Факторы локального клеточного иммунитета при меланоме кожи

Материалы и методы. Исследование было проведено на пациентах, госпитализированных в отделение опухолей кожи, мягких тканей и молочной железы № 2 Ростовского научно-исследовательского онкологического института с октября 2014 по март 2015 гг. В изучаемую группу вошли больные меланомой кожи с расположением патологического очага на верхних (3) и нижних конечностях (3), волосистой части головы (2), туловище (4), лице (2), из которых 8 женщин и 6 мужчин в возрасте от 34 до 82 лет.

По морфологической форме преобладала узловая меланома с глубиной инвазии от 2 до 15 мм по Бреслоу. Одна пациентка имела отдаленные метастазы в легкие, у двоих больных имелось метастатическое поражение регионарного коллектора. Все случаи заболевания были первичными, неоадъювантного лечения не получали. Больным было проведено хирургическое лечение в объеме широкого иссечения опухоли с пластикой местными тканями (7), свободным кожным лоскутом (5), встречными кожно-жировыми лоскутами (1), ротационным кожно-жировым лоскутом (1).

Пациентам с наличием метастазов в регионарных лимфатических узлах дополнительно проводилась лимфодиссек-ция. Объектом изучения являлись фрагмент ткани опухоли и кровь. Исследования проводились не позднее, чем через час после хирургического лечения на свежем послеоперационном материале и крови, взятой перед проведением операции. Кровь брали из локтевой вены в пробирку и антикоагулянтом (ЭДТА). Удаленные опухоли подвергались патоморфологи-ческому исследованию; кроме того, отдельные фрагменты опухолевой ткани и перитуморальной зоны (визуально неизменной ткани, прилежащей к опухоли), гомогенизировали с помощью дезагрегирующего устройства BD Medimachine. В крови и в гомогенатах тканей определяли популяционный и субпопуляционный состав лимфоцитов на проточном цитометре FACSCantoII (BD) с панелью антител T-, B-, NK (CD45, CD3, CD4, CD8, CD19, CD16/56), дополнительно изучали количественное содержание Т-регуляторных (T-regs) клеток (CD4+CD25+CD127dim). Результаты выражали в процентах от общего количества лимфоцитов, а для T-regs в процентах от CD3+CD4+ клеток.

Результаты. Результаты исследования демонстрируют ряд различий лимфоцитарного состава опухоли и ее окружения от показателей крови. Так, уровень Т-лимфоцитов в опухоли статистически достоверно выше, чем в крови (87,7±2,8 и 68,6±3,0% соответственно), а содержание В- и NК-лим-фоцитов – ниже (3,2±0,5 против 10,3±1,5% и 7,1±2,2 против 20,0±2,2% соответственно); р<0,05. В опухоли отмечено накопление T-regs, количество которых в процентах от CD3+CD4+ клеток оказалось в 3 раза выше, чем в крови (20,7±2,9 и 6,85±0,6 соответственно (р<0,05), хотя по общему уровню CD3+CD4+ лимфоцитов кровь и опухолевая ткань не имели статистически достоверных различий.

Состав лимфоцитарных популяций и субпопуляций ткани перитуморальной зоны демонстрирует ряд отличий от показателей как крови, так и опухолевой ткани. По сравнению с кровью в ней выявлено статистически значимо больше CD3+CD4+ лимфоцитов (53,1±3,3% против 43,5±2,4% в крови и 42,0±2,7% в опухолевой ткани) и меньше CD3+CD8+ (21,6±1,7% против 43,5±2,4% в крови и 40,0±3,2% в опухоли), а также CD19+ клеток.

По сравнению с тканью опухоли перитуморальная область содержит меньше T-regs (9,96±2,2 против 20,7±2,9%) на фоне

XIX РОССИЙСКИЙ ОНКОЛОГИЧЕСКИЙ КОНГРЕСС

МЕЛАНОМА

более высокого уровня CD3+CD4+ клеток. Интересно отметить, что CD3+CD4+ лимфоциты, включающие, как известно, T-regs в качестве минорной субпопуляции, концентрируются в перитуморальной зоне, однако, в саму опухолевую ткань попадают преимущественно T-regs.

Несмотря на то, что статистически достоверных различий между содержанием CD16/56+ клеток в опухоли и в пе-ритуморальной зоне не получено, отмечается постепенное снижение их уровня от периферической крови через пери-туморальную зону к опухоли, причем такая направленность противоположна наблюдаемой для T-regs.

Заключение. В ткани меланомы определяется высокое количество Т-лимфоцитов при более низком содержании Ви NК-клеток по сравнению с кровью, а также высокий уровень T-regs. По содержанию CD3+CD4+ и CD3+CD8+ лимфоцитов ткань меланомы ближе к крови, чем ткань перитумораль-ной зоны. Тем не менее, накопление в опухоли клеток обеих основных Т-клеточных субпопуляций, потенциально обладающих способностью к распознаванию антигенов, продукции цитокинов, а также цитотоксичостью, не реализуется в виде противоопухолевого действия.