Дифференционная молекулярно-генетическая диагностика типа 2N болезни Виллебранда и гемофилии А



Д.М. Чернецкая, В.Л. Сурин, В.В. Саломашкина, О.С. Пшеничникова, Е.В. Яковлева, Н.И. Зозуля, Е.А. Лихачева, Н.В. Андреев, Ф.Г. Перина, Е.С. Шабанова

ДИФФЕРЕНЦИОННАЯ МОЛЕКУЛЯРНО-ГЕНЕТИЧЕСКАЯ ДИАГНОСТИКА ТИПА 2N БОЛЕЗНИ ВИЛЛЕБРАНДА И ГЕМОФИЛИИ А

ФГБУ «Национальный медицинский исследовательский центр гематологии» МЗ РФ, Москва

Введение . Тип 2N болезни Виллебранда (БВ) характеризуется близким к нормальному значением антигена vWF (vWF:Ag) при утрате им способности связываться с фактором VIII (FVIII) и отсутствием защиты последнего от протеолиза. За счет этого коагуляционная активность FVIII может быть низкой, что приводит к сходным фенотипическим проявлениям у больных с типом 2N БВ и гемофилией А. Тип 2N БВ вызывается нарушениями в доменах D3 и D’ фактора фон Виллебранда (vWF), определяемыми патологическими изменениями в соответствующих участках гена vWF (экзоны 17-28).

Цель . Выявить больных с типом 2N БВ на основании данных молекулярно-генетического анализа.

Материалы и методы . В исследование включено 6 пациентов с клинической картиной БВ, отвечающей типу 2N на основании соотношения FVIII:C и vWF:Ag (< 0,7). Кроме того, проведен анализ для больного, которому изначально был поставлен диагноз «гемофилия А», не подтвердившийся при секвенировании гена F8.

Поиск патогенных вариаций проводили секвенированием экзонов и прилежащих к ним интронных областей гена vWF по методу Сэнгера. Поскольку наследование 2N типа БВ рецессивное, для диагноза требовалось найти два патогенных варианта.

Результаты. В четырех случаях определение первичной структуры функционально значимых областей гена vWF позволило верифицировать диагноз БВ тип 2N. Одна больная была гомозиготна по патогенному варианту p.Arg854Gln (c.2561 G>A). У второй больной была найдена гетерозиготная замена p.Arg816Trp (c.2446 C>T), соответствующая типу 2N; поскольку в области, нарушения в которой вызывают тип 2N (17-28 экзоны), других патогенных вариантов не было найдено, поиск был расширен по всему гену и в результате была обнаружена ранее не описанная инсерция c.2098_2099insG в экзоне 16, вызывающая сдвиг рамки считывания. У третьей больной, выявленной по параметру (FVIII:C/vWF:Ag < 0,7), и у больного с изначальным диагнозом «гемофилия А» было выявлено сочетание делеции c.2435delC и замены p.Thr791Met (c.2372 C>T) в гетерозиготном состоянии. Генные варианты p.Thr791Met и p.Arg854Gln ассоциированы с типом 2N, а делеция c.2435delC приводит к дисфункциональности аллеля. У троих больных патогенные изменения не были обнаружены. Среди них двое мужчин и одна женщина.

Выводы . Молекулярно-генетические методы позволили диагностировать 2N тип БВ в четырех случаях: для трех женщин с диагнозом БВ и для мужчины с изначальным диагнозом «гемофилия А». В трех случаях тип 2N БВ был исключен на основе анализа гена.