Гельминтоовосокпическая диагностика токсокароза

Прижизненный паразитологический диагноз токсокароза человека практически невозможен, поскольку обнаружить мигрирующие личинки трудно. Даже «самый надежный способ диагностики» – идентификация личинки по гистологическим срезам - весьма неэффективен (В. Е. Поляков, А. Я. Лысенко, 2003).

Существенное значение в постановке диагноза токсокароза имеет эпидемический анамнез. Указание на содержание в семье собак или тесный контакт с ними, геофагия свидетельствуют о высоком риске заражения токсокароза. При токсокарозе часто наблюдается аллергия на шерсть животных (В. Е. Поляков, А. Я. Лысенко, 2003).

Надежного метода диагностики глазного токсокароза нет. Часто диагноз выясняется только при гистологическом исследовании. Дополнительными методами диагностики токсокароза являются ультразвуковые и рентгенографические исследования. Рекомендуется в сомнительных случаях ретинобластомы проводить серологическое исследование на токсокароз пунктата передней камеры глаза и биоптата стекловидного тела.

В связи с этим, как уже отмечено выше при диагностике токсокароза большую значимость имеют эпидпоказания.

В литературе для диагностики токсокароза собак рекомендуют (в том числе и современные зарубежные авторы) копроскопические методы, такие как флотационные методы Фюллеборна и Котельникова-Хренова (Г. Уркхарт, Дж. Эрмур и др., 2000; К. И. Абуладзе, 1990; М. Ш. Акбаев, А. А. Водянов и др., 2002; М. Ш. Акбаев, К. И. Абуладзе и др., 1994).

Заметим, что оба этих метода относятся к группе флотационных методов, т. е. основанные на всплытии яиц гельминтов и ооцист простейших в насыщенных или высокой плотности растворах различных солей или других жидкостей, удельный вес которых выше, чем удельный вес яиц паразитов и ооцист кокцидий.

Эти методы наряду с простотой и известностью имеют и ряд неоднократно упоминаемых в литературе недостатков, таких как серьезные трудности при определении низкой степени инвазии. В настоящий момент времени приходится констатировать, что проблема эффективной прижизненной диагностики инвазии токсокарами собак является не решенной. Используемые же методы копроскопической диагностики можно уверенно отнести к морально устаревшим и не удовлетворяющим современным требованиям, как к диагностической эффективности, так и стандартизации и унификации процедур и оборудования, диктуемых научной и практической целесообразностью.

Наибольшего эффекта можно было бы ожидать от применения методов, сочетающих седиментацию осадка с последующей флотацией яиц в растворах с высокой удельной плотностью (Р. Т. Сафиуллин, 2001), так называемые комбинированные методы). Но как неоднократно указывалось в литературе между количеством выявляемых яиц и плотностью растворов нет строгого соответствия. Кроме плотности, на эффективность диагностики влияет значительное количество других факторов. Среди них скорость кристаллизации раствора (один из главных недостатков всех однокомпонентных солевых флотационных растворов), большое количество детрита затрудняющего поиск при использовании очень плотных растворов и др. Выход можно найти в использовании флотационных растворов состоящих из нескольких ингредиентов, каждый из которых выполняет определенную функцию, замедляет время кристаллизации капли на предметном стекле, удешевляет стоимость проводимого анализа, увеличивает удельную плотность смеси и т. д.

Данный подход был успешно применен авторами при усовершенствовании методов диагностики ряда кишечных паразитозов (неоаскариоза крупного рогатого, аскаридоза человека, лямблиоза человека.

К сожалению, хороший результат можно получить, лишь проведя довольно масштабную эмпирическую работу с целью усовершенствования копроскопической диагностики. Разработанный нами несколькокомпоненнтный комбинированный метод выявления яиц токсокар в пробах фекалий собак позволял в 7 раз увеличить процент выявления оплодотворенных яиц по сравнению с альтернативным методом Фюллеборна, а также позволил выявлять неоплодотворенные яйца данных паразитов, что обычно чрезвычайно затруднительно при прочих гельминтоовоскопических методах.

Для гельминтоовоскопической диагностики кишечных гельминтозов плотоядных применяются следующие методы:

• 1.    Метод Фюллеборна. Недостатком метода является то, что флотация яиц происходит длительно (40 – 60 минут) и метод является недостаточно эффективным.

• 2.    Метод Котельникова–Хренова. Недостатком данного метода является сильная насыщенность флотационного раствора, вследствие чего происходит быстрая кристаллизация капель на предметном стекле, что препятствует исследованию материала и отрицательно сказывается на эффективности исследований.

