Функциональное состояние эндотелия сосудов у больных гемобластозами до и после полихимиотерапии

В последние десятилетия заболеваемость гемобластозами (ГБ) продолжает неуклонно возрастать [6, 8]. Последние достижения клинической онкологии позволили увеличить количество и продолжительность ремиссий, а также повысить качество жизни больных ГБ [18, 21]. Существенные прорывы в онкогематологии связаны как с улучшением диагностики опухолей крови на основании молекулярно-биологических методов верификации опухолевых клонов, так и с широким внедрением в повседневную практику высокоспециализированных многокомпонент- ных схем полихимиотерапии (ПХТ) [14]. К сожалению, отсутствие строгой селективности цитостатических препаратов определяет их токсическое действие на нормальные, быстро-пролиферирующие ткани организма, в том числе эндотелий сосудов [15].

В литературе достаточно широко представлены данные о структурных и функциональных изменениях эндотелия сосудов при таких патологических процессах, как артериальная гипертензия, ишемическая болезнь сердца, инсульт, сахарный диабет, ревматоидный артрит, гестозы, синдром Рейно, системные васкулиты и др. [1, 7, 9, 16, 17, 19]. Однако мы не встретили работ, посвященных исследованию функционального состояния эндотелия при ГБ, в частности при таких распространенных заболеваниях, как лимфома Ходжкина (ЛХ) и неходжкинские злокачественные лимфомы (НХЛ).

В связи с этим целью настоящей работы являлось исследование функционального состояния эндотелия сосудов у больных гемобластозами до и после проведения курсов полихимиотерапии.

Материал и методы

Всего обследовано 30 больных ЛХ и НХЛ в возрасте от 20 до 55 лет, лечившихся в Городском гематологическом центре г. Новосибирска и в специализированном гематологическом отделении МУЗ городской клинической больницы № 2. Все больные были разделены на 2 группы: в I вошли 15 пациентов с впервые установленным диагнозом ЛХ и НХЛ до начала ПХТ, во II – 15 больных с ГБ после проведения от 2 до 6 курсов стандартной схемы ПХТ. В контрольную группу были отобраны 28 практически здоровых доноров обоего пола в возрасте от 22 до 57 лет.

Всем больным определяли содержание эн-дотелина-1 (ET-1), стабильных метаболитов нитратов/нитритов (NO/NO-) и фактора Виллебранда (vWF) в сыворотке крови. Оценку уровня ET-1 производили с использованием иммуноферментного набора для количественного определения эндотелина 1 в биологических жидкостях («Biomedica Medizinprodukte», Австрия). Содержание ET-1 в сыворотке крови измеряли в fmol/ml. Уровень оксида азота (NO) в сыворотке крови определяли по измерению содержания его стабильных метаболитов – ни-тратов/нитритов (NO/NO-) с использованием реактива Грисса. Единица измерения NO/NO- в крови – μМ/мл. Для количественного определения фактора Виллебранда (vWF) использовали фотоэлектроколориметрический метод [3]. Процентное содержание vWF определяли по калибровочной кривой.

После определения вышеуказанных факторов рассчитывали индексы их соотношения: К1=ET-1/NO и К2=vWF/NO, величины которых выражали в условных единицах (усл. ед.) и сравнивали с соответствующими значениями в контрольной группе. При этом величина каждого показателя в контрольной группе принималась за 1 усл. ед.

Статистическую обработку полученных данных производили с помощью лицензированного пакета компьютерных программ «Sta-tistica 8.0» [5]. Распределение количественных данных оценивали по критерию Шапиро-Уилка. Для сравнения количественных показателей с нормальным распределением, применяли t-критерий Стьюдента, а при их отличии – непараметрические критерии Манна-Уитни, Колмогорова-Смирнова. Для сравнения двух зависимых групп использовали непараметрический критерий Вилкоксона. Корреляционный анализ данных проводили по Спирмену. Различия сравниваемых показателей считали статистически значимыми при p<0,05.

Результаты и обсуждение

Предварительный анализ данных показал, что уровни ЕТ-1, vWF и NO/NO- в сыворотке крови у больных как ЛХ, так и НХЛ практически не отличаются. В связи с этим для дальнейшего анализа данных все результаты, полученные у больных с этими нозологическими вариантами заболевания, были объединены в общую группу под диагнозом ГБ.

