Генетический полиморфизм HLA DRB1 специфичностей у беременных с гриппом A(H1N1)pdm2009

Автор: Тарбаева Долгорма Александровна, Белокриницкая Татьяна Евгеньевна

Журнал: Известия Самарского научного центра Российской академии наук. Социальные, гуманитарные, медико-биологические науки @izvestiya-ssc-human

Рубрика: Акушерство, гинекология, неонатология, педиатрия

Статья в выпуске: 5-4 т.16, 2014 года.

Бесплатный доступ

Проведено HLA-генотипирование локуса DRB1 у 163 заболевших гриппом A (H1N1)pdm2009 беременных. Обнаружена протекторная роль в отношении гриппа AH1N1pdm2009 генотипов HLA DRB1*01*04, DRB1*07*08, DRB1*11*13 (р

Грипп a (h1n1)pdm2009, система hla, drb1-генотип, беременность

Короткий адрес: https://sciup.org/148101972

IDR: 148101972

Текст научной статьи Генетический полиморфизм HLA DRB1 специфичностей у беременных с гриппом A(H1N1)pdm2009

Проблема гриппа A (H1N1)2009, вызвавшего пандемию, остается актуальной по настоящее время, поскольку ее печальные последствия, в том числе у беременных, еще не подведены. По данным официальной статистики в этот период в России переболело гриппом и ОРВИ 4,09% (13,26 млн.) населения [3]. В Забайкалье эта цифра составила 11,8% (128 463 случая). В целом в период эпидемии переболело гриппом 27,9% беременных края, у 9,4% из которых инфекционное заболевание осложнилось вируснобактериальными пневмониями. Среди заболевших беременных летальность была выше 0,12%, чем в общей популяции 0,05% (рχ2=0,05) [4].

В настоящее время установлено, что индивидуальные различия в характере иммунного реагирования на один и тот же антиген обусловлены генетически. Восприимчивость людей к инфекционным агентам всегда носит полиген-ный характер и определяется частотами встречаемости генов, которые варьируют в популяции, определяя варианты форм проявления болезни (легкое, среднетяжелое, тяжелое). При этом большое значение придается одной из наиболее полиморфных генетических систем человека – генам главного комплекса гистосовместимости (HLA – Human Leucocyte Antigens). Ген DR локуса DRB1* насчитывает более 400 аллельных вариантов и именно ему отводится роль одного из основных генов иммунного ответа человека [1]. Общепризнанно, что существуют HLA специфичности (аллели), обладающие

положительной ассоциацией с заболеванием, и, напротив, выполняющие роль «протекторов».

Цель исследования: выявление HLA маркеров предрасположенности к гриппу A(H1N1)pdm2009 и вариантам его течения у беременных женщин.

Материалы и методы исследования. Проведение исследования одобрено локальным этическим комитетом Читинской государственной медицинской академии (протокол №4 от 17.11.12 г.). Для реализации поставленной цели обследовано 163 женщины (основная группа), перенесших грипп А(H1N1)pdm09 во время беременности, из них 67 женщин перенесли грипп тяжелой степени, 66 – средней степени тяжести, 30 – легкой степени. В группу сравнения были включены путем случайного отбора 44 женщины, проживающие в г. Чите, которые в эпидемию 2009 г. были беременными и не заболели гриппом А(H1N1)pdm09 и ОРВИ. Женщины обеих групп были сопоставимы по паритету и возрасту.

Молекулярно-генетическое типирование для выявления 14 групп аллелей гена DRB1 главного комплекса тканевой совместимости человека проведено на ДНК, полученной из периферической крови. В качестве метода исследования использована полимеразная цепная реакция с детекцией результатов в режиме реального времени (Амплификатор «ДТ-96», ООО «ДНК-Технология», Москва) с использованием комплекта реагентов для выделения ДНК ПРО-БА-ГС-ГЕНЕТИКА и ПРОБА-РАПИД-ГЕНЕТИКА (ООО «НПО ДНК-Технология»). Статистический анализ выполнен в Центре БИОСТАТИСТИКА (руководитель В.П. Леонов). Для сравнения распределений частот генотипов и аллелей в двух группах использовался критерий χ2 с поправкой Йетса. Об ассоциации аллелей или генотипов с предрасположенностью к изучаемой патологии судили по величине относительного риска заболевания (ОР). Границы 95%-го доверительного интервала (CI) вычисляли методом B. Woolf. Значения уровня p<0,05 рассматривались как статистически значимые.

Результаты и их обсуждение. Сравнительный анализ частот DRB1-специфичностей между заболевшими гриппом A(H1N1)2009 и здоровыми беременными женщинами, а также изучение полиморфизма в зависимости от степени перенесенной инфекции не выявил значимой разницы. Отмечена лишь некоторая тенденция в сторону накопления среди заболевших пациенток аллелей DRB1 *04 (27,6% против 20,5% в контроле), DRB1*01 (23,3 vs 18,2%), DRB1*03 (19 vs 13,6%), DRB1*09 (6 vs 0%) (табл. 1).

