Функциональная активность тромбоцитов у телят ярославской породы в течение фазы молочного питания

Система гемостаза имеет большое значение для сохранения нормальной жизнедеятельности организма млекопитающих [15]. Серьезную роль в функционировании гемостаза играют тромбоциты. Их гемостатические свойства существенно определяет процессы микроциркуляции в живом организме [14]. Ранее было показано, что уровень активности кровяных пластинок способен изменяться в условиях роста, в ходе старения, в процессе развития дисфункций, манефестировании пато- логии и на фоне проведения лечебных мероприятий [3]. Однако еще много моментов активности тромбоцитов у крупного рогатого скота разного возраста и разных пород остаются не выявлены. Существуют лишь единичные работы по активности кровяных пластинок у этого вида продуктивных животных, выполненные с учетом их генетических особенностей в отдельные возраста [5, 6]. К сожалению, имеющиеся сведения не дают возможности сформировать целостное представление по данному вопросу и создают острую потребность в дальнейших исследованиях в этом направлении. Получение этой информации весьма значимо для понимания регуляции с возрастом капиллярного кровотока, имеющего большое значение для процессов роста и развития теленка, что обеспечивает его общую будущую продуктивность [13]. В виду наличия генетически обусловленных отличий между биологическими параметрами пород крупного рогатого скота и серьезной функциональной ролью гемостатических свойств тромбоцитов для жизнеобеспечения животных представлялось важным выполнить оценку функциональных показателей кровяных пластинок у телят высокомолочной Ярославской породы во вторую фазу раннего онтогенеза.

Цель исследований – оценить динамику активности тромбоцитов у телят молочников Ярославской породы.

Материал и методы исследований. Работа выполнена в полном соответствии с нормами этики определенными Европейской конвенцией о защите позвоночных животных, используемых в экспериментальных и иных научных целях (была принята в Страсбурге 18 марта 1986 года и полностью была одобрена в Страсбурге 15 июня 2006 года) и поддержана локальным комитетом по этике Всероссийского НИИ физиологии, биохимии и кормления животных (протокол №11 от 17 января 2018 г.).

В работу были взяты 43 теленка Ярославской породы, которых получили от здоровых коров после 2 или 3 отела. Животные осматривались и обследовались за фазу молочного питания 5 раз: на 11-е, на 15-е, на 20-е, на 25-е и на 30-е сутки жизни.

Уровень синтеза в тромбоцитах тромбоксана и активность, реализующих этот процесс ферментов циклооксигеназы и тромбоксансинтетазы выявлялись в процессе проведения трех проб переноса при помощи фотоэлектроколориметра [4]. В тромбоцитах животных определяли содержание аденозинтрифосфата (АТФ) и аденозиндифосфата (АДФ), выясняли степень процесса их секреции в ответ на коллаген, а также количество актина и миози- на в составе белков неактивных и подвергнутых активации тромбоцитов добавлением к ним АДФ [4].

Агрегацию тромбоцитов (АТ) определяли визуальным микрометодом [12], с применением следующих индукторов агрегации: АДФ (в дозе 0,5 х 10-4 М), коллагена (после его разведения 1:2 основной суспензии), адреналина (в дозе 5,0x10-6 М), тромбина (в дозе 0,125 ед/мл) и ристоми-цина (в дозе 0,8 мг/мл) в богатой тромбоцитами плазме, которую стандартизировали по уровню тромбоцитов до уровня 200x109 тромбоцитов/л. Внутрисосудистая активность кровяных пластинок выяснялась при помощи фазово-контрастной микроскопии [12]. Все результаты выполненного исследования подвергнуты обработке критерием Стьюдента.

Результаты исследований. У телят молочного питания Ярославской породы выявлено постепенное усиление функциональных свойств тромбоцитов (Табл. 1). Так, у наблюдаемого молодняка на 11 сутки жизни АТ развивалась с коллагеном за 30,8±0,13 с, постепенно ускоряясь к 30 суткам онтогенеза до 27,6±0,10 с. Сходное сокращение времени развития процесса АТ отмечено в ответ на применение АДФ и ристомицина до 33,5±0,12 и 43,5±0,20 с, соответственно. Время развития АТ с индукторами тромбином и с адреналином также сокращалось до значений 45,3±0,08 с и 86,0±0,17 с. Количество тромбоцитов-дискоцитов в крови наблюдавшихся телят в ходе фазы молочного питания имело тенденцию к уменьшению (5,9 %). За период наблюдения за животными суммарное количество активных в их крови разновидностей тромбоцитов возросло на 15,1 %. Уровни перемещающихся по их крови тромбоцитарных агрегатов любых размеров за вторую фазу раннего онтогенеза также значимо возросли. Серьезным механизмом усиления АТ у телят-молочников Ярославской породы по мере увеличения возраста следует рассматривать выявленное в тромбоцитах нарастание синтеза тромбоксана. На это указывало найденное увеличение АТ при проведении простой пробы переноса, значение которой на 30 сутки онтогенеза составило 38,3±0,05 %.

