Дизрегуляционные изменения сурфактанта и водного баланса легких при экспериментальной ишемии мозга и гипоксическом прекондиционировании

Автор: Лужбина Р.В., Лукина С.А.

Журнал: Огарёв-online @ogarev-online

Статья в выпуске: 13 т.11, 2023 года.

Бесплатный доступ

Представлены результаты исследования сурфактантной системы, водного баланса легких, про- и антиоксидантной активности легочной ткани при экспериментальной однодневной неполной глобальной ишемии головного мозга, вызванной двусторонней окклюзией общих сонных артерий. Дана оценка эффективности раннего и позднего гипоксического прекондиционирования, выполненного посредством циклических гипоксических тренировок, предшествующих эпизоду ишемии. Опыты выполнены на крысах-самцах, в том числе ложнооперированных и контрольных. Установлено, что в условиях ишемии понижается поверхностная активность сурфактанта, что сопряжено с активацией перекисного окисления липидов и высокой активностью фосфолипазного гидролиза, увеличивается кровенаполнение легких. Применение раннего и позднего прекондиционирования не устраняет дизрегуляционных расстройств сурфактанта и водного баланса легких.

Еще

Гипоксическое прекондиционирование, ишемия мозга, кровенаполнение легких, сурфактант легких

Короткий адрес: https://sciup.org/147250328

IDR: 147250328

Текст научной статьи Дизрегуляционные изменения сурфактанта и водного баланса легких при экспериментальной ишемии мозга и гипоксическом прекондиционировании

Известно, что тяжелая ишемия/гипоксия приводит к деструктивным изменениям нейронов, значительным нарушениям метаболизма, угнетению нейропластичности мозга. В то же время умеренные гипоксические стимулы обладают нейропротективным действием, индуцируя активацию эндогенных саногенетических программ, повышают устойчивость мозга к тяжелой гипоксии. Феномен метаболической адаптации головного мозга к гипоксии, известный как прекондиционирование, широко обсуждается в современной литературе [5]. Известно о двух фазах ишемической толерантности мозга: ранней, развивающейся через несколько минут после сублетального стимула, и поздней, эффекторные механизмы которой реализуются через 24 часа после гипоксии. Полагают, что раннее прекондиционирование обеспечивается изменениями внутриклеточного метаболизма нейронов, а поздняя фаза реализуется посредством синтеза белков de novo [5]. Широко обсуждаются механизмы адаптивного действия прекондиционирования на структуры мозга, однако недостаточно данных о состоянии висцеральных функций организма при использовании различных его протоколов в условиях ишемического повреждения мозга.

Цель исследования. Определение роли раннего и позднего гипоксического прекондиционирования в коррекции дизрегуляционных расстройств сурфактантной системы и водного баланса легких, индуцированных экспериментальной ишемией головного мозга.

