Физиолого-биохимические и морфологические показатели крови новорожденных телят после применения натрия нуклеината глубокостельным коровам

Поиск новых источников повышения резистентности организма, нормализации обменных процессов и увеличения продуктивности животных остается весьма актуальным в ветеринарной практике. Вопросы иммунобиологического состояния организма новорожденных животных стоят на первом месте в обеспечении оптимального роста и развития их в ранний постнатальный период.

По мнению многих авторов, в основе роста и развития телят в период новорожденности лежит иммунный статус организма. Иммунная система телят в этот период имеет функциональную незрелость, в крови у них отсутствуют иммуноглобулины, выполняющие роль основного фактора защиты организма. Своевременное получение иммунобиологически ценного молозива способствует направленному увеличению неспецифических защитных факторов организма и нормализации процессов пищеварения. Молозиво является незаменимым продуктом, так как содержит большое количество легкоусвояемых сывороточных белков, защитных иммунных факторов (иммуноглобулины A, M, G, нейтрофилы, лимфоциты, макрофаги, лактоферрин и др.), а также природных антиоксидантов (витамины А и Е, β-каротин, селен, цинк). Гуморальная иммунная защита, обусловленная колостральным иммунитетом, является важнейшим защитным механизмом телят раннего постнатального периода развития [4, 5, 9].

Стимуляция защитных механизмов организма и поддержание на высоком уровне резистентности животных к инфекционным заболеваниям и другим неблагоприятным факторам окружающей среды в критические периоды онтогенеза остаются важнейшими задачами современного животноводства. С целью повышения колострального иммунитета, естественной резистентности и сохранности молодняка крупного рогатого скота изучено множество препаратов [1, 2, 7, 10].

Особый интерес представляют препараты природного происхождения, обладающие высокой биологической доступностью и участвующие в процессах естественной регуляции жизнедеятельности организма. Среди таких препаратов можно выделить иммуномодулятор природного происхождения Натрия нуклеинат, который имеет в своем составе натриевую соль рибонуклеиновой кислоты, полученную из монокультуры пекарских дрожжей Saccharomyces cerevisiae. Препарат обладает широким спектром биологической активности и выраженными иммуностимулирующими свойствами. Определяющим фармакологическим свойством Натрия нуклеината является стимуляция лейкопоэза, процессов регенерации и репарации, функциональной активности нейтрофилов, T-лимфоцитов, B-лимфоцитов и других иммунокомпетентных клеток. Препарат усиливает пролиферацию клеток, синтез антител и антиинфекционную устойчивость организма, увеличивает содержание лизоцима, индуцирует синтез интерферона [3, 6, 8].

Целью исследования стало изучение влияния 0,2 % водного раствора Натрия нуклеината на морфологические и биохимические показатели крови новорожденных телят после его парентерального введения глубокостельным коровам, а также на образование и накопление в молочной железе коров иммуноглобулинов и выделение их в составе молозива.

Материал и методы исследований. Научно-хозяйственный опыт выполнен в осенне-зимний период на молочнотоварной ферме сельскохозяйственного производственного кооператива «Нижегородец» Нижегородской области. Объектами исследования стали 10 глубокостельных коров черно-пестрой породы, которые были разделены на 2 группы (контрольная и опытная) по 5 животных в каждой и полученные от них новорожденные телята. Животные отбирались по принципу парных аналогов с учетом породности, живой массы, возраста, продуктивности и клиникофизиологического состояния. Животным опытной группы за 3-9 суток до предполагаемого отёла вводили 0,2 % водный раствор Натрия нуклеината в дозе 5 мл внутримышечно, однократно. Животным контрольной группы вводили 0,9 % раствор Натрия хлорида. Новорожденные телята распределялись в соответствующие группы.

Телятам исследуемых групп выпаивали молозиво, полученное от их коров-матерей не позднее 30-40 минут после рождения. На молочно-товарной ферме применяется «холодный метод выращивания», поэтому телята с 2-дневного возраста содержались вне помещений – в боксах-домиках. Проводилось клиническое наблюдение за подопытными животными.

Пробы крови для исследования морфологического и биохимического состава у телят брали из яремной вены на 2-е и 10-е сутки жизни. Качество молозива коров контрольной и опытной групп оценивали по уровню общих иммуноглобулинов и титруемой кислотности. Отбиралась средняя проба молозива объемом 100 мл из 1, 2, 3, 4 и 5-го удоя.

Общий анализ крови (определение уровня гемоглобина, подсчет количества эритроцитов и лейкоцитов) проводился на гематологическом анализаторе HTI Micro-CC-20 Plus, USA. Лейкоцитарную формулу выводили путем подсчёта лейкоцитов разных видов в мазках крови, окрашенных по Романовскому-Гимза.

