Физиологические изменения в гемостазе у телят и поросят, оказавшихся в неблагоприятных условиях среды при применении катозала

Кеуwords: calves, piglets, hypothermia, physiology, hemocoagulation, platelets, cathosal

Разведение крупного рогатого скота и свиней в настоящее время является надежной основой получения продуктов питания в современном обществе [15]. Для обеспечения продовольствием населения во многих странах ставится задача интенсификации выращивания телят и поросят при максимально высокой их сохранности, в первую очередь, за счет правильного применения современных технологий кормления и содержания [2]. Становится ясно, что особо важной для обеспечения жизнеспособности и успешного течения процессов анаболизма во всем организме животных является система крови. Постепенно приходит осознание большого значения ее гемостатических параметров, способных влиять на процессы перфузии в тканях, и таким образом на формирование продуктивных параметров организма животного [3]. Наука считает, что кровь – наиболее достоверный и чуткий маркер функционального статуса организма, способный быстро реагировать на изменения всех условий среды. Чем сильнее выражено воздействие на организм, тем более значимыми будут изменения в составе крови организма. По причине большой физиологической значимости и серьезной уязвимости всей системы гемостаза ее стали активно изучать у разных животных в условиях нормы и патологии [4].

Надежным и проверенным вариантом ускорения в организме животного течения анаболических процессов и усиления фенотипического проявления обусловленных наследственно соматических признаков даже при отрицательных влияниях среды, считается использование разных стимулирующих воздействий [10]. В их числе находятся увеличение мышечной активности [13], изменение схем кормления и использование различных биостимуляторов, показавших свою высокую эффективность в отношении различных биологических объектов [12]. Одним из весьма перспективных биологических стимуляторов организма в настоящее время можно рассматривать катозал, который может обеспечить существенную стимуляцию многих жизненных процессов в организме разных видов животных [5, 7].

Кровь, меняя свои параметры, в том числе гемостатические, может сама воздействовать на функциональный статус организма в целом. В этой связи представляло очень большой интерес выполнить оценку воздействия катозала на гемостатические параметры у телят и поросят, попавших в нефизиологические условия среды содержания.

Цель работы: определить влияние катозала на систему гемостаза у телят и поросят, ослабленных в результате случайного переохлаждения.

Материал и методы исследований.

Исследование выполнено на 42 здоровых помесных бычках в возрасте 3,5 месяца и на 48 помесных хряках в возрасте 3 месяца, содержащихся в условиях хозяйства Брянской области России. Телята и поросята были включены в исследование сразу после внепланово наступившего переохлаждения (снижение температуры среды до 5 °C в зимний период) в результате случайной поломки системы отопления в телятнике и свинарнике на 3 часа. Состав рациона взятых под наблюдение животных был стандартным.

Телята и поросята, перенесшие эпизод переохлаждения, случайным способом были разделены на экспериментальные и первые контрольные группы. Экспериментальные группы состояли из 23 бычков и 25 поросят, получавших препарат катозал (производство «ВауеrHealthCare LLC», США) по 10,0 мл в виде внутримышечных инъекций в течение 10 дней подряд после произошедшего переохлаждения. Инъекции были начаты на следующий день после переохлаждения. Все животные экспериментальных групп находились в последующем на сбалансированном рационе и в оптимальных условиях среды. Первые группы контроля состояли из 19 бычков и из 23 поросят, перенесших эпизод внепланового переохлаждения и затем находящихся в оптимальных условиях на оптимальном рационе. Все телята и поросята в этих группах были обследованы по примененным в работе методикам двукратно: в день переохлаждения и спустя 12 суток после него, т.е. через сутки после завершения применения катозала в экспериментальных группах животных.

Вторая группа контроля включала 26 телят и 29 поросят полностью здоровых и ранее не испытывавших каких-либо негативных влияний внешней среды. Эти животные были обследованы однократно.

У всех животных оценивали количество в крови фибриногена с помощью модифицированного теста Клауса [1]. Регистрация концентрации плазминогена выполнялась в их крови с помощью хромогенных субстратов («DadeBehring», Германия), применяя стандартный кинетический метод с применением прибора ФП-901 («LabSystems», Финляндия). Количество растворимых комплексов фибринмономеров выявляли визуальным способом, применяя наборы реагентов Российского предприятия Технология-стандарт [1]. Величину активированного частичного тромбопластинового время, оценивали при помощи прибора коагулометра «HumaClot» («HUMANGmbH», Германия), используя набор реактивов HemoStataPTT-EL. Оценку значения международного нормализованного отношения выполняли с помощью стандартной методики Квика [1]. Агрегационные возможности кровяных пластинок определяли с помощью двухканального лазерного анализатора процесса тромбоцитарной агрегации («Биола», Россия), работа которого была основана на применении турбодиметрического метода. В исследовании использованы индуктор агрегации аденозиндифосфат (АДФ) в виде раствора с концентрацией 0,5 мкМ [9].