Материалы и методы. Исследования проводились на беспородных крысах-самцах массой 200-250г. в соответствии с Правилами лабораторной практики при работе с экспериментальными животными (приказ Минздравсоцразвития РФ от 23.08.2010 г. № 708, Директива 2010/EU Европейского парламента). Животные были распределены по группам: 1 - интактные (n=11), 2 - ложнооперированные (n=20), 3 - с проведением интервальных гипоксических тренировок (n=13), 4 - с моделированием неполной глобальной ишемии головного мозга (n=19), 5 - с использованием раннего прекондиционирования (n=15), 6 - с использованием позднего прекондиционирования (n=15). Поскольку достоверных различий показателей у интактных и ложнооперированных животных не наблюдалось, за основной контроль принимали данные ложнооперированных крыс. Для моделирования неполной глобальной ишемии головного мозга у крыс осуществляли необратимую билатеральную окклюзию общих сонных артерий [6], отделяя сосуды от элементов сосудисто-нервного пучка с последующим их перевязыванием. Ложнооперированным животным выделяли сосуды без дальнейшей перевязки. Нормобарические гипоксические тренировки осуществляли в течение четырех дней в цикличном режиме по четыре эпизода гипоксии и реоксигенации по 10 минут каждый [7]. Для тренировок использовали гермокамеру с проточной вентиляцией объемом 3,3 л. Для раннего прекондиционирования проводили гипоксические тренировки с последующей (через час после последнего эпизода гипоксии) окклюзией общих сонных артерий. Для позднего прекондиционирования ишемию мозга моделировали через сутки после завершения гипоксических тренировок [7]. У выживших животных определяли наличие признаков неврологического дефицита по шкале Stroke-index Mc. Graw в модификации И.В. Ганнушкиной [8]. Нереспираторные функции легких исследовали через сутки после моделирования ишемии мозга. У наркотизированных животных извлекали бронхоальвеолярный комплекс, промывали дегазированные легкие изотоническим раствором натрия хлорида. Полученные бронхоальвеолярные смывы помещали в тефлоновую кювету с подвижным барьером для изучения их поверхностно-активных свойств методом Вильгельми-Лэнгмюра. С этой целью определяли статическое поверхностное натяжение (ПН) мономолекулярной пленки методом отрыва от нее вертикальной пластинки, далее оценивали минимальное и максимальное ПН в динамике сжатия и растяжения монослоя сурфактанта с последующим расчетом индекса стабильности альвеол по J. Clements. Содержание фосфолипидов (ФЛ) в составе бронхоальвеолярных смывов определяли по уровню неорганического фосфора, содержание холестерина (ХЛ) определяли с помощью колориметрического метода (диагностикум Холестерин-11/21/31-Витал, СПб), с последующим расчетом коэффициента ФЛ/ХЛ, фосфолипазную активность оценивали по содержанию жирных кислот, образующихся в результате фосфолипазного гидролиза. Водный баланс легких изучали, расчитывая гравиметрические коэффициенты методом Gaar K.A. в модификации А.В. Бобрикова. Гемиглобинцианидным методом оценивали содержание гемоглобина в крови и гомогенате легочной ткани (диагностикум НПО «Ренам», Москва). Учитывая вес сердца, влажных и высушенных легких, определяли кровенаполнение легких, содержание в них общей и экстраваскулярной жидкости. Для оценки прооксидантной активности легочной ткани определяли концентрацию малонового диальдегида (МДА) в гомогенате легочной ткани в реакции с тиобарбитуровой кислотой («Агат-Мед», Москва). Активность каталазы оценивали методом Королюка М.А.

Статистический анализ результатов выполнен с помощью программного обеспечения «Microsoft Excel 2010» и Statistica 6.0, «SPSS 19 for Windows» с использованием непараметрического U-критерий Манна-Уитни, коэффициента ранговой корреляции Спирмена. Статистически достоверным считали уровень значимости р <0,05, p <0,01.

Результаты и обсуждение. Было установлено, что через сутки после ишемии мозга летальность животных составила 37%, неврологический дефицит 8,5±1,0 баллов. Изменился фракционный состав сурфактанта с увеличением содержания фосфолипидов на 73% [Z = -3,97; p = 0,0001] (табл. 1). Однако ПН минимальное бронхоальвеолярных смывов возросло [Z = -3,29; p = 0,001], уменьшился интегральный показатель, характеризующий свойства выстилающего альвеолярного комплекса, индекс стабильности альвеол [Z = -3,98; p = 0,0001].

