Физиологические свойства тромбоцитов у телят голландской породы в течение фазы молочного питания

В настоящее время признано, что кровь является важной интегративной средой всего организма [4]. Степень функционального совершенства ее различных регуляторных систем во многом обеспечивает успешность поддержания гомеостаза у млекопитающих [11]. В их числе весьма важное место занимает система гемостаза. Она включает массу компонентов, значимое место среди которых имеют тромбоциты. Их функциональное состояние весьма в значительной мере определяет реализацию процессов гемоциркуляции по капиллярам во всех органах [12]. Основные функциональные параметры тромбоцитов весьма чувствительны к различным влияниям из внешней среды [8]. Это справедливо для всех млекопитающих, в т.ч. непродуктивных и продуктивных животных [9].

Изучение любых аспектов тромбоцитарного гемостаза у крупного рогатого скота имеет большое практическое значение. Это связано с тем, что данная информация способна помочь прояснить некоторые аспекты формирования продуктивности этих животных [6]. Сейчас выяснены только отдельные моменты активности тромбоцитов у крупного рогатого скота [5]. При этом отсутствуют пока сведения о породных особенностях активности тромбоцитов у крупного рогатого скота на разных этапах его онтогенеза. Учитывая большую важность уровня активности тромбоцитов для реализации капиллярного кровотока и значит, состояния трофики тканей, становится понятна ее важность для процессов роста, созревания и обеспечения основ формирующейся продуктивности молодняка [2, 7]. Ввиду наличия множества морфо–функциональных различий между породами крупного рогатого скота, вызывает большой интерес поиск физиологических особенностей у телят высокопродуктивной по объему удоев голландской породы [10], в том числе по уровню активности тромбоцитов.

Цель – определить особенности состояния активности тромбоцитов у телят голландской породы на протяжении фазы молочного питания.

Материал и методы исследований. Исследование проводилось в строгом соответствии с этическими принципами, установленными Европейской конвенцией по защите позвоночных, используемых в экспериментальных и других научных целях (принята в Страсбурге 18 марта 1986 года и подтверждена в Страсбурге 15 июня 2006 года).

Исследование проведено на 43 телятах голландской породы молочного питания. Все, взятые под наблюдение телята, были получены от здоровых коров после прошедшей без особенностей второй или третьей стельности. Весь молодняк был осмотрен и обследован за фазу молочного питания 5 раз: на 11 сутки, 15 сутки, 20 сутки, 25 сутки и 30 сутки жизни.

У телят, включенных в исследование, выполнялась косвенная оценка уровня активности синтеза тромбоксана в тромбоцитах, при косвенной регистрации в них уровня активности их циклооксигеназы и тромбоксансинтетазы в ходе проведения трех проб переноса на фотоэлектроколориметре. В тромбоцитах животных определяли количество аденозинтрифосфата (АТФ) и аденозиндифосфата (АДФ) и выявляли степень их секреции в ответ на добавление в плазму коллагена. Также оценивали количество актина и миозина в неактивных тромбоцитах и в тромбоцитах, которые вступили в процесс агрегации в ответ на добавление к плазме АДФ [2].

Степень агрегации тромбоцитов (АТ) определяли путем применения микрометода, используя в качестве агонистов этого процесса АДФ в дозе 0,5 х 10-4 М), коллаген в разведении 1:2 от основной суспензии, тромбин в дозе 0,125 ед/мл, адреналин в дозе 5,0x10-6 М и ристомицин в дозе 0,8 мг/мл в плазме, богатой тромбоцитами, которую предварительно стандартизировали по содержанию тромбоцитов до концентрации 200x109 тромбоцитов в 1 литре [14]. Состояние внутрисосудистой тромбоцитарной активности, выясняли в ходе применения фазово-контрастной микроскопии [14]. Статистическая обработка полученной информации производилась с помощью пакета программ «Статистика для Windows v. 6.0», «Microsoft Excel». Различия в данных считались достоверными в случае Р<0,05.

