Haematofunctional and immune status healthy cats and by complex therapy of herpesvirus rhinotracheitis with drug Feliferon®

Герпесвирусный ринотрахеит кошек признан в большинстве стран мира одной из основных причин заболеваний верхних отделов респираторных путей и глаз у домашних и диких кошек. Возбудитель болезни герпесвирус кошек тип 1 (FHV – 1) ДНК- содержащий вирус подсемейства герпесвирусы. Другие представители этого семейства включают герпесвирус лошадей и свиней тип 1, крупного рогатого скота тип 1 и 2, собак тип 1, человека – herpessimplexvirustupe 1 (HSV -1). FHV вызывает остро протекающую контагиозную форму заболевания неиммунных кошек, характеризующуюся катаральным воспалением верхних отделов дыхательного тракта, поражением глаз, лихорадочной реакцией, депрессией, анорексией и т.п. Нарушение условий содержания и кормления животных в питомниках по их разведению, перегруппировки, выставки, вязки, роды, лактация, лечение кортикостероидами и другие стресс – факторы сопровождаются выделением и распространением возбудителя инфекции в силу его реактивации из латентного состояния и экскрецию при обострении заболевания с носовыми, глазными, вагинальными истечениями, с молоком, спермой, со слюной и т.п.. На фоне ослабления иммунобиологической реактивности довольно часто наслаиваются осложнения, вызванные условно-патогенной микрофлорой (бронхиты, плевриты, пневмония, гастриты и энтероколиты, гингивитостоматиты, реже язвенные поражения кожи и др.)[1,2,3,6,8,10,11]. Уровень смертности от герпесвирусной инфекции у взрослых кошек относительно низкий. Как исключение – это гибель животных с резко выраженными признаками иммуносупрессии или котят раннего возраста «синдром увядания котят». В настоящее время для активной иммуно-профилактики этой болезни кошек рекомендуется отечественные и зарубежные вакцины, а для лечения препараты иммуноглобулинов человека, противовирусные сыворотки в сочетании с антибиотиками, сульфаниламидами, НПВС, иммуномодуляторами, антигистаминные препараты, витаминами С и группы В, поливитамины., симптоматические, дезинфицирующие, антитоксические и т.п. средства применяют по назначению ветспециалистов в общепринятых дозах [2,3,8].

Цель работы – изучить ряд биохимических и иммунологических показателей у кошек, больных герпесвирусным ринотрахеитом, при включении в схему-модель комплексной терапии нового отечественного интерферона кошек Фелиферон®.

Материал и методы. Клиникоэкспериментальные исследования проводились на клинически здоровых (норма) и больных герпесвирусным ринотрахеитом кошках в условиях клиник «Доктор Айболит» (г. Н.Новгород), «Кот и Пес» (г.Кстово, Нижегородской области), кафедры анатомии, хирургии и терапии Нижегородской ГСХА. ПЦР – анализ выполнялся в ветеринарном отделе ООО Медицинский центр «Наследственность» (г.Н.Новгород). В работе использовано 10 кошек, у которых был диагностирован инфекционный (герпесвирусный) ринотрахеит как моноинфекция. Комплексная терапия проводилась согласно ранее разработанной нами схемы-модели [2,3]. В опытной группе (n=5) больным животным назначался в дозе 400000 МЕ/гол.в/м 1 раз в день (1-5 сутки) российский рекомбинантный интерферон – омега кошки Фелиферон® (НТЦ «БиоИнвест», Россия, г. Москва) регистрационное удостоверение 77-3-8.142190 №ПВР-3-8.14/03048 [5]. Клинико– лабораторные исследования образцов венозной крови у подопытных животных исследовались согласно общепринятым методикам в наших работах и специальных руководствах [4,9].