Таблица 1

Показатели сурфактантной системы и водного баланса легких при ишемии мозга, гипоксических тренировках, раннем и позднем прекондиционировании (Ме [Q1; Q3])

Показатели

Контроль

Ишемия

мозга

Гипоксические

тренировки

Раннее ПРК

Позднее ПРК

ФЛ, мкмоль/г

152,39 [146,90;193,26]

318,17** [224,6; 381,80]

105,36**л [95,37;121,47]

203,83## [161,99;242,18]

154,30 л## [139,00;197,10]

ХЛ, мкмоль/г

65,50 [59,18;74,83]

61,83 [46,24; 75,40]

71,29 [61,45;75,62]

49,88 [46,65;70,84]

62,90 [57,80;79,80]

ФЛ/ХЛ, усл.ед

2,24 [1,70;2,80]

4,81 ** [4,39; 6,71]

1,49*л [1,29;1,85]

3,57**лл## [3,15;3,90]

2,40лл## [1,76; 3,20]

Фосфолипаза, Ед.

31,20 [27,40;36,50]

52,00** [40,88; 66,60]

58,52 ** [55,14;63,62]

60,94**л [50,17;78,69]

75,80**л# [56,10;89,40]

ПН стат., мН/м

30,80 [26,80;32,60]

30,30 [27,65;32,00]

27,40* [26,80;27,60]

29,90 [29,05;30,75]

28,70 ## [27,90;30,05]

ПН мин., мН/м

17,40 [15,00;18,20]

19,60** [19,40;21,45]

18,20 [18,00;18,40]

20,00*# [19,10;21,65]

19,50**# [17,85;20,75]

ПН макс., мН/м

36,00 [35,20;36,50]

32,70** [30,90; 33,15]

32,30 ** [31,65;33,00]

34,60 [33,05;37,35]

33,00** [31,10;33,75]

Индекс стабильности, усл. ед.

0,70 [0,63;0,75]

0,45 ** [0,43; 0,51]

0,56**л [0,54;0,59]

0,53**л [0,49;0,58]

0,49**# [0,46;0,54]

Общая жидкость, %

108,18 [96,88;121,10]

115,50 [113,00;128,50]

98,53 л [97,12; 103,33]

114,30## [104,25;128,53]

108,30## [105,13;110,53]

Кровенаполнени е легких, %

7,40 [6,46;8,02]

9,30 ** [7,96; 11,40]

4,91*лл [3,42;7,79]

10,43**## [8,54;12,83]

5,06**лл [4,44;5,31]

Экстраваск. жидкость, %

102,22

[95,36;115,00]

105,60 [103,05;121,50]

93,77*л [92,35;96,37]

106,23# [93,30;118,25]

103,45## [101,23;105,22]

МДА, мкмоль/г/сух.ост.

0,20 [0,12;0,28]

0,61* [0,47;0,81]

0,27л [0,26;0,29]

0,40**л [0,30;0,50]

0,36*л [0,33;0,37]

Каталаза,

М/мин/г/сух.ост.

12,66 [10,74;20,69]

16,15 ** [14,75;18,74]

12,69л [12,07;14,20]

6,76лл## [4,53;8,99]

9,94 *лл## [9,39; 9,99]

Примечание: значимые отличия от контрольной группы - *, группы с ишемией мозга - Л, группы с гипоксическими тренировками- #,(1 знак - Р<0,05; 2 знака - Р<0,01).

