Физиологические параметры гемостаза у животных, получавших ферроглюкин и гликопин

До сих пор в хозяйствах, занимающихся разведением и выращиванием крупного рогатого скота, у молодняка в течение фазы новорождённости может встречаться дефицит железа [10]. Известно, что это состояние нарушает процессы роста телят, ослабляет их резистентность, увеличивая падёж животных [1]. Замечено, что при многих дисфункциях в организме, в том числе при различных дефицитных состояниях, происходит активация системы гемостаза с появлением тромбофилии [4, 6].

Достаточно частая встречаемость железодефицитного состояния у телят является основой высокой частоты регистрации у них гемостазиопатии [5, 9]. Вместе с тем, состояние гемостаза при подобных нарушениях до сих пор исследовано слабо. Также остаются не разработаны действенные варианты коррекции нарушений гемостаза при дефиците железа. До сих пор не выяснена динамика активности компонентов гемостаза телят в случае применения у них современных биостимуляторов, в том числе гликопина (глюкозаминилмурамилдипептида).

Внимание к этому средству вызвано его высокой эффективностью в плане стимуляции многих иммунных реакций и метаболизма при большом числе дисфункции [2]. До сих пор не выяснен коррекционный потенциал этого варианта воздействия на формирующиеся при дефиците железа гемостатические нарушения.

Учитывая имеющиеся пробелы в системе научных знаний, в работе поставлена цель – оценить результат применения ферроглюкина и гликопина на состояние гемостаза у новорожденных телят, имеющих признаки дефицита железа.

Материал и методы исследований. Исследование выполнено в соответствии с нормами Европейской конвенции по защите позвоночных, которые используются в экспериментальных целях (была принята в Страсбурге 18 марта 1986 года и была подтверждена в Страсбурге 15 июня 2006 года).

Исследование проведено на 45 новорожденных телятах с дефицитом железа. В группу контроля были включены 29 здоровых новорожденных телят. Количества тиобарбитуровой кислоты активных продуктов и ацилгидроперекисей регистрировали в плазме традиционными способами. Учитывали значение антиокислительного потенциала крови. Оценка агрегации тромбоцитов проводилась традиционно визуальным методом в плазме с количеством тромбоцитов 200 * 109 тромбоцитов в 1 литре [3]. Состояние внутрисосудистой активности тромбоцитов оценивали с помощью фазово-контрастной микроскопии.

Активность антиагрегационных свойств стенок сосудов выясняли путём применения пробы с временной венозной окклюзией [3]. В ходе неё регистрировали агрегацию тромбоцитов со всеми применёнными индукторами. Опираясь на полученные результаты, проводили расчёт величины индекса антиагрегационной активности сосудистой стенки. Его осуществляли путём деления величины времени агрегации тромбоцитов в плазме, взятой при создании временного венозного застоя на ее уровень в плазме без него. Ве- личину индекса антикоагуляционной активности стенки сосуда у телят выясняли в ходе деления активности антитромбина III в плазме, взятой после наложения манжетки на сосуд, на его значение в интактной плазме [3]. Контроль сосудов над фибринолизом вели, учитывая время эуглобулинового лизиса в плазме, взятой на фоне временной венозной окклюзии, и в плазме, полученной без нее [3]. Индекс фибринолитической активности стенки сосудов ре- гистрировали путем деления времени эуглобулинового лизиса без окклюзии на его показатель в плазме, которую получили на её фоне.

Коагуляционные свойства плазмы у телят определяли по показателям активированного парциального тромбопластинового, тромбинового и протромбинового времени [3]. Всем телятам с дефицитом железа вводили внутримышечно один раз ферроглюкин по 75 мг (1 мл) и выпаивали гликопин в дозе 6 мг/сутки 6 суток подряд. Статистическая обработка полученных результатов проведена с использованием t-критерия Стьюдента.

Результаты исследований. У обследованных телят опытной группы отмечены следующие нарушения их состояния: отсутствие интереса к окружающему, слабость, бледность видимых слизистых.