Таблица 1- Динамика гематологических показателей и лейкоцитарной формулы у кошек больных ИРТ при лечении с Фелифероном и без него (M±m, n=5)

Показатели	Клинич. здоровые животные	Сроки исследований, сутки
		Начало	3		5		7
			О 4	К 5	О 6	К 7	О 8	К 9
Эр.,Т/л	6,32±	7,46±	6,93±	7,25±	6,84±	7,09±	6,73±	6,95±
	0,29	0,24xx	0,15	0,18	0,26	0,17x	0,25	0,38
Лейк.,Г/	8,83±	12,78±	10,52±	11,69±	9,43±	10,66±	9,31±	10,27±
л	0,27	0,30xx	0,18xx	0,25xx	0,31	0,22	0,46	0,48
Hb, г/л	132,8±	147,2±	138,1±	142,4±	135,6±	139,8±	136,0±	138,5±
	3,7	2,9x	2,6	2,3x	3,0	2,1	1,8	2,2
Ht,л/л	0,38±	0,49±	0,41±	0,47±	0,40±	0,43±	0,37±	0,39±
	0,02	0,03x	0,04	0,02x	0,03	0,01x	0,04	0,02
СОЭ,	2,6±	3,7±	3,2±	3,5±	3,0±	3,3±	2,7±	2,9±
мм/ч	0,11	0,18x	0,13x	0,16x	0,14x	0,17x	0,15	0,12
Базофи лы	-	-	-	-	-	-	-	-
Эозино	1,4±	0,9±	1,3±	1,0±	1,5±	1,3±	1,4±	1,2 ±
филы	0,12	0,15x	0,19	0,11	0,10	0,13	0,26	0,19
ММ (Ю)	-	3,2± 0,11	-	-	-	-	-	-
ПЯН	1,7±	3,9±	2,6±	2,1±	2,0±	2,5±	1,9±	2,2±
	0,15	0,21xx	0,23x	0,14x	0,24	0,16x	0,20	0,25
СЯН	63,6±	61,5±	62,4±	63,0±	60,1±	61,8±	59,5±	61,7±
	1,2	1,7	1,6	2,5	1,7	1,3	1,8	2,1
Лф.	31,8±	27,4±	31,5±	30,5±	34,7±	31,3±	35,5±	32,9±
	1,1	1,2x	1,0	1,3x	1,2	1,0xa	1,4	1,3
Мон.	1,5±	3,1±	2,2±	2,4±	1,7±	2,1±	1,7±	2,0±
	0,13	0,15x	0,18x	0,12x	0,17	0,15x	0,10	0,12

Примечания: Эр. – эритроциты, Т/л – терра = 1012, Лейк. – лейкоциты, Г/л – гига = 109, Hb – гемоглобин, Ht – гематокрит, СОЭ – скорость оседания эритроцитов; x-xx – p<0,05 – 0,01 -достоверность различий между клинически здоровыми и больными ИРТ подопытными кошками.

Результаты и выводы исследования. Для выполнения экспериментальных исследований при комплексном лечении с Фелифероном герпесвирусного ринотрахеита кошек использовано 10 животных с острым течением заболевания подтвержденного ПЦР при постановке диагноза с учетом анамнестических и клинических данных, лабораторного анализа образцов венозной крови (количество эритроцитов, лейкоцитов, гемоглобина, СОЭ, лейкоформулы). Симптомы у таких животных (на 2-3 день обращения к ветеринарным специалистам) включали достаточно выраженную лихорадочную реакцию с повышением температуры тела от 39,6 до 41,3 С°, угнетение общего состояния, вялость, тусклость шерстного покрова, отказ от корма, чихание, кашель, серозно-катаральные (у 3-х с примесью гноя) истечения из носа и глаз, эрозии на слизистой рта и носа (4 из 10 кошек). При общем анализе образцов крови обнаружилось повышение количества лейкоцитов, как ответная реакция на воспалительные изменения в области глаз и дыхательных путей. Повышение уровня эритроцитов, по–видимому, было обусловлено гипогидратацией вызванной с недостаточностью водно-солевого обмена на почве дисфункциональных изменений (анорексии) в желудочно-кишечном тракте больных животных. При этом, не исключалось отрицательное влияние воспалительного процесса в верхних отделах дыхательных путей, способствующих нарастанию количества эритроцитов и уровня гемоглобина как компенсаторной реакции на гипоксию и лихорадочную реакцию у кошек, страдающих герпесвирусной инфекцией.