Носительство генотипа DRB1*01*04 отмечено только у 9,1% здоровых резидентов при отсутствии такового среди беременных с гриппом (р=0,001). Аналогично этому протекторами выступили генотипы DRB1*07*08 (р=0,042; ОР=11,11), DRB1*11*13(р=0,032; ОР=3,7) (табл. 2). И, наоборот, генотипы *01*11, *07*15, *04*04, *04*13, *07*15 замечены только среди лиц с гриппом при их отсутствии в группе сравнения. В целом анализ распространенности генотипов в зависимости от степени тяжести перенесенной инфекции не выявил значимой разницы (табл. 3), однако риск тяжелого течения гриппа при носительстве генотипа DRB1*07*15 увеличивался в 3,4 раза (ОР=3,4; 95% ДИ 0,87,5). Генотип *16*16 встречался только у 1 едва не умершей женщины с тяжелым течением гриппа.

Таблица 1. HLA-фенотип у заболевших (по степени тяжести) и незаболевших гриппом беременных

Группы	Контрольная группа, n=44	Основная группа, n=163	Основная группа по степени тяжести перенесенной инфекции
Группы	Контрольная группа, n=44	Основная группа, n=163	легкое течение, n=30	среднетяжелое течение, n=66	тяжелое течение, n=67
HLA-фенотип	абс.число (%), частота гена	абс.число (%), частота гена	абс.число (%), частота гена	абс.число (%), частота гена	абс.число (%), частота гена
01	8 (18,2%) 0,09	38 (23,3%) 0,12	10 (33,3%) 0,17	16 (24,2%) 0,12	12 (17,9%) 0,09
03	6 (13,6%) 0,07	31 (19,0%) 0,1	4(13,3%) 0,07	16 (24,2%) 0,12	11 (16,4%) 0,08
04	9 (20,5%) 0,10	45 (27,6%) 0,14	6 (20,0%) 0,1	18 (27,3%) 0,14	21 (31,3%) 0,16
06	0	1 (0,6%) 0,00	1 (3,3%) 0,02	0	0
07	18 (40,9%) 0,20	45 (27,6%) 0,14	5 (16,7%) 0,09	17 (25,8%) 0,13	23 (34,3%) 0,17
08	4 (9,1%) 0,05	10 (6,1%) 0,03	3 (10,0%) 0,05	3 (4,5%) 0,02	4 (6,0%) 0,03
09	0	6 (3,7%) 0,02	1 (3,3%) 0,02	1 (1,5%) 0,01	4 (6,0%) 0,03
10	0	6 (3,7%) 0,02	2 (6,7%) 0,04	3 (4,5%) 0,02	1 (1,5%) 0,01
11	10 (22,7%) 0,11	36 (22,1%) 0,11	9 (30,0%) 0,15	16 (24,2%) 0,12	11 (16,4%) 0,08
12	2 (4,5) 0,02	7 (4,3%) 0,02	1 (3,3) 0,02	3 (4,5%) 0,02	3 (4,5%) 0,02
13	15 (34,1%) 0,17	42 (25,8%) 0,13	10 (33,3%) 0,17	15 (22,7%) 0,11	17 (25,4%) 0,13
14	2 (4,5%) 0,02	11 (6,7%) 0,03	2 (6,7%) 0,04	4 (6,1%) 0,03	5 (7,5%) 0,04
15	9 (20,5%) 0,11	39 (23,9%) 0,12	4 (13,3%) 0,07	19 (28,8%) 0,14	16 (23,9%) 0,12
16	5 (11,4%) 0,06	9 (5,5%) 0,03	2 (6,7%) 0,04	1 (1,5%) 0,01	6 (9,0%) 0,04

Примечание: сравнения частот HLA-фенотипов всех групп имеют значения р > 0,05.

Сложность выявления вариантов генов системы HLA, ассоциированных с благоприятным и неблагоприятным исходом различных инфекционных заболеваний, заключается в том, что гены HLA обладают высоким полиморфизмом и это далеко не единственный фактор, определяющий исход инфекционного процесса. Следует учитывать, что изобретение эффективных противоинфекционных препаратов усложняет поиск ассоциаций HLA и исхода заболевания [1].