Результат исследований. На протяжении фазы молочного питания у телят голландской породы происходило некоторое ослабление активности тромбоцитов. У наблюдавшихся животных агрегация тромбоцитов в ответ на коллаген тормозилась за время исследования на 11,2 %, достигая к 30-суточному возрасту 42,8±0,19 с. Также найдено небольшое торможение процесса АТ отмечена у телят в отношении АДФ и ристомицина, замедлявшихся за вторую фазу онтогенеза на 10,1 % и на 9,7 %, соответственно. За время наблюдения у телят выявлена тенденция к замедлению АТ в ответ на тромбин (на 7,8 %) и на адреналин (на 7,4 %), примененных как индукторы (Таблица 1).

Таблица 1 – Тромбоцитарная агрегация у телят голландской породы в течение фазы молочного питания

Учитываемый показатель	Телята голландской породы, n=43, M±m
	11 сутки	15 сутки	20 сутки	25 сутки	30 сутки
Время тромбоцитарной агрегации с АДФ, с	47,7±0,21	47,9±0,16	48,3±0,19	48,8±0,21	52,5±0,24 P<0,05
Время тромбоцитарной агрегации с коллагеном, с	38,5±0,17	38,8±0,18	39,2±0,15	39,7±0,13	42,8±0,19 P<0,05
Время тромбоцитарной агрегации с тромбином, с	60,0±0,16	60,5±0,10	60,9±0,14	62,6±0,23	64,7±0,17
Время тромбоцитарной агрегации с ристомицином, с	56,7±0,16	57,1±0,19	57,7±0,23	59,4±0,16	62,2±0,22 P<0,05
Время тромбоцитарной агрегации с адреналином, с	108,4±0,27	108,9±0,24	110,7±0,19	112,6±0,25	110,4±0,30

Примечание: P-достоверность динамики показателей по отношению к 11-суточному возрасту. В последующих таблицах обозначения сходные

Содержание в крови телят тромбоцитов-дискоцитов за фазу молочного питания имело тенденцию к росту. При этом количество в разной степени активированных тромбоцитов у них в ходе наблюдения постепенно уменьшалось, что за время проведенного исследования составило 27,7 %. У взятых в исследование животных за вторую фазу раннего онтогенеза число циркулирующих по крови малых и крупных агрегатов тромбоцитов постепенно уменьшались на 33,3 % и в 2,0 раза, соответственно (Таблица 2).

В тромбоцитах телят голландской породы, между 11 и 30 сутками жизни, отмечено некоторое понижение интенсивности синтеза тромбоксана, о чем говорило понижение показателя, регистрируемого в простой пробе переноса на 10,8 %, достигая в конце наблюдения 22,1±0,20 %. Полученный результат обеспечивался у наблюдаемых телят вследствие тенденции к понижению активности обоих тромбоцитарных ферментов, реализующих синтез тромбоксана – циклооксигеназы (4,3 %) и тромбоксансинтетазы (8,1 %).

Исходно небольшое содержание в тромбоцитах наблюдавшихся животных АТФ и АДФ, за время второй фазы раннего онтогенеза претерпевало тенденцию к снижению, составляя в ее конце 4,86±0,010 и 2,81±0,009 мкмоль/109 тромбоцитов. За период наблюдения степень их секреции из плотных гранул тромбоцитов уменьшалась и к концу наблюдения достигала 22,4±0,08 и 29,3±0,16 %, соответственно (Таблица 3).