У анемичных телят установили высокий уровень свободнорадикального окисления липидов в плазме (концентрация ацилгидроперекисей плазмы превосходила уровень контроля на 18,5 %, количество тиобарбитуровой кислоты-активных продуктов оказалось выше контрольного уровня на 19,6 %) при ослаблении антиоксидантной защиты плазмы на 17,8 % по сравнению с контролем (до 22,4±0,19 %).

Количество тромбоцитов у животных всех групп оказалось нормальным. При этом агрегация тромбоцитов у опытных телят была ускоренной по сравнению с контролем. Наиболее быстро агрегация шла с коллагеном, развиваясь раньше, чем в контроле на 60,2% (19,6-0,17 с). Также наступали раньше, чем в контроле АТ с АДФ и ристомицином. Позднее развивалась АТ с тромбином (37,0-0,09 с), уступая контролю на 45,4 %. Позднее всего агрегация тромбоцитов опытных телят происходила с адреналином (69,7-0,10 с), отличаясь от контроля на 40,0 % (Таблица 1).

Таблица 1 – Показатели системы гемостаза у обследованных телят

Параметры регистрации	Контроль, n=29, M±m	Опытная группа, n=45, M±m
		начало	конец
Тромбоцитарная агрегация с АДФ, с	40,2±0,08 р<0,01	25,2±0,12	40,0±0,06; р 1 <0,01
Тромбоцитарная агрегация с коллагеном, с	31,4±0,08; р<0,01	19,6±0,17	31,2±0,05; р 1 <0,01
Тромбоцитарная агрегация с тромбином, с	53,8±0,07; р<0,01	37,0±0,09	54,0±0,14; р 1 <0,01
Тромбоцитарная агрегация с ристомицином, с	48,0±0,12; р<0,01	22,6±0,18	47,9±0,08; р 1 <0,01
Тромбоцитарная агрегация с адреналином, с	97,6±0,06; р<0,01	69,7±0,10	97,8±0,05; р 1 <0,01
Тромбоциты-дискоциты, %	77,7±0,11; р<0,01	58,6±0,26	78,3±0,10; р 1 <0,01
Тромбоциты активированные, %	22,3±0,11; р<0,01	41,4±0,25	21,7±0,09; р 1 <0,01
Мелкие агрегаты на 100 тромбоцитов	3,5±0,06; р<0,01	14,5±0,09	3,7±0,12; р 1 <0,01
Крупные агрегаты на 100 тромбоцитов	0,14±0,007; р<0,01	3,18±0,23	0,12±0,003; р 1 <0,01
Индекс антиагрегационной стенки сосудов с АДФ	1,67±0,12; р<0,01	1,45±0,06	1,67±0,08; р 1 <0,01
Индекс антиагрегационной стенки сосудов с коллагеном	1,58±0,02; р<0,01	1,36±0,12	1,56±0,09; р 1 <0,01
Индекс антиагрегационной стенки сосудов с тромбином	1,56±0,05; р<0,01	1,40±0,11	1,56±0,02; р 1 <0,01
Индекс антиагрегационной стенки сосудов с ристомицином	1,51±0,04; р<0,05	1,46±0,11	1,51±0,05; р 1 <0,01
Индекс антиагрегационной стенки сосудов с адреналином	1,64±0,07; р<0,01	1,41±0,07	1,65±0,05; р 1 <0,01
Антитромбин-III, %	99,3±0,16; р<0,01	83,9±0,23	99,7±0,16; р 1 <0,01
Антитромбин-III после временной венозной окклюзии, %	130,5±0,06; р<0,01	104,9±0,16	130,6±0,16; р 1 <0,01
Значение индекса антикоагулянтной активности сосудов	1,31±0,03; р<0,01	1,25±0,05	1,31±0,04;
Интактное время спонтанного эуглобулинового лизиса, мин.	182,0±0,39; р<0,01	239,2±0,26	182,6±0,39; р 1 <0,01
Сспонтанный эуглобулиновый лизис после временной венозной окклюзии, мин.	252,6±0,50; р<0,01	296,3±0,19	253,0±0,05; р 1 <0,01
Индекс фибринолитической активности сосудов	1,39±0,10; р<0,01	1,24±0,08	1,38±0,03; р 1 <0,01
Значение тромбопластинового парциального времени, с	39,7±0,34; р<0,01	28,2±0,38	39,4±0,42; р 1 <0,01
Величина протромбинового времени, с	17,4±0,23; р<0,01	12,4±0,24	17,2±0,36; р 1 <0,01
Величина тромбинового времени, с	17,2±0,21; р<0,01	16,0±0,15	17,1±0,19; р 1 <0,01