Как показано в таблице 1, у больных животных наблюдалось ускорение СОЭ, указывающее на наличие воспалительного процесса, который, как известно, влияет на белковый состав плазмы крови и электрический заряд оболочки эритроцитов [4,9].Через трое суток, как видно из материалов таблицы 1, в опытной группе содержание эритроцитов приближалось к нормативным значениям у клинически здоровых кошек, тогда как в контрольной повышенный уровень эритроцитов оставался высоким вплоть до 5-х суток

(р<0,05). Однако концентрация гемоглобина оставалась повышенной только через трое суток в контрольной группе (p< 0,05). В это же время достоверно выраженный лейкоцитоз (p<0,01) обнаруживался в опытной и контрольной группах. Причем в контрольной группе он оставался достаточно высоким и через 5 суток (p< 0,05), что и подтвердило наличие достоверно повышенной СОЭ в контрольной группе по сравнению с таковой как в норме, так и в опытной группе (p<0,05). В целом, судя по представленным данным таблицы 1, можно заключить, что включение Фелиферона в комплексную схему лечения кошек, больных острой формой герпесвирусного ринотрахеита способствовало более раннему (через 3—е суток) восстановлению изучаемых показателей крови до нормативных величин. При этом, как показали результаты, ежедневных клинических осмотров в опытной группе нормализовались температура тела, частота пульса и дыхательных движений. Изучение и анализ состояния лейкоцитарной формулы у подопытных животных наглядно показали, что герпесвирусная инфекция у кошек изменяет процент гранулоцитарных и агранулоцитарных клеток, что было связано в первую очередь с наличием воспалительной реакции в верхних дыхательных путях, ротовой полости, роговицы, реже в легких и других органах. В частности, об этом свидетельствовал ядерный сдвиг влево за счет наличия ММ (юных) и повышенного процента палочкоядерных нейтрофилов, а также заметная эозинопения, сохранявшаяся в контрольной группе и через 3 –е суток после начала лечения (p<0,05). По всей вероятности, в организме больных ИРТ кошек, судя по исходным данным, наблюдались иммунные и аллергические реакции под влиянием вирусной инфекции. На это же указывали существенно выраженная лимфоцитопения и моноцитоз.

Через трое суток в опытной и контрольной группах обнаруживался повышенный процент палочкоядерных нейтрофилов, моноцитов (p<0,05). Такая тенденция сохранялась в контрольной группе и через 5 суток. В этой же группе через 3 суток оставался низким процент эозинофилов по сравнению с нормой и контролем (p<0,05).

Опираясь на показатели таблицы 2, нами рассчитывался ряд индексов, отражающий в общих чертах общее состояние больных животных в процессе комплексного лечения в опытной и контрольной группах по сравнению с клинически здоровыми кошками.

Таблица 2 - Динамика индексов при комплексном лечении ИРТ кошек с Фелифероном® (M±m, n = 5)

Показатели	Клинич. здоровые животные	Сроки исследований, сутки
		Начало	3		5		7
			О	К	О	К	О	К
ИК, у.е. (индекс Кребса)	2,21± 0,02	2,54± 0,06xx	2,23± 0,10	2,42± 0,05xa	1,82± 0,07x	2,10± 0,05xa	1,73± 0,05x	1,95± 0,04xa
ИСЛ, у.е.	2,10± 0,02	2,54± 0,07xx	2,10± 0,05	2,17± 0,03	1,83± 0,04	2,10± 0,05xa	1,77± 0,03	1,99± 0,04xs
ЯИ, у.е.	0,050± 0,003	0,166± 0,02xx	0,078± 0,004x	0,089± 0,005x	0,039± 0,001	0,074± 0,002x	0,060± 0,002	0,068± 0,002

Примечания: ИК-индекс Кребса, ИСЛ – индекс сдвига лейкоцитов, ЯИ – ядерный индекс.