Математическая обработка найденных в исследовании данных велась при помощи t-критерия Стьюдента.

Результат исследований.

Проведена регистрация параметров гемостаза у телят, испытавших внеплановый эпизод переохлаждения. Она позволила выявить активацию состояния функций тромбоцитов и гемокоагуляции и ослабление фибринолитической системы (Таблица 1). Состояние функциональных параметров телят в начале проведенного наблюдения в обоих группах, испытавших переохлаждение сходным образом, физиологически не выгодно отличалось от уровня во второй группе контроля.

На момент завершения наблюдения у телят, получавших катозал, выявлено статистически значимое удлинение активированного частичного тромбопластинового времени (на 22,4 %), повышение уровня международного нормализованного отношения (на 8,9 %) и активности плазминогена (на 8,7 %), уменьшение содержания в крови фибриногена (на 41,7 %) и концентрации растворимых       фибрин-мономерных     учтенных параметров на уровень группы комплексов (на 32,0 %) с выходом всех      второго контроля.

Таблица 1 –Динамика параметров гемостаза у обследованных телят

Показатель гемостаза	Экспериментальная группа, n=23		Первый контроль, n=19		Второй контроль, n=26
	начало	конец	начало	конец
Фибриноген, г/л	3,4±0,26**	2,4±0,12	3,3±0,25**	3,8±0,36**	2,3±0,25
Растворимый        фибрин мономерный комплекс, мг/дл	3,3±0,31**	2,5±0,26	3,2±0,32**	3,9±0,33**	2,5±0,61
Активированное   частичное тромбопластиновое время), с.	30,4±0,74**	37,2±0,33	29,9±1,07**	26,2±0,73**	37,4±0,79
Международное нормализованное отношение	1,12±0,13*	1,22±0,16	1,11±0,04*	1,08±0,13*	1,23±0,08
Плазминоген, %	86,5±0,59*	94,0±0,45	86,2±0,77*	83,2±0,83*	93,8±0,72
Агрегация тромбоцитов с АДФ, Ед.	2,36±0,21*	2,00±0,27	2,31±0,12*	2,92±0,22**	2,02±0,18
Спонтанная агрегация тромбоцитов, Ед.	1,19±0,14*	1,01±0,09	1,18±0,16*	1,32±0,14**	1,02±0,16

Условные обозначения: статистическая достоверность различий показателей от уровня значений второго контроля: *P<0,05, **P<0,01. В следующей таблице обозначения аналогичные

Таблица 2 –Динамика параметров гемостаза у обследованных поросят

Показатель гемостаза	Экспериментальная группа, n=25		Первый контроль, n=23		Второй контроль, n=29
	начало	конец	начало	конец
Фибриноген,г/л	3,4±0,27**	2,3±0,32	3,3±0,34**	3,9±0,57**	2,4±0,38
Растворимый       фибрин мономерный комплекс, мг/дл	3,3±0,25**	2,3±0,26	3,2±0,22**	4,0±0,29**	2,4±0,55
Активированное   частичное тромбопластиновое время), с.	31,0±0,74**	38,6±0,49	30,8±1,21**	26,4±0,60**	38,4±0,75
Международное нормализованное отношение	1,10±0,10*	1,24±0,16	1,09±0,07*	1,06±0,21*	1,24±0,11
Плазминоген, %	86,2±0,51*	94,8±0,53	86,6±0,73*	82,3±0,65*	95,1±0,34
Агрегациятромбоцитовс АДФ, Ед.	2,29±0,17*	1,99±0,23	2,31±0,12*	2,87±0,22**	1,96±0,18
Спонтанная агрегация тромбоцитов, Ед.	1,20±0,09*	1,03±0,13	1,19±0,16*	1,36±0,15**	1,04±0,19

В первой группе контроля в конце исследования отмечено уменьшение показателя активированного частичного тромбопластинового времени (на 14,1 %), найдена тенденция к понижению величины международного нормализованного отношения (на 2,7 %) и функциональных возможностей плазминогена (на 3,6 %) при нарастании в крови этих животных количества фибриногена (на 15,1 %) и растворимых комплексов фибринмономерных (на 21,9 %), что во всех случаях отдаляло учитываемые показатели от значений второй группы контроля.