Таблица 1 – Тромбоцитарные характеристики у телят молочного питания Ярославской породы

Примечание: р – статистическая значимость изменений показателей по отношению к 11 суточному возрасту

Это реализовывалось у этих животных за счет роста в их кровяных пластинках уровня активности ферментов циклооксигеназы и тромбоксансинтетазы. Это доказывалось повышением уровня восста- новления АТ в ходе коллаген-аспириновой пробы, выявляющей активность тромбоцитарной циклооксигеназы (в возрасте 30 суток 86,8±0,11 %). Выраженность восстановления уровня АТ в пробе коллаген- имидазольной, позволяющей определить степень активности тромбоцитарной тром-боксансинтетазы также нарастала у телят, достигая на 30 сутки 48,6±0,14 %.

Небольшие при взятии под наблюдение количества в тромбоцитах телят АТФ и АДФ испытали повышение, достигая к концу наблюдения 5,93±0,015 и 3,86±0,007 мкмоль/109 тромбоцитов. Это сопровождалось ростом их секреции из кровяных пластинок в течение второй фазы раннего онтогенеза на 14,5 % и на 9,5 % соответственно.

Количество актина и миозина на 11 сутки в интактных тромбоцитах наблюдаемых телят достигало 33,2±0,12 % и 16,2±0,12 % общего белка в кровяных пластинках, а к окончанию проведенного наблюдения 37,1±0,08 % и 18,3±0,17 % общего белка в тромбоците. За время наблюдения у животных выявлено усиление в процессе агрегации кровяных пластинок выраженности генерации актина (на 9,2 %) и миозина (на 13,7 %).

Продолжительно ранее проводимые исследования дали возможность осознать биологическую значимость динамики гематологических показателей у человека и различных видов животных. Они оказались способны приблизить понимание исследователей к особенностям работы механизмов сохранения гомеостаза у высших животных [1, 9]. Признается высокая значимость для физиологии гемостаза функциональных свойств тромбоцитов. Вместе с тем активность кровяных пластинок высокопродуктивных пород крупного рогатого скота до сих пор остается выяснена очень недостаточно [2]. Данное обстоятельство побудило авторов выполнить настоящее исследование, используя в качестве объекта наблюдения телят Ярославской породы [10, 11].

Выполненное исследование показало, что АТ у молодняка этой породы имеет место некоторое усиление адгезивных способностей их тромбоцитов за время фазы молочного питания. Видимо, это связано с активацией работы сразу двух механизмов [7]. На первом месте из них, видимо, находится ускорение развития агрегации тромбоцитов с индуктором коллагеном. Дан- ный процесс следует связывать с постепенным ростом на мембранах тромбоцитов наблюдаемых телят за период фазы молочного питания количества рецепторов, способных взаимодействовать с коллагеном - гликопротеидов Iа – IIа и VI. Вторым механизмом активизации адгезии тромбоцитов следует считать у телят-молочников Ярославской породы рост количества на их мембранах рецепторов, способных соединяться с фактором Виллебранда (GPIb) при одновременном повышении его уровня в их крови. Об этом говорило найденное у наблюдаемых телят ускорение АТ в ответ на ристомицин [8].

Найденная у телят-молочников Ярославской породы ускорение процесса агрегации тромбоцитов, создает мощную защиту их организма от развития кровопотери. Сокращение времени наступления АТ с сильными стимуляторами агрегации (с тромбином и коллагеном) очевидно вызвано процессом увеличения количества рецепторов к ним на поверхности кровяных пластинок, что неизбежно сочетается с усилением фосфолипазы С и активацией ферментов фосфоинозитольного пути и повышением выраженности фосфолириро-вания белков, образующих сократительную систему [12]. Повышение генерации в тромбоцитах инозитолтрифосфата у обследованных телят также было связано с ростом поступления в цитоплазму Са2+, что вело к усилению самосборки и взаимо-движения нитей актомиозина [4].