Таблица 2 – Интраваскулярная активность тромбоцитов у телят голландской породы в течение фазы молочного питания

Учитываемый показатель	Телята голландской породы, n=43, M±m
	11 сутки	15 сутки	20 сутки	25 сутки	30 сутки
Количество тромбоцитов дискоцитов, %	85,7±0,30	86,2±0,23	86,9±0,16	87,5±0,25	88,8±0,28
Общее количество активных тромбоцитов, %	14,3±0,16	13,8±0,15	13,1±0,14 P<0,05	12,5±0,12 P<0,05	11,2±0,18 P<0,01
Количество малых тромбоцитарных агрегатов, на 100 свободных тромбоцитов	2,4±0,07	2,2 ±0,02 P<0,05	2,0±0,04 P<0,01	1,9±0,06 P<0,01	1,8±0,08 P<0,01
Количество средних и больших тромбоцитарных агрегатов, на 100 свободных тромбоцитов	0,06±0,012	0,05±0,014 P<0,01	0,04±0,018 P<0,01	0,03±0,012 P<0,01	0.03±0,012 P<0,01

За период наблюдения у обследованных телят в неактивных тромбоцитах понижались уровни актина и миозина на 11,2 %, миозина на 21,6 %, достигая к концу наблюдения 17,4±0,08 и 7,4±0,19 % к общему белку в тромбоцитах. За фазу молочного питания самосборка актина и миозина в агрегирующих тромбоцитах телят голландской породы, понижалась на 13,0 и на 17,0 %.

Становится ясно, что кровь является важной интегративной средой всего организма. При этом высокое функциональное совершенство ее регуляторных систем обеспечивает сохранение основных параметров гомеостаза у млекопитающих [17]. Весьма важным сохранением жизнеспособности организма является система гомеостаза, включающая массу компонентов и в том числе тромбоциты. Их функциональное состояние определяет реализацию всех основных процессов гемостаза, а, следовательно, реологические свойства крови в сосудах разного калибра [3].

Несмотря на большую биологическую значимость активности тромбоцитов многие аспекты тромбоцитарного гемостаза у крупного рогатого скота молочных пород разного возраста остаются изучены недостаточно. Сейчас можно считать выясненными только отдельные моменты активности тромбоцитов у продуктивных животных [4, 17]. При этом, учитывая большую важность функционального уровня тромбоцитов для степени выраженности капиллярного кровотока, и значит, состояния трофики тканей начинает вызывать большой интерес его особенности у молодняка высокопродуктивных по уровню удоев пород крупного рогатого скота [10, 13]. В этой связи возникает потребность планомерной оценки физиологических особенностей тромбоцитов у телят голландской породы в начале их онтогенеза – в течение фазы молочного питания. Проведенное исследование позволило несколько прояснить данный вопрос на основе полученных фактов.

В течение наблюдения у телят голландской породы происходило некоторое ослабление основных функциональных проявлений тромбоцитов. Найденное у наблюдаемых телят торможение АТ в ответ на коллаген и ристомицин, указывало на некоторое ослабление у них адгезивной активности тромбоцитов. В основе этого феномена у телят голландской породы в течение фазы молочного питания развивается тенденция к уменьшению содержания на тромбоцитах рецепторов, способных взаимодействовать с коллагеном - гликопротеидов Iа–IIа и VI [15]. Кроме того, учитывая ускорение АТ с ристомицитом, можно было считать, что у телят голландской породы имело место ослабление чувствительности тромбоцитов к этому индуктору [14]. Данное явление было следствием одновременного понижения в их крови фактора Виллебранда и снижения плотности на тромбоцитах телят, рецепторов, способных с ним взаимодействовать (GPI в).

Таблица 3 – Показатели механизмов участия тромбоцитов в гемостазе у телят голландской породы в течение фазы молочного питания