Содержание Т-лимфоцитов определяли методом спонтанного розеткообразования с эритроцитами барана (Е-РОК) и В-лимфоцитов – методом розеткообразования с эритроцитами быка в системе ЕАС-РОК (В.Г. Скопичев, Н.Н. Максимюк, 2009).

С помощью автоматического биохимического анализатора ICUBIO iMagic-V7определяли общее количество белка. Для определения белковых фракций крови (альбумин, α-глобулины, β-глобулины, γ-глобулины) применялся анализатор Minicap, Sebia.

Титруемую кислотность молозива по Тернеру и содержание иммунных глобулинов (Ig) в молозиве (молоке) с натрия сульфитом определяли по методике, изложенной в справочнике И.П. Кондрахина (И.П. Кондрахин и соавт., 2004).

Цифровые данные, полученные в ходе эксперимента, обрабатывались статистическим методом (Н.А. Плохинский, 1967) на персональном компьютере с установленным пакетом программ Microsoft Excel 2007. Для выявления статистически значимых различий использован критерий Стьюдента. Результаты рассматривались как достоверные, начиная со значения P≤0,05.

Исследования отобранного материала выполнялись на кафедре анатомии, хирургии и внутренних незаразных болезней, в межкафедральной лаборатории ФГБОУ ВО Нижегородская ГСХА и на базе лаборатории «Гемохелп» г. Нижнего Новгорода.

Получено решение о выдаче патента Российской Федерации на изобретение от 26.11.2021 г. по заявке № 2021109976.

Результат исследований. В ходе эксперимента от клинически-здоровых коров исследуемых групп было получено молозиво хорошего качества. Уровень иммуноглобулинов и титруемая кислотность были максимальными в молозиве первого удоя и с каждым доением постепенно снижались, но в течение всего периода исследований были более высокими у коров опытной группы (Таблица 1).

Содержание иммуноглобулинов и титруемая кислотность молозива 1-го удоя коров опытной группы были достоверно выше на 19 и 12 % (Р<0,05) по сравнению с контролем.

Таблица 1 – Содержание иммуноглобулинов в молозиве и титруемая кислотность молозива (M±m, n=5)

Показатель	Группа I	Группа II
Иммуноглобулины, г/л
1 удой	53,6±1,46	63,8±1,28*
2 удой	28,6±1,13	31,6±0,8
3 удой	16,8±0,94	17,2±1,2
4 удой	11,4±0,5	12±0,59
5 удой	6,8±0,3	8±0,43
Титруемая кислотность, °Т
1 удой	44,8±1,31	50,2±0,86*
2 удой	34,8±1,32	36,2±0,8
3 удой	32,6±1,07	33,4±1,02
4 удой	28,4±0,74	30,2±0,86
5 удой	25,6±1,02	26,2±1,01

Примечание: здесь и далее в таблицах * – Р<0,05 по парному критерию при сравнении с контролем

Данный факт может быть обусловлен повышением образования иммунных белков в организме стельных коров, вследствие усиления иммунореактивности под действием 0,2 % Натрия нуклеината.

Результаты, полученные в ходе исследования, показали, что у телят опытной группы через сутки после рождения наблюдается более высокий уровень лейкоцитов (9,7±0,38тыс./мкл против 7,74±0,54тыс./мкл в контроле, Р<0,05), который на 25,3 % превышал значения животных контрольной группы. С возрастом данный показатель у животных исследуемых групп увеличился, при этом количество лейкоцитов на 10-е сутки жизни было больше у опытных телят на 19,5 % (Р<0,05) по сравнению с контролем, за счет более высокого уровня лимфоцитов (Таблица 2).

Содержание гемоглобина и эритроцитов у опытных и контрольных телят в течение всего периода исследований оставались практически сходными.

Общее количество нейтрофилов, а также относительное содержание эозинофилов и моноцитов у новорожденных телят, полученных от коров, которым за 3-9 суток перед отёлом инъецировали 0,2 % водный раствор Натрия нуклеината, было выше на 7,1; 66,7 и 42,9% соответственно, по сравнению с показателями контрольной группы животных. Относительное содержание палочкоядерных и сегментоядерных нейтрофилов у опытных телят на 2-е сутки жизни составило 6,4±0,6 и 37,2±0,96 %, что оказалось меньше на 22 и 13 % соответственно, чем у животных контрольной группы.

С возрастом в крови животных подопытных групп отмечается появление базофилов. Относительное содержание палочкоядерных и сегментоядерных нейтрофилов на 10-е сутки жизни у опытной группы телят было на 20,6 и 17,6 % ниже по сравнению с контролем.