В конце наблюдения у телят экспериментальной группы выявлено понижение уровня агрегации тромбоцитов развивающейся спонтанно на 17,8 %, возникающей при стимуляции – на 18,0 %. В первой группе контроля в конце исследования развивающаяся спонтанно и на фоне АДФ воздействия агрегация тромбоцитов значимо повысились, превалируя над исходными величинами на 11,9 и 26,4 %, соответственно. Различия по уровням агрегации тромбоцитов между экспериментальной группой и первым контролем к концу исследования составляли для спонтанно возникшего процесса 30,7% (Р<0,01), для процесса, вызванного АДФ – 46,0 % (Р<0,01).

Выполненная оценка активности гемостаза у взятых в исследование поросят позволила установить его усиление у попавших в неблагоприятные условия среды животных (Таблица 2). Величины учтенных параметров гемостаза этих поросят достоверно отличались от их уровня во второй группе контроля, которая не испытала переохлаждения. На момент завершения наблюдения в группе поросят, которые получали катозал выявлено достоверное увеличение длительности активированного частичного тромбопластинового времени (на 24,5 %), нарастание международного нормализованного отношения (на 12,7 %), рост активности плазминогена (на 9,2 %), уменьшение содержания в плазме фибриногена (на 47,8 %) и способных к растворению комплексов фибринмономеров (на 43,5%) с выходом всех регистрируемых параметров на уровень второй группы контроля.

В первой группе контроля в конце наблюдения отмечено некоторое ускорение развития, активированного частичного тромбопластинового времени (на 16,7 %), тенденция к понижению показателя международного нормализованного отношения (на 2,8 %) и биологических возможностей плазминогена (на 5,2 %) при увеличении количества в крови этих животных фибриногена (на 18,2 %) и росте уровня способных к растворению комплексов фибрин-мономеров (на 25,0 %).

В конце проведенного исследования у поросят экспериментальной группы удалось установить понижение выраженности агрегации тромбоцитов спонтанно развивающейся на 16,5 %, простимулированной добавлением АДФ – на 15,1 %. При этом у поросят первого контроля тромбоцитарная агрегация спонтанная и вызванная АДФ – статистически значимо повысились, превысив изначальные значения на 14,3 и 24,2 %, соответственно. Отличия между экспериментальной группой животных и первой группой контроля поросят по состоянию агрегации тромбоцитов к концу проводимого наблюдения составили для спонтанного процесса 32,0 % (Р<0,01), для процесса, простимулированного индуктором – 44,2 % (Р<0,01).

Все соматические характеристики живого организма строго генетически запрограммированы и формируют морфофункциональные его основы с учетом влияния благоприятных или неблагоприятных факторов из внешней среды [3]. В этой связи по-прежнему весьма актуальны дальнейшие подробные исследования основных аспектов жизнедеятельности живых организмов особенно под влиянием негативных факторов среды с выяснением наступающих последствий их действия [6]. Продолжение исследований в области физиологии крупного рогатого скота и свиней могут формировать надежную базу для грамотной разработки технологий по их физиологически обоснованному содержанию и полноценному кормлению [12]. Вследствие суммации достигаемых в условиях этих наблюдений сведений и их применения на практике можно добиться интенсификации отечественного животноводства и свиноводства [8].

В ходе более ранних наблюдений было выяснено на различных живых организмах, что гемостаз способен быстро реагировать на негативные влияния из среды в форме появления разной степени выраженности дисфункций и развития признаков патологии [13]. Становится ясно, что ослабление выраженности избыточного перекисного окисления липидов при проведении грамотной биостимуляции может весьма положительно влиять на живой организм. Признается, что в этих условиях наступает физиологически желательное понижение активности основных компонентов гемостаза и улучшение реологических параметров крови. Во многом с изменениями гематологических параметров связывают динамику микроциркуляции и изменение метаболизма на фоне многих вариантов биостимулирующих воздействий на организм животных [10].