Учитываемый показатель	Телята голландской породы, n=43, M±m
	11 сутки	15 сутки	20 сутки	25 сутки	30 сутки
Уровень восстановления АТ при проведении коллаген-аспириновой пробы, %	73,1±0,12	72,4±0,10	71,9±0,14	71,0±0,12	70,1±0,08
Уровень восстановления АТ при проведении коллаген-имидозольной пробы, %	34,5±0,10	34,0±0,09	33,4±0,11	32,7±0,15	31,9±0,16
Состояние АТ в простой пробе переноса, %	24,5±0,15	24,0±0,16	23,4±0,15	22,9±0,14	22,1±0,20 Р<0,05
Количество АТФ в тромбоцитах до начала секреции, мкмоль/109 тр.	5,21±0,19	5,15±0,20	5,07±0,014	4,95±0,018	4,86±0,01
Количество АДФ в тромбоцитах до начала секреции, мкмоль/109тр.	3,09±0,004	3,00±0,008	2,95±0,006	2,89±0,005	2,81±0,009 Р<0,05
Уровень секреции АТФ,%	24,4±0,11	2,40±0,11	23,5±0,13	23,1±0,08	22,4±0,08
Уровень секреции АДФ,%	31,6±0,05	31,0±0,14	30,6±0,05	30,0±0,10	29,3±0,16
Количество актина в неактивных тромбоцитах,% к общему белку в тромбоцитах	19,3±0,18	18,9±0,15	18,5±0,06	18,0±0,09	17,4±0,08 Р<0,05
Количество актина в тромбоцитах при АДФ-агрегации,% к общему белку в тромбоцитах	31,2±0,14	30,6±0,11	29,8±0,15	28,4±0,17	27,6±0,19 P<0,05
Количество миозина в неактивных тромбоцитах,% к общему белку в тромбоцитах	9,0±0,12	8,7±0,09	8,2±0,16 P<0,05	7,7±0,14 P<0,05	7,4±0,19 P<0,01
Количество миозина в тромбоцитах при АДФ-агрегации,% к общему белку в тромбоцитах	21,3±0,12	21,0±0,14	20,7±0,08	19,2±0,16 P<0,05	18,2±0,18 P<0,05

Для телят молочного питания голландской породы оказалось свойственно некоторое ослабление исходно не выраженной агрегации тромбоцитов, что позитивно сказывалось на гемоциркуляции в их капиллярах [2]. Данное явление было связано с развитием ослабления чувствительности тромбоцитов к индукторам агрегации любой силы. Торможение агрегации тромбоцитов с сильными индукторами активности -коллагеном и тромбином, у наблюдавшихся телят следует связывать не только с рецепторными изменениями, но еще и с уменьшением в тромбоцитах активности фосфолипазы С, ферментов фосфоинозитольного механизма и степени фосфолирирования компонентов актиномиозинового комплекса [6]. Эти изменения приводят к функционально весьма выгодному ослаблению синтеза инозитолтрифосфата в тромбоцитах телят и торможению поступления в них Са2+, ослабляя самосборку актомиозина, а, следовательно, снижая интенсивность процесса секреции [14].

Торможение агрегации тромбоцитов в ответ на слабые индукторы АДФ и адреналин, было отмечено у телят голландской породы, на протяжении всей фазы молочного питания. Есть основания считать, что в основе этих изменений у наблюдаемых телят лежит постепенное некоторое снижение плотности рецепторов к ним на мембранах тромбоцитов, ослабление экспрессии тромбоцитарных гликопротеидов, способных взаимодействовать с фибриногеном (GPIIb-IIIа) и понижение уровня активности фосфолипазы А 2, в условиях воздействия на тромбоциты АДФ или адреналина. В результате у голландских телят в течение фазы молочного питания наступал функциональный минимум выщепления из тромбоцитарных фосфолипидов арахидоновой кислоты и, как следствие, торможение синтеза тромбоксана А 2 [5]. Кроме того, имевшая место на данном этапе онтогенеза у телят голландской породы, небольшая активность тромбоцитарных циклооксигеназы и тромбоксансинтетазы доказанная результатами проб переноса, являлась еще одним фактором существенного ослабления синтеза тромбоксана А 2 в кровяных пластинках.

Некоторое ослабление исходно невысокой АТ у телят голландской породы в течение второй фазы раннего онтогенеза в ответ на все индукторы также следует связать с постепенным уменьшением базального уровня актина и миозина и с ослаблением их дополнительной самосборки в ходе тромбоцитарной агрегации, а также с уменьшением выброса из плотных гранул тромбоцитов АТФ и АДФ [14].