Индекс лимфоциты / сегментоядерные нейтрофилы на 2-е сутки жизни у телят контрольной группы составил 1,09±0,03, а у опытных телят 1,43±0,05, что оказалось выше на 31,2%, чем в контроле. При этом индекс нейтрофилы/лимфоциты у животных опытной группы оказался меньше на 26,8 % (0,79±0,02 против 1,08±0,02 в контроле). С возрастом индекс лимфоциты / сегментоядерные в опытной группе не претерпел значимых изменений, но был на 42,9 % выше, чем у животных контрольной группы.

Таблица 2 – Морфологические показатели крови новорожденных телят (M±m, n=5)

Показатель	На 2 сутки		На 10 сутки
	контроль	опыт	контроль	опыт
Гемоглобин, г/л	87,4±1,69	86,8±7,08	88,8±2,08	84,2±3,07
Эритроциты, млн./мкл	7,02±0,23	6,44±0,49	6,32±0,23	6,03±0,31
Лейкоциты, тыс./ мкл	7,74±0,54	9,7±0,38*	9,22±0,39	11,02±0,52*
Лейкоформула, %:
эозинофилы	0,6±0,24	1,0±0,2	0,8±0,2	1,4±0,4
базофилы	0	0	0,6±0,24	0,8±0,2
палочкоядерные нейтрофилы	8,2±0,37	6,4±0,6	6,8±0,73	5,4±0,5
сегментоядерные нейтрофилы	42,8±0,8	37,2±0,96	45,4±0,67	37,4±0,5
нейтрофилы, тыс./мкл	3,94±0,3	4,22±0,14	4,81±0,21	4,55±0,32
моноциты	1,4±0,24	2,0±0,31	1,6±0,24	2,2±0,37
лимфоциты	47,0±0,7	53,4±0,5	44,8±0,58	52,6±0,92
лимфоциты, тыс./мкл	3,62±0,23	5,18±0,22	4,13±0,21	5,75±0,28

На 2-сутки жизни относительное и абсолютное содержание лимфоцитов у животных опытной группы оказалось выше на 13,6 и 43,1 % по сравнению с контрольной группой телят. Относительное содержание лимфоцитов у исследуемых групп с возрастом уменьшилось, но было выше у телят опытной группы на 17,4 %. На 10-е сутки абсолютное содержание лимфоцитов в крови животных контрольной группы увеличилось на 14,1 %, а в опытной группе – на 11 %. Однако, данный показатель у опытных телят был выше на 39,2 % по сравнению с контрольной группой.

Т-лимфоциты участвуют в регуляции активности макрофагов, продуцирующих лизоцим. Благодаря чему бактерицидность секреторных иммуноглобулинов усиливается. Абсолютное количество Т-лимфоцитов на 2-е сутки жизни у телят контрольной группы составило 2,05±0,15тыс./мкл, в опытной – 3,26±0,16тыс./мкл, при этом данный показатель превышал контрольных аналогов на 59% (Р<0,05). Разница в относительном количестве Т-лимфоцитов на 2-е сутки у исследуемых телят составила 10,5 % (63,0±0,7 % против 57,0±0,7 % в контроле).

Абсолютное количество

В-лимфоцитов на 2-е сутки в контрольной группе составило 0,81±0,07 тыс./мкл, а у животных опытной группы – 1,03± 0,08 тыс./мкл, что было выше на 27,2 % (Р<0,05). Относительное количество В-клеток у опытных телят было ниже на 10,7 % по сравнению с интактными животными (20,0±1,04 % против 22,4± 0,81 % в контроле). С возрастом данные различия опытной и контрольной групп сохранились.

Абсолютное содержание Т-клеток в контрольной и опытной группах составило 2,51±0,14 и 3,67±0,16 тыс./мкл соответственно, разница по данному показателю была в 46,2 % (Р<0,05). Относительное количество Т-лимфоцитов в опытной группе телят составило 64±0,70 %, что превышало значения аналогов контрольной группы на 47 %.

Относительное и абсолютное содержание В-лимфоцитов у животных исследуемых групп с возрастом увеличивается. В опытной группе телят относительное количество В-клеток было ниже на 7,26 %, по сравнению с контролем, а абсолютное количество B-лимфоцитов оказалось выше на 28,4 % (1,31±0,04 тыс./мкл против 1,02±0,07 тыс./мкл в контроле).