Так, при расчете ядерного индекса было установлено, что при поступлении в клинику состояние больных кошек было умеренно тяжелым, через 3 суток – удовлетворительным в опыте и контроле, а через 5 суток – хорошим в опыте и удовлетворительным в контроле. Индекс Кребса (ИК), как видно из данных таблицы 2, четко обозначил превалирование активности нейтрофилов (врожденный иммунитет) над лимфоцитарной (адаптивный иммунитет). Как в начале заболевания, так и в контрольной группе на протяжении всего срока наблюдений. В опытной группе, наоборот, ИК постепенно снижался, указывая тем самым на нормализацию врожденных механизмов неспецифической защиты под влияние Фелиферона® начиная уже с 3-х суток (p<0,05), улучшая при этом реакции адаптивного иммунитета за счет нарастания процента клеток лимфоцитарного ряда. Подтверждение этому служили и результаты расчета ИСЛ.

Как известно, фагоцитоз является главным эффекторным механизмом врожденного иммунитета (неспецифической резистентности) организма животных и человека. Макрофаги, ПЯН и дендритные клетки являются своеобразным «профессиональными» фагоцитами. В конце XX- го столетия их рецепторный арсенал (Fc – рецепторы, рецепторы к С3,С5 и т.п.) обогатился рядом новых внеклеточных (гуморальных, мембранных) и внутриклеточных рецепторов, распознающих соответствующие структурные микробные компоненты (паттерны), а также их химические соединения – паттерн – распознающие рецепторы (PRR -patternrecognitionreceptors). Открытие таких паттернов, в частности пептидоглианов клеточной стенки грампозитивных и грамотрицательных бактерий – уникальных структур прокриотов с присущими только им химическими соединениями, а также соответствующих им внутриклеточных PRR – NOD - рецепторов позволило по-новому осмыслить взаимодействие и взаимовлияние мира сапрофитных и условно-патогенных микроорганизмов с организмом животных и человека. Нарушения в распознающих рецепторах клеток врожденного иммунитета потенциально опасны, т.к. способны обуславливать возникновение и развитие инфекционных, аллергических и аутоиммунных заболеваний. Эта важная роль фагоцитарных клеток во врожденном иммунитете предопределила изучение показателей данного феномена у ПЯН подопытных животных под влиянием комплексной терапии кошек, больных      сравнении с показателями клинически герпесвирусным    ринотрахеитом    с      здоровых животных.

препаратом Фелифероном и без него в

Таблица 3 - Функционально-метаболические показатели полиморфно-ядерных нейтрофилов (ПЯН) периферической крови у подопытных животных (M±m, n = 5)

Показатели	Клинич. здоровые животные	Сроки исследований, сутки
		Начало	3		5		7
			О	К	О	К	О	К
ФАН, %	72,3± 1,4	57,3± 1,8xx	61,3± 1,5x	59,4± 1,3x	65,6± 1,6xa	61,8± 1,5x	69,8± 2,3xa	62,7± 2,8
ФИ	9,2± 0,3	7,4± 0,1xx	8,1± 0,2x	7,7± 0,4x	8,9± 0,3	8,2± 0,2x	9,6± 0,5	9,1± 0,4
ФЧ	6,5± 0,2	5,3± 0,1x	5,6± 0,3xa	4,7± 0,2x	6.5± 0,4xa	5,1± 0,3	6,7± 0,2	6,4± 0,1
ФЕК, тыс.м.т./л	58,8± 1,7	67,6± 1,5xx	59,3± 1,4xa	55,1± 1,9x	56,8± 2,3	54,2± 2,5	62,4± 3,1	65,7± 2,9
НСТ СВ,%	0,14± 0,03	0,26± 0,05xx	0,20± 0,02x	0,22± 0,03x	0,17± 0,01	0,19± 0,01	0,12± 0,02	0,15± 0,03
НСТ АВ,%	68,4± 3,2	57,3± 1,9x	62,2± 1,3x	58,7± 2,2x	65,8± 1,7	60,5± 1,5x	70,3± 2,1	67,6± 2,2
КМАН	0,91± 0,02	0,79± 0,04x	0,86± 0,03	0,84± 0,02x	10,88± 0,04	0,86± 0,01x	0,89± 0,04	0,88± 0,03
Примечания: КМАН – коэффициент метаболической активности нейтрофилов, ИПКМН – интегральный показатель кислородзависимого метаболизма нейтрофилов, ИПИБР – интегральный показатель иммунобиологической реактивности нейтрофилов, ФМПН – функционально-метаболический показатель нейтрофилов; x-p<0,05 и xx-p<0,01 достоверность различий по сравнению с клинически здоровыми кошками; xa-xxa – межгрупповые различия, их достоверность.