Выполненное исследование установило позитивные результаты влияния катозалана параметры гемостаза у телят и поросят, случайно попавших под переохлаждение. При этом в первых группах контроля к концу наблюдения результаты оказались негативно направленными, что создавало достоверные отличия регистрируемых параметров между животными, перенесшими эпизод переохлаждения, в экспериментальных и в первых контрольных группах.

Найденные в работе результаты дают основания считать, что введение во внутреннюю среду организма теленка или поросенка, испытавшего эпизод переохлаждения, катозала сдерживает излишнюю гемокоагуляцию по двум ее путям осуществления. Несомненно, это вызвано уменьшением функциональных характеристик основных факторов системы свертывания осуществляющих гемокоагуляцию. Видимо, в крови данных телят и поросят происходило существенное ослабление синтеза тромбопластина и сдерживание контактной активизации XII фактора. Введение в организм животных катозала обеспечивало также снижение в их крови количества фибриногена и концентрации растворенных в плазме фибрин-мономерных комплексов. Это говорило о физиологически оправданном ослаблении процесса полимеризации фибрина, в оптимальной степени тормозилось активированным фибринолизом. У телят и поросят первых контрольных групп найдены противоположные проявления, ведущие к интенсификации всего процесса гемокоагуляции и ослаблению выраженности фибринолиза.

Известны факты о применении катозала у разных видов животных с возможностью повышения им антиоксидантной защиты их организма, что может снижать активность гемостаза и в том числе в части активности тромбоцитов [14]. В этой связи можно предполагать, что применение катозала способно стимулировать в тромбоцитах синтез циклического аденозин монофосфата и тормозить генерацию в них тромбоксана

А 2. Данная ситуация неизбежно уменьшает частоту появления тромбоцитарных агрегатов в крови животных, получающих препарат. Найденное у животных первых групп контроля усиление агрегационной возможной тромбоцитов, очевидно, вызвано уменьшением в их кровяных пластинках количества циклического аденозинмонофосфата и ростом генерации тромбоксана А 2 [8]. Это в конечном итоге ведет к повышению в их крови количества свободно плавающих агрегатов из активированных кровяных пластинок [11].

Существует мнение о четкой взаимосвязи физиологического состояния и уровня выраженности хозяйственно полезных качеств животных с выраженностью их гематологических показателей [3]. В выполненной работе выяснена динамика гемостаза только на протяжении фрагмента раннего онтогенеза и поэтому несколько рано делать окончательные выводы о влиянии катозала на гемостаз телят и поросят, подвергшихся воздействию неблагоприятных факторов в течение всего раннего онтогенеза. В то же время установлена потенциальная возможность оптимизировать функции гемостаза, измененные влиянием неблагоприятных средовых факторов путем применения катозала. Данный момент является серьезным стимулом для последующих детальных исследований влияния данного препарата не только на продуктивные характеристики телят и поросят, но на работу параметров гемостаза на протяжении всего раннего онтогенеза. Кроме того, есть основания ожидать обнаружение в будущих научных наблюдениях связи между динамикой активности гемостаза и продуктивными параметрами телят и поросят.

Заключение. После эпизода переохлаждения у телят и поросят происходит значительная активация гемостаза, что всегда весьма негативно влияет на процессы микроциркуляции во всех их органах и тем самым может сильно снижать темпы приростов. Использование у этих животных катозала ведет к устранению активации плазменного гемостаза и торможению агрегационных проявлений кровяных пластинок, что весьма позитивно влияет на всю гемомикроциркуляцию и улучшает прогноз в плане продуктивных показателей животных.

Резюме

Катозал является надежным биостимулятором для продуктовых животных. Он способен увеличивать их общую жизнеспособность, но его влияние на параметры гемостаза остается не до конца выяснено. Применение катозала сопровождалось у перенесших эпизод переохлаждения телят и поросят достоверным снижением агрегации тромбоцитов спонтанной и стимулированной. В результате применения катозала у этих телят и поросят достигнуто уменьшение активности гемокоагуляции, что оптимизировало гемоциркуляцию. У телят и поросят первых групп контроля найдено нарастание выраженности агрегации тромбоцитов и активизация гемокоагуляции. Это негативно влияло у них на гемореологию и тормозило метаболизм в их органах. У телят и поросят первых групп контроля наступала активация гемостаза, что сочеталось с уменьшением величины приростов. Таким образом, применение у испытавших эпизод переохлаждения телят и поросят катозала сопровождается снижением активности плазменного гемостаза и гемостатических характеристик тромбоцитов, что улучшает перфузию их тканей и стимулирует приросты.