В течение всего периода исследований выявленные изменения в лейкоцитарной формуле, клеточном иммунитете и ускорение пролиферации Т-лимфоцитов свидетельствуют о стимуляции иммунной системы организма новорожденных телят после применения Натрия нуклеината стельным коровам за 39 суток перед отелом.

Данные биохимических показателей крови телят исследуемых групп представлены в таблице 3. На основании полученных результатов следует отметить увеличение в крови уровня общего белка на 18 % (73,6±2,58 г/л против 62,36±0,58 г/л в контроле, Р<0,05), альбуминов и гамма-глобулиновна 16,5 и 53,5 % (Р<0,05) соответственно у новорожденных телят опытной группы через сутки после рождения по сравнению с контрольной группой животных.

Белковый состав плазмы крови взаимосвязан с физиологическим состоянием и резистентностью организма, а также играет важную роль в метаболических процессах. Так, уровень общего белка в крови является высокоинформативным показателем, характеризующим гомеостатическое состояние организма. Альбумины предоставляют аминокислоты и тем самым служат пластическим материалом для синтеза других белков и веществ.

Таблица 3 - Биохимические показатели крови новорожденных телят (M±m, n=5)

Показатель	На 2 сутки		На 10 сутки
	контроль	опыт	контроль	опыт
Общий белок, г/л	62,36±0,58	73,6±2,58 *	60,82±0,96	67,6±1,67 *
Альбумины, г/л	21,38±0,42	24,92±1,07 *	22,62±0,50	23,78±0,71 *
а-глобулины, г/л	18,78±0,93	17,4±1,02	17,24±1,31	15,14±0,60
в-глобулины, г/л	5,8±0,37	6,1±0,49	7,6±0,86	9,34±0,60
Y-глобулины, г/л	16,4±0,97	25,18±2,43 *	13,36±0,57	19,34±1,53 *

Содержание альфа-глобулинов у телят опытной группы на 2-е сутки было ниже на 7,3 %, а бета-глобулины превышали значения контрольных животных на 5,2 % (Р>0,05).

На 10-е сутки жизни уровень общего белка у телят подопытных групп снизился за счет фракций а- и Y-глобулинов, при этом уровень общего белка был достоверно выше у опытной группы телят на 11,1 % (67,6±1,67г/л против 60,82±0,96г/л в контроле, Р<0,05). Содержание альбуминов и у-глобулинов в опытной группе оставалось выше на 5,13 % и 44,7 % (Р<0,05) по сравнению с контролем.

С возрастом количественное значение а-глобулинов у опытной группы телят было на 12,2 % меньше, а в-глобулинов на 22,9 % больше относительно показателей животных контрольной группы.

Своевременное выпаивание молозива новорожденным телятам, полученного от коров, которым за несколько дней перед отелом вводили 0,2 % водный раствор Натрия нуклеината, способствовало увеличению количества у-глобулинов в сыворотке крови опытных животных, что имеет важное значение в повышении неспецифических защитных свойств организма.

Заключение. Полученные данные свидетельствуют о том, что 0,2 % водный раствор Натрия нуклеината, однократно парентерально введенный стельным коровам за 3-9 суток до предполагаемого отела, способствовал накоплению в молочной железе иммуноглобулинов и других необходимых иммунных факторов, а также выделению их в составе молозива. В результате новорожденные телята получили иммунологически ценное молозиво, что положительным образом отразилось на их физиологическом состоянии, морфологических и биохимических показателях крови через сутки и 10 суток после рождения. Отмечено достоверно более высокое содержание в крови новорожденных телят опытной группы общего белка на 18 %, альбуминов на 16,5 %, гамма-глобулинов на 53,5 %, а также лейкоцитов на 25,3 %, в основном за счет более высокого содержания лимфоцитов.

Резюме

Особенности деятельности органов и систем у новорожденных животных определяются степенью их функциональной зрелости в ранний постнатальный период онтогенеза. Рождение резистентного потомства, получение молозива с высоким уровнем иммуноглобулинов и их широкой противомикробной специфичностью является одной из приоритетных задач в современном животноводстве. Целью исследования явилось изучение влияния Натрия нуклеината 0,2 % на колостральный иммунитет и становление естественной резистентности новорожденных телят. Работа выполнена на базе СПК «Нижегородец» Дальнеконстантиновского района Нижегородской области. В ходе опыта определяли титруемую кислотность молозива, уровень общих иммуноглобулинов, проводили морфологический и биохимический анализ крови новорожденных телят на 2-е и 10-е сутки после рождения. В результате было отмечено увеличение количества лейкоцитов, общего белка, альбуминов и гамма-глобулинов в крови телят опытной группы, а также более высокий уровень иммуноглобулинов и титруемая кислотность молозива коров опытной группы.