Диагностика токсокароза собак: сравнительная характеристика эффективности методов

Широкому распространению токсокароза среди животных способствует многогранный и совершенный механизм передачи возбудителя хозяину. Существует несколько вариантов проникновения возбудителя в организм хозяина: прямой путь заражения – проглатывание яиц из окружающей среды, внутриутробный – заражение плода личинками, прошедшими через плаценту, трансмаммарный – передача личинок с молоком и заражение основных хозяев при поедании ими резервуарных (паратенических) хозяев. Тохосаrа canis обычно паразитирует у собак, волков, лисиц, песцов и других представителей семейства псовых. Средняя продолжительность жизни у половозрелых особей составляет 4 месяца, максимальная – 6 мес. Самка Т. canis откладывает в сутки до 200 тыс. яиц и более [4, 5, 6].

Для человека токсокароз – зоонозная инвазия. Заражение человека происходит при проглатывании инвазионных яиц токсокар. В проксимальном отделе тонкого кишечника из яиц выходят личинки, которые через слизистую оболочку проникают в кровоток, затем заносятся в печень и правую половину сердца. Личинки токсокар локализуются в печени, легких, сердце, почках, поджелудочной железе, головном мозге, глазах и других органах и тканях [1, 8, 9]. Здесь они сохраняют жизнеспособность в течение длительного времени (месяцы, годы). Личинки, осевшие в тканях, пребывают в «дремлющем» состоянии, а затем под влиянием факторов снижения иммунитета хозяина или изменения его гормонального фона активизируются и продолжают миграцию [8, 11].

Микроскопическое исследование фекалий собак и кошек или образцов почвы обычно используется для обнаружения яиц Toxocara. В литературе для диагностики токсокароза собак рекомендуют копроскопические методы, такие как флотационные методы Фюллеборна и Котельникова — Хренова. Эти методы простые и легко выполнимы, однако имеют недостаток, связанный с трудностями при определении низкой степени инвазии [2, 3, 9].

Иммунодиагностика токсокароза основана на выявлении в сыворотке крови специфических антител или антигенов паразита. Инвазия токсокарами сопровождается продукцией специфических антител [7, 10]. В острой стадии, как правило, титр противотоксокарозных антител выше, чем в хронической стадии. При возобновлении миграции личинок из тканей и обострении клинической симптоматики уровень титров обычно возрастает. Вместе с тем, определение специфических антител не является показателем жизнеспособности личинок токсокар [10, 11].

Цель нашей работы — на основе гельминтологических и серологических методов изучить распространение токсокароза собак в г. Вологде и провести сравнительную характеристику эффективности применяемых методов.

Материалы и методы. Сбор фекалий проводился индивидуально от собак в стерильную тару с информацией на этикетке о животном. Гельминтологическое исследование проводили в течение суток после взятия пробы. Отобрано и исследовано 98 проб фекалий от домашних и бездомных собак.

Исследование проводили методом Фюллеборна. При данном методе использовали насыщенный раствор поваренной соли, который готовили путем добавления 400—420 г соли на 1 л кипящей воды. Плотность (ρ) насыщенного раствора поваренной соли 1,18-1,20. Каплю с поверхностной пленки микроскопировали через 40 минут.

Метод Котельникова — Хренова (1984 г.) с раствором аммиачной селитры использовали для сравнительного контроля. Техническую гранулированную аммиачную селитру (1,5 кг) помещали в 1 л кипящей воды для приготовления флотаци- онного раствора с плотностью – 1,32. Поверхностную пленку микроскопировали через 10 минут.

Было проведено 36 полных гельминтологических вскрытий отдельных органов по К.И.Скрябину (1928). Собранный гельминтологический материал отмывали в физиологическом растворе и замораживали при – 20 °С для дальнейшего приготовления водно-солевого экстракта.

Для получения сыворотки крови цельную кровь брали из подкожной вены предплечья в биохимические пробирки, центрифугировали при 3000 об/мин 10 минут. Сыворотку аспирировали в пробирки типа eppendorf и помещали в морозильную камеру при – 20 °С для хранения. Всего исследовано 50 сывороток крови от клинически здоровых собак и 20 сывороток от собак, инвазия токсокарами у которых подтверждалась результатами гельминтологических вскрытий.