Достоверность различий: р – контроля и исхода, р 1 – динамики на фоне воздействия

У опытных телят отмечено уменьшение дискоидных тромбоцитов. Активные тромбоциты у них были повышены на 85,6 %, достигая уровня 41,4±0,25 %. Количества малых и больших агрегатов у телят с дефицитом железа были выше значений контроля в 3,9 раза и в 26,5 раза, соответственно составляя 14,5±0,09 и 3,18±0,23 на 100 свободных тромбоцитов. У взятых под наблюдение телят опытной группы было найдено снижение по сравнению с уровнем контроля величины индекса антиагрегационной активности сосудистой стенки в отношении всех испытанных индукторов агрегации. Самым низким оказалось значение этого индекса в отношении коллагена (уступал контролю на 14,7 %). Немного выше было значение индекса антиагрегационной активности сосудистой стенки в отношении адреналина (был ниже контроля на 17,0 %)

и тромбина (уступал контролю на 9,3 %). Еще выше были индексы антиагрегационной активности сосудистой стенки в отношении АДФ и ристомицина. Они были ниже контрольного уровня на 15,2 % и на 11,4 %, соответственно.

У телят опытной группы, судя по индексу антикоагуляционной активности стенок их сосудов (снижение относительно контроля на 4,8 %), имелась тенденция к ослаблению антикоагулянтных характеристик сосудов.

Фибринолитические возможности сосудов телят опытной группы, определяемые выработкой в них тканевых активаторов плазминогена, были снижены. На это указывало понижение величины индекса фибринолитической активности сосудов, он уступал в нем контролю на 11,3 %.

Для животных опытной группы также оказалось свойственно ускорение процесса свёртывания крови по внешнему пути по сравнению с контролем на 38,7 % (величина протромбинового времени составляла 12,4±0,24 с), по внутреннему пути на 39,7 % (значение активированного парциального тромбопластинового времени составляло 28,2±0,38 с) и активизация по сравнению с контролем на 6,9 % трансформации фибриногена в фибрин (тромбиновое время достигло 16,0±0,15 с).

Применение испытываемых препаратов обеспечило у наблюдаемых телят улучшение их общего состояния, повышение уровня железа в их крови и оптимизацию активности гемостаза. У телят в плазме нормализовалось количество ацилгидроперекисей (1,45±0,18 Д 233 /1 мл), тиобарбитуровая кислота-активных продуктов (3,43±0,21 мкмоль/л) при оптимизации антиоксидантной активности крови с выходом этих показателей на контрольный уровень.

В ходе коррекции у телят опытной группы наступило торможение до нормы агрегации тромбоцитов. Наиболее активным индуктором был коллаген. Чуть слабее были АДФ и ристомицин. Еще менее активными в плане развития АТ были тромбин и адреналин.

Проведённая коррекция сопровождалась у телят опытной группы полной нормализацией внутрисосудистой активности тромбоцитов. В их крови отмечено повышение числа тромбоцитов-дискоцитов до уровня 78,3±0,10 % при снижении суммы активных разновидностей тромбоцитов до уровня 21,7±0,09 %, что соответствовало уровню контроля. Это обеспечило сокращение до уровня контроля в их крови количества способных циркулировать агрегатов любого размера.

В результате проведённой у опытных телят коррекции отмечено нарастание до уровня группы контроля значений индексов антиагрегационной активности сосудистой стенки в отношении всех испытанных индукторов. Самым меньшим, как и в группе контроля, был индекс антиагрегационной активности сосудистой стенки в отношении коллагена. Немного выше оказался уровень индекса антиагрегационной активности сосудистой стенки в отношение адреналина и тромбина. Еще выше оказались значения индексов антиагрегационной активности сосудистой стенки с АДФ (1,67±0,08) и ристомицином (1,51±0,05).