Из представленных в таблице 3 данных следует, что ФАН у больных кошек до начала лечения заметно ослабевала (57,3±1,8% против 72,3 ±1,4). При этом одновременно и снижалась интенсивность фагоцитарной реакции ПЯН,о чем свидетельствовало уменьшение величины ФИ и ФЧ. В тоже время естественно и снижалась ФЕК – фагоцитарная емкость крови, связанная в основном с функциональным состоянием системы ПЯН. Из табличных данных видно, что у больных ИРТ кошек благодаря возросшей лейкоцитарной реакции достоверно увеличился данный показатель по сравнению с клинически здоровыми животными (р<0,01). Через 3 суток после начала комплексной терапии в опытной группе на фоне использования Фелиферона в большей степени по сравнению с контролем возрастает ФАН, ФИ и особенно ФЧ (5,6±0,3 против 4,7±0,2, р<0,05). Через 5 суток в опытной группе обнаруживалась более высокая ФАН и ФЧ (р<0,05) по сравнению с контролем, что обусловило увеличение ФЕК на 4,5% несмотря на существенное превышение количества лейкоцитов в этой группе (10,6±0,3 против 9,4 ±0,2 Г/л в опыте , р< 0,05). Через 7 суток ФАН оставалась выше в опытной группе (р<0,05) при практически равных значениях ФИ и ФЧ (р> 0,05). Тем не менее за счет некоторого увеличения числа лейкоцитов (10,3±0,5 против 9,4±0,5 Г/л, р>0,05) ФЕК в контроле оказалась также несколько выше чем в опыте (р>0,05). В целом, судя по полученным данным таблицы 5, можно заключить, что Фелиферон в опытной группе при включении его в схему-модель комплексной терапии ИРТ оказал стимулирующее (модулирующее) влияние на систему ПЯН, являющейся одним из важных звеньев врожденного иммунитета. Как показали результаты предыдущих исследований фагоцитарной реакции ПЯН, герпесвирусная инфекция кошек (ИРТ)

сопровождается ее ослаблением, о чем свидетельствовало достоверное снижение ФАН, интенсивность фагоцитарных процессов по уменьшению величины ФИ, ФЧ и ФЕК – фагоцитарной емкости крови (таблица 3). Использование в опытной группе Фелиферона существенно повышало функциональную активность ПЯН у больных ИРТ пациентов. С этой точки зрения большой интерес представляло изучение влияния Фелиферона на интимные механизмы фагоцитарной реакции ПЯН в динамике болезненного процесса, т.е., иными словами, на клеточное звено врожденного иммунитета (естественной, неспецифической резистентности) в организме подопытных животных за счет активации распознающих рецепторов. С этой целью нами проведено исследование изменений НСТ-теста и его СВ и АВ и рассчитать КМАН. Это позволило объективно охарактеризовать иммуностимулирующий (модулирующий) и противовирусный эффект Фелиферона. Судя по данным таблицы 3, в ней отражены изменения в кислородозависимом метаболизме ПЯН как в состоянии «покоя» у клинически здоровых кошек, так и в режиме метаболической активности, называемой «респираторным» или «дыхательным взрывом» в ответ на любое раздражение, чаще всего инфекционной природы.

Резюмируя, можно заключить, что новый российский рекомбинантный интерферон омега кошки Фелиферон® обладает противовирусным, иммуномодулирующим и отчасти антитоксическим действием при его включении в схему – модель комплексной терапии герпесвирусногоринотрахеита.

Резюме

В статье представлены результаты исследований влияния нового рекомбинантного интерферона – омега кошки Фелиферон® (НТЦ «БиоИнвест», г. Москва) в комплексной терапии герпесвирусного ринотрахеита. Установлено, что препарат обладает достаточно выраженным антивирусным и иммуномодулирующим действием.

HAEMATOFUNCTIONAL AND IMMUNE STATUS HEALTHY CATS AND BY COMPLEX THERAPY OF HERPESVIRUS RHINOTRACHEITIS WITH DRUD FELIFERON®.

KuznetsovaE.A., PakhmutovI.A.