Установленная у телят исходно невысокая способность тромбоцитов к агрегации определяла наличие у них в вначале наблюдения весьма умеренную внутрисосудистую тромбоцитарную активность, дополнительно уменьшающуюся за время наблюдения. Это определяло понижение в ходе наблюдения в крови телят их активных форм и уменьшение разного размера агрегатов [9, 16].

Найденное на протяжении наблюдения в крови телят голландской породы понижение количества активных форм тромбоцитов, дополнительно подтверждало уменьшение чувствительности кровяных пластинок к стимулирующими воздействиям в течение фазы молочного питания. Кроме того, данный показатель также указывал на низкую доступность для крови субэндотелиального коллагена, вследствие высокой целостности сосудистого эндотелия. Последнему обстоятельству в значительной мере способствовал невысокий уровень в крови обследованных телят активных форм тромбоцитов и разного размера их агрегатов. Этот момент также подтверждал понижение на протяжении наблюдения у телят голландской породы чувствительности тромбоцитов, к постоянно находящимся в небольшом количестве в плазме индукторов агрегации – АДФ, тромбина и адреналина [9].

Таким образом, понижение тромбоцитарной активности у телят голландской породы в течение фазы молочного питания обеспечивает функционально выгодное снижение активности гемостатических свойств тромбоцитов, реализуемых in vivo. Видимо, это связано у этого молодняка с одновременным ослаблением на протяжении фазы молочного питания механизмов адгезии, агрегации и секреции в их тромбоцитах на рецепторном и внутриклеточном уровне, закладывающимся в мегакариоцитах костного мозга на этапе кроветворения.

Заключение. Для телят голландской породы в течение фазы молочного питания характерна невысокая функциональная активность тромбоцитов. Это обеспечивает у них формирование физиологически выгодных условий для протекания во всех их тканях микроциркуляции и метаболизма. Данная ситуация была возможна, вследствие невысокой биологической активности у этих телят тромбоцитарных механизмов адгезии, агрегации и секреции. Можно думать, что небольшой уровень внутрисосудистой тромбоцитарной активности у телят голландской породы, в значительной мере способствует формированию оптимальных условий для их роста и высокой общей жизнеспособности на протяжении фазы молочного питания.

С. 90-98.

features of platelet aggregation in newborn

Активность тромбоцитов весьма значима для физиологии гемостаза крупного рогатого скота и обменных процессов в тканях. Огромное биологическое значение она имеет в процессе активного роста и развития животных. Под наблюдение было взято 43 теленка голландской породы, не имевших нарушений в объективном их статусе. Животных обследовали в возрасте 11 суток, 15 суток, 20 суток, 25 суток и 30 суток. Для этого применяли стандартные биохимические, гематологические и статистические методы проведения исследований. На протяжении наблюдения у телят найдена тенденция к ослаблению процесса агрегации тромбоцитов in vitro-in vivo. Это сопровождалось у них тенденцией к росту в их крови неактивных тромбоцитов. На этом фоне в крови животных понижался суммарный уровень активных тромбоцитов и количество находящихся в ней агрегатов тромбоцитов всех размеров. Выявленные изменения были вызваны у наблюдаемых телят развивающимся ослаблением синтеза в тромбоцитах тромбоксана, уменьшением содержания в их гранулах аденозинфосфатов и понижением степени их секреции. За время наблюдения в тромбоцитах животных некоторое количество актина и миозина имело склонность к уменьшению. Это сопровождалось некоторым ослаблением у обследованных телят дополнительной самосборки молекул актина и миозина в тромбоцитах при их агрегации. Для телят голландской породы молочного питания характерна высокая степень функционального совершенства тромбоцитов, обеспечивающая условия для оптимума микроциркуляции, необходимого для формирования высокой будущей продуктивности этих животных.