У животных опытной группы на фоне коррекции достигнута нормализация антикоагулянтных свойств стенок сосудов. Это сопровождалось нормализацией у них сосудистого контроля над фибринолитическими свойствами крови. На это указывал выход на контрольный уровень показателя эуглобулинового лизиса в интактной плазме и в плазме после временной ишемии сосуда, а также нормализация значения индекса фибринолитических свойств сосудов.

На момент завершения наблюдения у телят опытной группы также была достигнута нормализация продолжительности общих коагуляционных тестов. Вследствие осуществлённой коррекции у опытных телят получено увеличение тромбопластинового парциального времени на 39,7 %, нарастание времени протромбинового – на 38,7 % и удлинение тромбинового времени – на 6,9 %, что обеспечило выход их величин на уровень, характерный для группы контроля.

Многие дисфункции в организме млекопитающих часто сочетаются с нарушениями в системе гемостаза [12]. Ослабление антиоксидантных свойств крови у телят с дефицитом железа усиливало у них перекисное окисление липидов крови, что в значительной мере усугубляло формирующуюся гипоксию. Это нарушало у них структуру мембран форменных элементов крови и клеток сосудов, в первую очередь тромбоцитов и эндотелиоцитов [9].

Усиление у новорожденных телят с дефицитом железа агрегации тромбоцитов говорило о росте их чувствительности к внешним стимулам [7]. Ускоренная агрегация тромбоцитов с ристомицином у телят с нехваткой железа в организме может рассматриваться как маркер роста чувствительности кровяных пластинок к фактору Виллебранда. Ранняя агрегация тромбоцитов с АДФ у этих телят указывала на усиление в тромбоцитах синтеза тромбоксана [8]. Выраженная интраваскулярная активность тромбоцитов у телят с дефицитом железа доказывала активизацию агрегационного процесса тромбоцитов в крови. Очевидно, она способствовала выраженным повреждениям эндотелия, приводящим к увеличению доступности волокон субэндотелиальных структур для тромбоцитов [11].

Предположительно в развитии вазопатии со слабостью атромбогенных свойств стенок сосудов животных, имеющих дефицит железа, в течение фазы новорожденности большое значение имеет также ослабление её антикоагулянтной и фибринолитической активности. Найденная негативная динамика антикоагулирующих свойств сосудов вызвана уменьшением выработки у телят в их эндотелии антитромбина-III. Ослабление контроля стенок сосудов у опытных животных над фибринолитическими свойствами крови обеспечивалось ослаблением генерации в сосудистом эндотелии активаторов плазминогена [12].

Сокращение протромбинового времени у опытных телят следует связывать с усилением стимуляции гемокоагуляции по внешнему пути при активизации генерации активного тромбопластина [6]. Ускорение активированного парциального тромбопластинового времени указывало на усиление работы внутреннего пути гемокоагуляции с ускорением синтеза фибриногена [10].

Применение у телят с дефицитом железа избранной коррекции вызывало накопление в крови железа и нормализацию состояния и параметров крови. Кроме того, проведенная коррекция быстро ослабляла у наблюдавшихся телят процессы перекисного окисления липидов, устраняя его активизирующее воздействие на тромбоциты. Торможение их агрегации in vivo и in vitro у телят с дефицитом железа после коррекции являлось следствием депрессии перекисного окисления липидов и оптимизации рецепторных и внутриклеточных процессов в тромбоцитах [8]. Увеличение времени агрегации тромбоцитов с ристомицином можно считать результатом понижения в крови телят фактора Виллебранда.

Активация перекисного окисления липидов в плазме новорожденных телят, имеющих дефицит железа, снижала антиагрегационные свойства стенки сосудов, видимо, вследствие ослабления генерации в ней простациклина и NO. Это весьма отрицательно влияло на микроциркуляцию в органах [11]. Так, искусственное создание временной ишемии венозной стенки позволило установить у наблюдаемых телят понижение уровня контроля сосудов над процессом адгезии тромбоцитов. Как известно, эти изменения могут происходить вследствие ослабления контроля стенок сосудов над активностью рецепторов к коллагену. Об этом судили по слабости торможения агрегации тромбоцитов с коллагеном в плазме, полученной в условиях временной венозной ишемии [6].

