Доклиническая оценка комплексного средства «N-98» на белых мышах

В     условиях     современного животноводства химиотерапевтические препараты при лечении животных, страдающих различными патологиями, оказывают помимо терапевтического действия ряд нежелательных побочных эффектов      на      состояние      и функциональность многих органов животных. Также в последнее время идет тенденция к ограничению использования и антибактериальных препаратов. По этим двум причинам возникает потребность в поиске альтернативных средств лечения животных в условиях современного животноводства.

Альтернативой    могут    быть представлены комплексные средства на основе сырья природного происхождения, которые обладают противовоспалительной, антибактериальной, иммуномодулирующей    и    другой активностью. Группы органических веществ (алкалоиды, сапонины, эфирные масла, карбоновые кислоты, фенолы и др.) и биологически активные вещества, входящие в состав комплексных средств, приближены к составным веществам клеток различных  тканей животного организма. Ввиду этого, средства на основе природного сырья  способны оказать терапевтический эффект с наименьшими побочными действиями.

Но прежде, чем применять данные средства, требуется определение их токсикологической безопасности на лабораторных животных. Поэтому целью настоящих исследований является определение параметров острой токсичности комплексного средства под лабораторным шифром «N-98» при интрагастральном и внутримышечном введении белым мышам.

Материал и методы исследований. Экспериментальная часть работы по определению параметров острой токсичности проходила в пределах вивария ФГБОУ ВО КГАВМ имени Н.Э. Баумана. Параметры острой токсичности определяли в соответствии с руководством по «Надлежащей лабораторной практике» ТКП 125 – 2008 (02040) и «Руководству по экспериментальному (доклиническому) изучению новых фармакологических веществ» [1; 3 с. 45]. Эксперименты на животных проводили в соответствии с правилами, принятыми Европейской Конвенцией по защите позвоночных животных, используемых для экспериментальных и иных научных целей [4], и Приказом МЗ СССР № 755 от 12.08.1977 [2].

Теоретическая и аналитическая часть работы выполнена в условиях кафедры фармакологии, токсикологии и радиобиологии Казанской ГАВМ имени Н.Э. Баумана.

Объектом исследования являлось средство на основе сырья природного происхождения под лабораторным шифром «N-98».

Параметры острой токсичности комплексного средства «N-98» определяли на 32 лабораторных мышах с исходной массой тела 19-24 г., выдержанные в условиях карантина на протяжении 14 суток. Комплексное средство вводили интрагастрально и внутримышечно в максимально допустимых дозах для данного вида животных.

При интрагастральном введении были сформированы 1 опытная и 1 контрольная группы, в каждой из которых содержались по 4 самца и 4 самки белых мышей. При этом внутрижелудочное введение комплексного средства осуществляли после предварительной 12часовой голодной диеты лабораторных животных. Мышам опытной группы комплексное средство «N-98» вводили с помощью атравматического зонда однократно в объеме 0,5 мл, что соответствует максимальной дозе для данного вида животных. Лабораторным мышам контрольной группы вводился физиологический раствор в соответствующей дозировке.

При внутримышечной инокуляции также были сформированы опытная и контрольная группы, в каждой из которых содержались по 4 самца и 4 самки белых мышей. Комплексное средство «N-98» вводилось внутримышечно в каудальную часть бедра в дозе 0,5 мл однократно. Мышам контрольной группы инъецировался физиологический раствор в соответствующей дозировке (Таблица 1).

Таблица 1 – Схема использования средства «N-98» белым мышам при определении параметров острой токсичности

Группа	Количество животных в группе/ использованное средство	Гендерная принадлежность		VO § О ч С О (J и м	2 св" м О ^	О S О щ Щ £ н Он М
		самец	самка
1 – опытная	8/ «N-98»	4	4	рer os	0,5	1
2 – опытная	8/ «N-98»	4	4	в/м	0,5	1
3-контрольная	8/физраствор	4	4	per os	0,5	1
4-контрольная	8/физраствор	4	4	в/м	0,5	1

Результат исследований. В ходе проводимого эксперимента установлено, что отклонения в физиологических показателях лабораторных животных опытной и контрольной групп до включения в опыт не имели существенных различий. Но после интрагастрального введения и внутримышечной инокуляции были отмечены особенности в их поведении.