Под действием слабых индукторов агрегации у животных Ярославской породы в течение фазы молочного питания агрегация тромбоцитов также ускорялась. Это реализовывалось путем роста плотности рецепторов к ним на кровяных пластинках при увеличении на них экспрессии рецепторов к фибриногену (GPIIb-IIIа) и повышении активности тромбоцитарной фосфолипазы А2. Усиление данных процессов вызывало повышение степени выхода из мембран тромбоцитов содержавшейся в фосфолипидах арахидоновой кислоты, что вело к интенсификации выработки в них тромбоксана А2. Выявленный у телят Ярославской породы рост функциональных свойств энзимов циклооксигена- зы и тромбоксансинтетазы неизбежно вел к нарастанию количества образующегося тромбоксана А2. Об этом говорили полученные в работе результаты переносных проб, выявившие в кровяных пластинках животных, взятых под наблюдение, некоторое их усиление активности обоих этих ферментов. Важным механизмом, формирующим условия к ускорению АТ у телят, относящихся к Ярославской породе, нужно считать найденное у них нарастание актинообразования и миозинообразования под действием на тромбоциты индукторов агрегации и усиление секреции кровяных пластинок АТФ и АДФ [12].

У телят второй фазы раннего онтогенеза найдено увеличение уровня активных разновидностей тромбоцитов. Это говорило о росте у них степени чувствительности тромбоцитов к стимуляторам процесса агрегации. При этом усиление активности тромбоцитов in vivo также говорило об увеличении доступности коллагена стенок сосудов для контакта с тромбоцитами за счет нарастания в их крови уровня свободно перемещающихся агрегатов кровяных пластинок. Это опосредованно говорило о росте в крови телят Ярославской породы молочного питания способных к растворению в ней физиологических агонистов процесса агрегации (АДФ, тромбина, адреналина) [6].

Выявленное усиление у этих телят агрегирующих свойств тромбоцитов ведет к росту количества активных вариантов тромбоцитов и их агрегатов. Это нужно рассматривать как серьезный механизм понижения опасности развития кровотечений.

Найденная выраженность внутрисосудистой активности тромбоцитов у молодняка крупного рогатого скота Ярославской породы подтверждает большую выраженность адгезивных и агрегационных возможностей их тромбоцитов непосредственно в крови, что во многом обеспечивается усилением экспрессии рецепторов к дезагрегантам сосудистого происхождения [3].

Заключение. Для телят-молочников Ярославской породы характерно некоторое усиление активности тромбоцитов. Это создает условия для минимизации у них опасности развития кровотечений при нормальных условиях микроциркуляции и оптимальной активности метаболизма в их органах. Некоторое повышение у них внутрисосудистой активности тромбоцитов сохраняет состояние гомеостаза в сосудах любого калибра, что весьма важно для быстрого роста и развития молодняка.

Резюме

Гемостатические свойства тромбоцитов у телят могут меняться по мере роста. Интерес вызывает уровень их активности в фазу молочного питания у разных пород крупного рогатого скота. Цель работы – оценить динамику активности тромбоцитов у телят Ярославской породы в период молочного питания. Работа была проведена на 43 телятах, которые были получены от здоровых коров 2-3 отела. Животные в работе были подвергнуты обследованию на 11-е, 15-е, 20-е, 25-е и 30-е сутки онтогенеза. В исследовании использованы биохимические, гематологические и статистические методы проведения научных исследований. У телят-молочников в ходе обследования было найдено нарастание агрегации тромбоцитов со всеми примененными индукторами. Содержание в их крови дискоидных тромбоцитов в ходе наблюдения имело склонность к снижению. Уровень испытавших активацию тромбоцитов на протяжение второй фазы раннего онтогенеза повысился у них на 15,1%. Содержание в крови телят мелких агрегатов, а также агрегатов среднего и большого размера существенно возросло за время наблюдения. Найденные изменения у телят Ярославской породы во многом имели в своей основе рост уровня синтеза в кровяных пластинках тромбоксана. Данный эффект обеспечивался усилением в них энзиматической активности циклооксигеназы и тромбоксансинтетазы. Серьезное значение в этом играло увеличение содержания в кровяных пластинках аденозинфосфатов и усиление их секреции. Выраженность содержания актина и миозина в неактивных тромбоцитах животных Ярославской породы возросло за фазу молочного питания на 11,7 % и 12,9 %, соответственно. Также у них был найден рост дополнительной генерации актина и миозина в процессе агрегации тромбоцитов на 9,2 % и 13,7 %, соответственно. Результаты проведенного исследования говорят, что для телят-молочников Ярославской породы характерно увеличение активности тромбоцитарных агрегации и секреции. Это формирует у них необходимые условия реализации микроциркуляции. Усиление внутрисосудистой тромбоцитарной активности у них регулирует процессы обмена веществ в организме и обеспечивает надежное сохранение гомеостаза.