Микроскопические исследования проводили на биологическом микроскопе (МБИ). Определение обнаруженных паразитов и яиц проводили с помощью определителей и монографий К.И. Скрябина и А.М. Петрова (1964), Д.П. Козлова (1977), атласа дифференциальной диагностики гельминтозов по морфологической структуре яиц и личинок возбудителей A.A. Черепанова (2001).

Для проведения иммуноферментного анализа (ИФА, ELISA) использовали непрямой вариант с целью выявления антител (АТ) в сыворотке крови животных. Твердой фазой служили полистироловые плоскодонные планшеты фирмы «Медпо-лимер». В качестве антигена использовали водно-солевые экстракты (соматический антиген). Параметры и режимы постановки ИФА отрабатывали в предварительных экспериментах на сыворотках крови плотоядных с гомологичной, гетерологичной инвазией и отрицательным контролем. В качестве конъюгата использовали: для собак – Anti-Dog IgG (whole molecule)-Peroxidase antibody produced in rabbit (Sigma, Israel).

Результаты исследования. В экспериментах по сравнительной эффективности копрологических методов был проведен анализ 98 проб фекалий от домашних и бездомных собак г. Вологды. По результатам наших экспериментов методом Фюл-леборна было выявлено 25 положительных проб, а методом Котельникова — Хренова с аммиачной селитрой – 29 проб с яйцами гельминтов р. Toxocara. При исследовании фекалий собак метод Котельникова — Хренова с аммиачной селитрой оказался на 4,1 % эффективнее, чем метод Фюллеборна, была выявлена токсока-розная инвазия в 29,6 % и 25,5 % случаев соответственно.

При проведении копрологических исследований нами установлено, что у домашних собак экстенсивность инвазии (ЭИ) токсокарозом составила 23 %, в то время как у бездомных собак оказалось 36,2 %. Как видно из рисунка 1, яйцо собачьей токсокары имеет достаточно характерные морфологические признаки: субсферическую форму, ячеистую оболочку, шаровидную зиготу (бластомер).

По результатам 36 проведенных гельминтологических вскрытий нами зарегистрировано 20 случаев токсокарозной инвазии, преимущественно у щенят в возрасте от 2,5 до 8 месяцев. Имаго (рисунки 2 и 3) отличается шейными крыльями (капюшон) и ярко выраженным желудочком при микроскопировании верхней трети паразита (отмечен стрелкой).

Рисунок 1. Яйцо нематоды Toxocara canis

Рисунок 2. Головной конец нематоды T. canis

Рисунок 3. Желудочек нематоды T. canis

На основе ИФА нами была проведена серодиагностика токсокароза собак. У 50-ти собак, свободных от гельминтов, 2 сыворотки крови показали положительную реакцию в ИФА, что свидетельствовало о наличии антител к антигенам токсо-кар. Это составило 4% серопозитивных особей. У 20 собак, зараженных токсока-рами, антитела были обнаружены во всех пробах сывороток крови.

Таким образом, нами установлено, что не всегда серопозитивные животные имеют токсокарозную инвазию в желудочно-кишечном тракте. В наших экспериментах 4% собак, положительные в ИФА, оказались без кишечной инвазии. Можно предположить, что положительные реакции ИФА при свободном желудочнокишечном тракте указывают о прошедшей токсокарозной инвазии или наличии миграционной или тканевой формы токсокароза плотоядных.

Заключение. Таким образом, из копрологических тестов наиболее эффективным оказался метод Котельникова — Хренова с аммиачной селитрой. Серологический тест на основе ИФА показал высокую эффективность и может быть использован как дополнительный метод обнаружения позитивных на токсокароз собак. ИФА имеет принципиально иной подход к диагностике гельминтозов – через обнаружения антител к токсокарам, поэтому оказывается эффективным, когда в фекалиях зараженных собак нет яиц. Полученные результаты по изучению эффективности методов диагностики в определении распространения токсокароза собак свидетельствуют о необходимо применять в комплексе различные методы, основанные на разных подходах в диагностике токсокароза, способные дополнять друг друга и повышать информативность полученных результатов.

Токсокарозная инвазия собак в г. Вологде в среднем составляет 29,6 %. Наиболее широко T. canis распространена среди бездомных животных, до 36,2 %.