Результаты исследования показали, что в сыворотке крови больных ГБ до начала лечения наблюдается значительный рост содержания ЕТ-1 и vWF, обладающих четко выраженными вазоконстрикторными свойствами. Так, в сыворотке крови пациентов I группы содержание ЕТ-1 было в 14,1 раза, а vWF – в 2,2 раза выше, чем в контрольной группе. В то же время у больных этой же группы содержание стабильных метаболитов оксида азота NO/NO-, напротив, было в 2,6 раза ниже, чем у лиц контрольной группы, что свидетельствует о снижении факторов с вазодилятаторными свойствами (табл. 1). После курса ПХТ наблюдается снижение уровней ЕТ-1 и vWF, а также рост содержания NO/NO- в сыворотке крови больных ГБ. Так, содержание ЕТ-1 в сыворотке крови больных ГБ после курса ПХТ снизилось в 2,7 раза, но было все еще в 5,3 раза выше, чем в контроле. Подобная картина наблюдалась и при определении содержания

Таблица 1

Показатели функционального состояния эндотелия сосудов больных гемобластозами до и после ПХТ (M ± m)

Группы больных	ET-1, fmol/ml	vWF, %	NO/NO-, μМ/мл
I. До лечения (n=15)	4,23 ± 0,20 p<0,001	211,57 ± 4,20 p<0,001	5,07 ± 0,22 p<0,001
II. После курса ПХТ (n=15)	1,58 ± 0,08 p<0,001 p1<0,001	135,68 ± 2,60 p<0,001 p1<0,001	9,08 ± 0,39 p<0,001 p1<0,001
Контроль (n=28)	0,30 ± 0,01	96,38 ± 1,20	13,22 ± 0,42

Примечание: p – статистически значимые различия по сравнению с контрольной группой, p1 – статистически значимые различия по сравнению с I группой.

Таблица 2

Коэффициенты соотношения показателей функционального состояния эндотелия сосудов у больных гемобластозами до и после ПХТ (M ± m)

Группы больных	ET-1/NO, усл. ед.	vWF/NO, усл. ед.
I. До начала лечения (n=15)	0,88 ± 0,08 p<0,001	27,79 ± 1,69 p <0,001
II. После курса ПХТ (n=15)	0,17 ± 0,01 p<0,001 p1<0,001	24,23 ± 1,56 p<0,001 p1<0,001
Контрольная группа (n=28)	0,02 ± 0,01	7,50 ± 0,26

Примечание: p – статистически значимые различия по сравнению с контрольной группой, p1 – статистически значимые различия по сравнению с I группой.

vWF. В этом случае после ПХТ содержание vWF в сыворотке крови больных снизилось в 1,6 раза и, так же как и ЕТ-1, оставалось на высоком уровне, превышая контрольные значения в 1,4 раза. Содержание NO/NO- в сыворотке крови больных после ПХТ возросло в 1,8 раза, но не достигало уровня контрольных величин (табл. 1). При этом стоит отметить, что прямой зависимости изменения уровня определяемых факторов от числа курсов ПХТ нами не было выявлено. В то же время замечено, что самое значимое изменение их уровня наблюдается после 2 курсов ПХТ.

Корреляционный анализ данных у больных

I группы выявил сильную прямую зависимость между вазоконстрикторами ET-1 и vWF (r = +0,94). В то же время между факторами констрикции (ЕТ-1 и vWF) и дилятации (NO) выявлены сильные обратные связи, соответственно r = –0,96 и r = –0,98 (p<0,05). У больных II группы после ПХТ отмечаются незначительные ослабления корреляции между ET-1 и vWF (r = +0,85) и (vWF и NO) (r = –0,85), а между ET-1 и NO – сохраняется (r = –0,97) (p<0,05).

Для оценки соотношения вазодилятирующих, антитромбогенных, антипролиферативных факторов (NO), с одной стороны, и вазоконстрикторных, протромбогенных, пролиферативных (вызывающих ремоделирование сосуда) факторов – с другой (ЕТ-1, vWF) рассчитывали соответствующие индексы (табл. 2). До начала проведения ПХТ индексы соотношения ET-1/ NO и vWF/NO у больных ГБ значительно превышали соответствующие показатели у лиц контрольной группы. Так, индекс соотношения ET-1/NO у этих пациентов превышал в 44 раза таковой в группе контроля, а vWF/NO был в 3,7 раза больше, чем в контроле. После ПХТ значения индексов ET-1/NO и vWF/NO снижались соответственно в 5,2 и в 1,2 раза по сравнению с исходными (до лечения) данными у больных I группы. В то же время, в отличие от контрольных цифр, у больных II группы величины этих индексов после ПХТ все еще оставались высокими.

