания Спутник+. -2000. – 400 с. 3. Методы культивирования клеток /Под ред.: Г.П. Пинаева, М.С. Богдановой. - СПб: Издательство Политехн. ун-та.-2008.-278с. 4 Методы культуры клеток для биохимиков / R. Adams. – М.: Изд. «Мир», 1983 – 313 с. 5. Сборник материалов научная программа тезисы / VII Международная конференция «Молекулярная медицина и безопасность» / Плотникова А.М., Хамзина Е.Ю., Кириллова Ю.М., Хусаенов Р.Х. – М. – 2010, С.146-147,196.

ЦИТОГЕНЕТИЧЕСКИЙ АНАЛИЗ КУЛЬТУРЫ КЛЕТОК ЛИНИИ LEK

Хазиев Л.Р.

Резюме

Изучено влияние криоконсервации на биологические свойства культуры клеток LEK. Установлено, что длительная криоконсервация влияет на еецитогенетические свойства.

CYTOGENETICANALYSISOF CULTURE OF CELLS OF THE LEK LINE

Khaziev L.R.