В частности, белые мыши опытной группы при пероральном введении были угнетены, отмечались болевые реакции в виде корчей, при этом мыши перемещались из стороны в сторону, сбивались в кучу. Наравне с этим отмечалось угнетение дыхательных движений вплоть до их кратковременного прекращения (5…7 сек). Восстановление дыхания произошло к концу первого часа наблюдения.

По истечению первых суток проводимого эксперимента наблюдались восстановление поведения, потребление корма и груминг лабораторных животных. Изменения со стороны слизистых оболочек и волосяного покрова не установлены.

При внутримышечной инокуляции объекта исследования животные были встревожены, забивались в угол, дыхание при этом становилось поверхностным и учащенным. Нормализация физиологических процессов происходила в течение первых 30 минут после инокуляции, а спустя первые 4…6 часов животные становились активными, осуществляли груминг и потребляли корм.

Помимо оценки поведенческих реакций было изучено влияние комплексного средства «N-98» на показатели массы тела. В ходе эксперимента установлено, что средство на основе сырья природного происхождения не ингибирует массу тела белых мышей как при внутреннем, так и при внутримышечном введении. Результаты взвешивания представлены в таблице 2, из которой видно, что разница между группами по абсолютному приросту массы тела была достоверно не различимой.

При анализе сохранности животных гибель мышей не наблюдалась ни в одной из групп (Таблица 3).

Таблица 2 – Динамика массы тела белых мышей после однократного введения «N-98» (M±m; n=8)

cd С С	Вводимый компонент	Масса тела, г
		пероральное введение		внутримышечное введение
		До	14 сутки	До	14 сутки
1	Физиологический раствор	21,1±0,6	21,9±0,8	23,3±1,0	23,9±0,8
2	«N-98»	22,4±0,5	23,1±0,4	23,0±1,1	23,4±0,9

Таблица 3 – Определение острой токсичности средства «N-98» на белых мышах

cd С С	Вводимый компонент	Способ введения	Объем вводимой жидкости, мл	Количество животных в группе	Пало животных	Выжило животных
1	Физиологическ ий раствор	в/ж	0,5	8	0	8
		в/м	0,5	8	0	8
2	«N-98»	в/ж	0,5	8	0	8
		в/м	0,5	8	0	8

На 14 сутки проводимого эксперимента произведено вскрытие лабораторных животных с патологоанатомической оценкой внутренних органов. Визуально отмечено отсутствие характерных патологических изменений в макроструктуре органов.

Заключение. Комплексное средство под лабораторным шифром «N-98» является безопасным в токсикологическом отношении при внутрижелудочном и внутримышечном введении, поскольку не вызывает гибели белых мышей, при этом нормализация физиологических процессов наступает в течение первого дня проводимого эксперимента и отмечается отсутствие ингибирующего влияния объекта исследования на прирост массы тела лабораторных животных. Также отсутствуют изменения в макроструктуре внутренних органов на момент вскрытия. Согласно классификации Л.И. Медведь, Ю.С. Кагана, Е.И. Спыну (1964) средство может быть отнесено к IV классу опасности (вещества малоопасные),

Резюме

В данной статье приведены результаты исследования острой токсичности комплексного средства под лабораторным шифром «N-98» на белых мышах. Дана оценка их общего состояния на момент интрагастрального и внутримышечного введения средства на основе сырья природного происхождения и в течение 14 суток после его использования, а также показатели массы тела и результаты вскрытия с последующим описанием состояния внутренних органов.

На основе полученных данных сделано заключение, что комплексное средство под лабораторным шифром «N-98» в токсикологическом отношении безопасно для белых мышей, так как не вызывает их гибели и характерных патологических изменений их органов на момент вскрытия.