В связи с этим был разработан более эффективный способ копроскопической диагностики гельминтозов плотоядных в целях определения истинной гельминтологической ситуации для проведения соответствующих лечебно-профилактических мероприятий в исследуемых объектах.

Способ диагностики гельминтозов плотоядных проводили по следующей схеме: вначале готовят комбинированную флотационную смесь из трех ингредиентов:

• 1.    насыщенный раствор цинка хлорида (2 кг ZnCl 2 на 1 л воды);

• 2.    насыщенный раствор натрия хлорида (0,42 кг NaCl на 1 л воды);

• 3.    сахароза (1,67 кг на 1 л воды).

Далее эти три компонента смешивают в соотношении 1,75 : 1 : 1.

Пробу фекалий весом 3 – 5 г помещали в стакан, заливали небольшим количеством воды, тщательно размешивали до появления равномерной взвеси, затем добавляли еще 50 – 100 мл воды и процеживали через металлическое сито или марлю в сухой, чистый стакан. После 5 минутного отстаивания надосадочную жидкость сливали. На дне стакана оставляли такое количество взвеси, которое бы уместилось в центрифужную пробирку. Затем проводили 3-хминутное центрифугирование при 3000 g, после всю жидкость до осадка сливали, а к осадку добавляли трехкомпонентный флотационный раствор. Осадок взбалтывали до получения взвеси и снова центрифугировали 3 минуты при 1500 g. После металлической петлей снимали поверхностную пленку, переносят на предметное стекло и исследовали под микроскопом.

Пример. В МУ «СОБЖ» г. Казани (пункт приема и передержки безнадзорных животных) в летнее время проводили обследование собак и отбор проб кала (10 взрослых и 25 щенков) на инвазированность кишечными нематодами (Toxocara canis и Toxoascaris leoninа).

Гельминтоовоскопическое обследование проводили методами Фюллеборна и патентуемым методом. Исследования проводили на базе кафедры паразитологии и радиобиологии Казанской государственной академии ветеринарной медицины им. Н. Э. Баумана. Исследования проб фекалий по методу Фюллеборна проводили следующим образом: 3 г фекалий заливали небольшим количеством насыщенного раствора поваренной соли (в 1 л кипячёной воды растворяют 400 г соли), тщательно перемешивали, затем добавляли 50 – 100 мл этого раствора. Взвесь процеживали через металлическое сито или марлю в коническую колбу и оставляли для отстаивания. Через 30 – 45 мин. основная часть яиц в силу меньшего удельного веса по сравнению с насыщенным раствором поваренной соли всплывала на поверхность.

Приготовление флотационного раствора для патентуемого способа исследования проб фекалий: используется трехингредиентная флотационная смесь, включающая в себя насыщенные водные растворы хлористого цинка (ZnCl 2 , ρ – 1,82), хлористого натрия (NaCl, ρ – 1,19) и сахарозы (C 12 H 22 O 11 , ρ – 1,28) в соотношении 1,75 : 1 : 1 (объем / объем / объем). Удельный вес приготовленных флотационных растворов определяют с помощью денсиметра при t 25 ⁰С.

Результаты исследований представлены в Таблице 1.

В результате обследования разработанный способ позволил выявить почти на порядок большее количество яиц гельминтов. Этот метод показал 100%-ю инвазированность обследованных животных. Кроме того, патентуемый метод позволил выявить неоплодотворенные яйца Toxoascaris leonine . Метод Фюллеборна оказался гораздо менее эффективен.

1. Исследование проб фекалий собак, принадлежащих МУ «СОБЖ» г. Казани пос. «Мирный»

№ п/п	Группы животных	Количество яиц в 1 г фекалий
		Фюллеборна	Авторский
1	1 группа	34± 1,5	203 ± 3,5
2	2 группа	45± 4,1	300 ± 10,5
3	3 группа	50 ± 2,5	315 ± 1,51
4	4 группа	75 ± 3,8	424 ± 11,7
5	5 группа	100± 7,55	185 ± 8,68
6	6 группа	56± 3,5	125 ± 5,2

Резюме

Ведущим в диагностике тканевого токсокароза способом диагностики является иммунологический.

Существенное значение в постановке диагноза токсокароза имеет эпидемический анамнез.

Нами предложен и проверен на практике гельминтоовосокпический комбинированный метод диагностики токсокароза плотоядных, значительно превосходящий предложенные ранее.

GELMYNTOOVOSCOPY DYAGNOSIS OF TOXOCAROSIS

Dolbin D.A., Lutfullin M. H., Idrisov A.M.