Результаты исследования показали, что высокие величины индексов соотношения ET-1/NO и vWF/NO свидетельствуют о преобладании ва- зоконстрикторов над факторами вазодилятации. С учетом того, что функциональное состояние эндотелия сосудов и/или его тонус зависит от таких регуляторных медиаторов, как NO, vWF и эндотелины, в настоящее время сформировалось представление об эндотелиальной дисфункции (ЭД), под которой понимают нарушение баланса между этими факторов с преобладанием влияния вазоконстрикторов [22]. Таким образом, у больных ГБ развивается выраженная ЭД, которая характеризуется увеличением концентрации вазоконстрикторных медиаторов на фоне снижения уровня вазодилятаторных факторов.

Эндотелиальная дисфункция – это сложный процесс, в механизме развития которого участвует множество факторов, нарушающих баланс в системе регуляции тонуса сосудов. Однако механизмы развития ЭД при ГБ до сих пор еще остаются слабо изученными. Как известно, опухолевые заболевания сопровождаются развитием синдрома эндогенной интоксикации (СЭИ), которая приводит к нарушениям микро-и макроциркуляции, водно-электролитного обмена, кислотно-щелочного равновесия, структурным и ультраструктурным изменениям в клетках органов и тканей [10].

В литературе имеется большое количество работ, посвященных проблеме дестабилизации лизосомальных мембран при онкопроцессах, сопровождаемое увеличением содержания ферментов в крови, под действием которых образуется большое количество биологически активных веществ, в том числе и вазоактивные вещества, способные повреждать эндотелий сосудов и повышать их проницаемость [23]. С другой стороны, в развитии ЭД при ГБ ключевую роль могут играть про- и противовоспалительные цитокины, поскольку они обладают регуляторными свойствами на эндотелий сосудов. При изучении цитокинового профиля у больных с впервые выявленными лимфомами Н.П. Кареевой [11] установлено увеличение содержания в сыворотке крови IL-1β, IL-6, TNF-α и IFN-γ до начала ПХТ. Многие авторы считают, что усиление эндогенной продукции цитокинов является важным патогенетическим звеном онкологических заболеваний, однако их роль в развитии опухолевого процесса различна. Например, умеренное повышение IL-1β и TNF-α многими авторами рассматривается как проявление активации противоопухолевого иммунитета и механизма апоптоза [4], однако чрезмерно высокая эндогенная продукция цитокина, в частности TNF-α, не только не способствует регрессу опухоли, но и служит фактором промоции последней [11, 24]. В высоких концентрациях TNF-α проявляет свои иммуносупрессивные свойства, оказывает системное воздействие на организм с развитием интоксикационного синдрома и может усиливать цитотоксические эффекты химиотерапии в отношении нормальных тканей за счет выброса свободных кислородных радикалов с развитием окислительного стресса [2, 20].

Снижение уровней vWF и ЕТ-1 и повышение стабильных метаболитов NO в сыворотке крови больных после курсов ПХТ, вероятно, связано с ослаблением СЭИ и снижением продукции провоспалительных цитокинов. Известно, что опухолевые клетки сами являются активными продуцентами цитокинов [13]. Отсюда уменьшение объема опухолевой ткани после курсов ПХТ, что способствует сокращению плацдарма выработки цитокинов и, соответственно, снижению их действия на эндотелий сосудов, приводя к ослаблению выраженности ЭД.

Таким образом, можно предположить, что причинами формирования ЭД при ГБ являются эндогенная интоксикация, которая сопровождает эти заболевания на всех этапах развития [15], а также влияние про- и противовоспалительных цитокинов. После курсов ПХТ содержание vWF и ЕТ-1 в сыворотке крови больных снижалось, а стабильных метаболитов NO – повышалось, однако после проведения ПХТ величины ET-1, vWF и стабильных метаболитов NO в сыворотке крови не достигали нормальных значений, что свидетельствует о сохранении ЭД, требующей проведения дальнейших реабилитационных мероприятий для улучшения качества жизни больных ГБ.