Выявленные изменения свойств сурфактанта могли быть обусловлены высокой интенсивностью ПОЛ в легочной ткани с увеличением содержания малонового диальдегида в 2,9 раз [Z = -2,96; p = 0,003] и активностью процессов фосфолипазного гидролиза [Z = -3,58; p = 0,0001] с повреждением липидов сурфактанта свободными радикалами и лизосоединениями. Изменения водного баланса проявились увеличением кровенаполнения легких [Z = -2,61; p = 0,009]. При проведении гипоксических тренировок легочное кровенаполнение, напротив, уменьшалось [Z = -3,46; p = 0,001], что могло быть следствием гипоксической вазоконстрикции [9]. В условиях снижения эффективности перфузии в системе малого круга кровообращения изменялся метаболизм поверхностно-активных липидов с уменьшением фосфолипидной фракции [Z = -2,60; p = 0,009], снижением коэффициента ФЛ/ХЛ [Z = -3,05; p = 0,002], на фоне высокой активности фосфолипазы. При этом поверхностно-активные свойства сурфактанта не были оптимальными, о чем свидетельствовало уменьшение индекса стабильности альвеол [Z = -2,39; p = 0,017]. При использовании режима раннего гипоксического прекондиционирования с целью нейропротекции летальность животных в ишемическом периоде оставалась высокой и достигла 39%, неврологический дефицит составил 8,0±1,0 баллов. В водном балансе отличий от параметров при ишемии мозга не отмечалось, сохранялось высокое кровенаполнение легких [Z= -0,71; p 1 = 0,48]. В системе сурфактанта наблюдали значительное повышение активности фосфолипазы А 2 [Z = -3,48; p = 0,001], при этом фракционный состав липидов не отличался от контроля. Как и в опыте с ишемией мозга минимальное поверхностное натяжение смывов увеличилось [Z = -3,00; p = 0,003], позитивным фактором явилась оптимизация индекса стабильности альвеол [Z = -2,85; p 1 = 0,004]. Возможно, это обусловлено некоторым уменьшением интенсивности свободнорадикальных реакций в легочной ткани по сравнению с опытной группой [Z = -2,88; p 1 = 0,004], однако уровень МДА оставался существенно выше контрольных величин [Z = -3,05; p = 0,002]. Кроме того, наряду со снижением активности ПОЛ уменьшилась и активность каталазы [Z = -3,16; p 1 = 0,002]. В условиях применения режима позднего гипоксического прекондиционирования летальность животных не снизилась и составила 40%, неврологический дефицит был равен 8,1±1,3 баллам. Анализ параметров системы сурфактанта показал, что его липидный состав, соотношение ключевых фракций - ФЛ/ХЛ не отличались от контроля, активность фосфолипазы А 2 , как и при ишемии мозга, и в условиях раннего прекондиционировании была высокой [Z = -2,65; p = 0,008], [Z = -2,31; p 1 = 0,021]. Позитивных изменений свойств сурфактанта не отмечалось, ПН минимальное и индекс стабильности альвеол соответствовали параметрам у животных с окклюзией сонных артерий. Однако интенсивность ПОЛ в легочной ткани, как и в условиях раннего прекондиционирования уменьшалась [Z = -2,88; p 1 = 0,004] наряду со снижением активности каталазы [Z = -3,39; p 2 =

0,004]. Особенностью изменения баланса жидкости в легочной ткани явилось уменьшение органного кровенаполнения [Z = -2,67; p2 = 0,008], что соответствовало значениям, выявленным в условиях гипоксических тренировок - [Z = -0,57; p2 = 0,569]. Содержание общей и экстраваскулярной жидкости не отличались от контрольных величин. Установлено, что в основе протекторного действия прекондиционирования лежит активация транскрипционных факторов (NFkB, JNK, HIF-1), повышение активности систем утилизации кислорода в структурах мозга, синтез ростовых и нейротрофических факторов, снижение эксайтотоксичности глутамата [5]. Вместе с тем, применение гипоксического прекондиционирования, оказывая общее воздействие на организм, усиливает реактивность гипофизарно-адренокортикальной системы, повышает уровень гормонов стресса [10]. Не исключено, что под их влиянием активируется катаболизм липидов сурфактанта, на что указывают корреляционные связи между содержанием фосфолипидов и активностью фосфолипазы (rs= –0,90; р<0,01). Подобные изменения метаболизма легочного сурфактанта были описаны при хронической физической нагрузке, что, по мнению авторов, было связано с повышенным расходом сурфактанта в условиях гипервентиляции, а также усиленным его катаболизмом [11].

Заключение. Гипоксическое прекондиционирование, независимо от режима его применения, не обеспечивает коррекции дизрегуляционных расстройств сурфактанта и водного баланса легких, индуцированных ишемией головного мозга. В условиях прекондиционирования снижается прооксидантная активность легочной ткани на фоне уменьшения активности каталазы.

Статья научная