Вследствие низкого выхода из сте- нок сосудов антиагрегантов у наблюдаемых животных отмечали избыточную фик- сацию сильных индукторов – коллагена и тромбина к рецепторам на поверхности тромбоцитов, что избыточно стимулировало в них уровень активности фосфолипазы С. Это активировало фосфоинозитольный путь процесса активации тромбоцитов с чрезмерным фосфолирированием протеинов тромбоцитарной сократительной системы [3]. При недостатке синтеза в стенках сосудов PGI2 и NO возникает также избыточность активности воздействия на тромбоциты слабых агонистов агрегации – АДФ и адреналина. Это во многом связано с чрезмерной экспрессией на тромбоцитах фибриногеновых рецепторов (GPIIв-IIIа) и существенным ростом активности фосфолипазы А2, обеспечивающей выход из тромбоцитарных мембран арахидоновой кислоты [7].

Вследствие проведённой коррекции у новорожденных телят с железодефицитным состоянием были нормализованы антикоагулянтные и фибринолитические свойства сосудов. В основе этого лежало развитие усиления выработки в них до нормы антитромбина-III и плазминогеновых активаторов.

Можно предположить, что у телят после проведенного воздействия наступала нормализация метаболизма в печени и оптимизировался в ней синтез всех факторов, участвующих в гемостазе. Сокращение протромбинового времени указывало на нормализацию генерации тромбопластина по внешнему пути [8]. На фоне проведённой коррекции отмечено торможение до уровня контроля активированного парциального тромбопластинового времени, что расценивалось как нормализация активности внутреннего пути гемокоагуляции. Наступившее замедление финального этапа свёртывания, регистрируемого в тесте тромбинового времени, говорило о нормализации фибринообразования у опытных животных.

Выявленная динамика способности плазмы к свёртыванию оптимизирует состояние у телят, получавших испытанную коррекцию. Ясно, что найденные изменения весьма позитивно влияют на жидкостные свойства крови и усиливают кровоснабжение внутренних органов, сохраняя необходимую для оптимума роста телят интенсивность обмена веществ [10].

Заключение. Дефицит железа у новорожденных телят регистрируется довольно часто. Он весьма негативно сказывается на их росте и развитии, приводит к появлению различных дисфункций и ослабляет устойчивость животных к негативным факторам среды. В случае появления железодефицитного состояния у молодняка часто усиливаются механизмы гемостаза с формированием тромбофилии. Во многом это связано с тем, что при нехватке ионов железа развивается ослабление антиоксидантной защиты плазмы и усиление генерации в ней свободных радикалов. У таких животных растет активность тромбоцитов и гемокоагуляция крови, что сопровождается ослаблением сосудистого гемостаза. У телят с дефицитом железа после применения ферроглюкина и гликопина происходила быстрая оптимизация антиоксидантного уровня крови и показателей, характеризующих пероксидацию липидов, что вело к достижению нормализации активности тромбоцитов, сосудистого гемостаза и системы свёртывания крови.

Завалишина,    Т.И.    Глаголева    //

Ветеринарная практика. – 2013. – № 2. – С. 40.

Резюме

Представляет интерес выяснение подходов к устранению гемостазиопатии в условиях нехватки ионов железа. Неизвестен потенциал коррекционных возможностей сочетания гликопина и железосодержащего средства в отношении нарушений гемостаза у новорождённых телят с дефицитом железа. Работа проведена на 45 новорожденных телятах, имеющих железодефицитное состояние. В исходном состоянии у животных установлено ослабление плазменной антиоксидантной защищённости с усилением в крови перекисного окисления липидов. У наблюдаемых телят выявлена активация гемостаза в части тромбоцитов, гемокоагуляции и ослабления его сосудистой части. Применение ферроглюкина с гликопином у телят с дефицитом железа вело к нормализации у них антиоксидантных свойств крови, пероксидации липидов и активности всех учитываемых компонентов гемостаза. Установлено, что для новорожденных телят с нехваткой железа свойственно усиление свойств гемокоагуляции тромбоцитов при ослаблении гемостаза, определяемого сосудами. Гемостазиопатия у телят полностью купируется в результате применения сочетания ферроглюкина и гликопина.