Таблица 2. Частоты DRB1 генотипов HLA у заболевших и незаболевших гриппом беременных

Генотип	Незаболевшие беременные n=44	Заболевшие гриппом беременные n=163	_χ2	р	ОР (95% ДИ)
Генотип	абс., (%)	абс., (%)	_χ2	р	ОР (95% ДИ)
0104	4 (9,1%)	0	10,6	0,001 *	-
0101	0	5 (3%)	0,38	0,53
0107	2 (4,5%)	3 (1,8%)	0,2	0,6
0111	0	9 (5,5%)	1,39	0,24
0113	2 (4,5%)	3 (1,8%)	0,23	0,62
0115	1 (2,2%)	6 (3,7%)	0,00	0,9
0304	0	4 (2,4%)	0,19	0,67
0307	2 (4,5%)	5(3,1%)	0,00	0,9
0404	0	5 (3,1%)	0,3	0,5
0407	4(9,1%)	7 (4,3%)	0,77	0,37
0413	0	9 (5,5%)	1,38	0,24
0708	3 (6,8%)	1 (0,6%)	4,14	0,04 *	11,11 (0,4;12,6)
0715	0	9 (5,5%)	1,39	0,24
1113	6 (13,6%)	6(3,6%)	4,59	0,03 *	3,7 (0,6;6,5)
1115	2(4,5%)	2(1,2%)	0,64	0,42
1213	2 (4,5%)	0	3,48	0,06
1315	1 (2,3%)	6 (3,7%)	0,00	0,9
1616	0	1(0,6%)	0,5	0,48

Примечание: ОР - относительный риск , 95% ДИ - 95% доверительный интервал; - уровень значимости р<0,05.

Таблица 3. Частоты HLA DRB1 генотипов у заболевших гриппом беременных в зависимости от степени тяжести гриппа

Генотип	Степень тяжести гриппа			1-2		1-3		2-3
Генотип	легкая n=30 абс. (%)	средняя n=66 абс.(%)	тяжелая n=67 абс.(%)	х²	р	х²	р	х²	р
0101	1 (3,3%)	1 (1,5%)	3 (4,4%)	0,04	0,53	0,08	1,0	0,21	0,64
0111	3 (10%)	3 (4,5%)	3(4,4%)	0,32	0,57	0,34	0,56	0,16	0,69
0304	0	2 (2,9%)	2 (2,9%)	0,04	1,0	0,03	1,0	0,24	0,62
0413	0	6 (9%)	3 (4,4%)	1,5	0,17	0,29	0,55	0,51	0,47
0708	0	0	1 (1,4%)	-	-	0,16	1,0	0,00	0,94
0715	0	2 (2,9%)	7 (10,4%)	0,1	0,6	3,3	0,07	1,84	0,175
1113	1 (3,3%)	3 (4,5%)	2 (2,9%)	0,07	1,0	0,2	1,0	0,00	0,98
1616	0	0	1 (1,4%)	-	-	0,17	1,0	0,00	0,99

Примечание: 1-2 - сравнение частот генотипов HLA DRB1 при легком и среднетяжелом течении гриппа; 1-3 - сравнение частот генотипов HLA DRB1 при легком и тяжелом течении; 2-3- сравнение частот генотипов HLA DRB1 при среднетяжелом и тяжелом течении гриппа

В настоящее время опубликовано довольно много работ, посвященных поиску ассоциаций генетической системы HLA c ОРВИ. Показано, что молекулярно-генетическими предикторами заболеваемости ОРВИ у рабочих нефтега-зопромыслов являлись A10, В18, DR1, а маркерами резистентности - антигены HLA-A9, В7, В27, В40 [2]; фенотип HLA-B14 детерминирует повышенный риск возникновения повторных ларинготрахеитов при ОРВИ [5]. Индивидуумы с фенотипом HLA-B15 относительно резистентны к повторным заболеваниям. Тяжелое течение гриппа А чаще регистрировалось у юношей-носителей HLA-локусов -А10, -В8, -В14. Вместе с тем, среди пациентов с тяжелыми осложнениями гриппа в виде пневмонии со сливной формой инфильтрации HLA-B8 встречался в 2 раза реже, чем в целом в группе госпитализированных [6]. Тяжёлый острый респираторный синдром (ТОРС, атипичная пневмония), вызванный особым типом коронавирусов в 2002 году в Китае с летальностью до 4%, был ассоциирован с HLA-B*4601[7], а генам HLA 1 класса локуса С - Cw1502 и 2 класса локуса DR - 0301 присвоена протекторная роль [8].

Полученные нами результаты носят предварительный характер и требуют дальнейших популяционных исследований. Некоторые ассоциативные связи HLA с гриппом, выявленные нами, объяснимы, с одной стороны, множественностью антигенных детерминант у возбудителя инфекции, с другой – полигенным контролем иммунного ответа, что ограничивает реализацию биологических эффектов, детерминированных различными генами системы HLA. Возможно, генотипы, обнаруженные только у заболевших гриппом беременных, такие как *01*11, *04*04, *04*13, *07*15 могут претендовать на статус молекулярно-генетических маркеров повышенной восприимчивости к вирусу гриппа, а генотипы DRB1*01*04, *07*08, *11*13, напротив, могут выступать самостоятельными протекторами. При этом детерминанты HLA*07*15, *16*16 ассоциированы с тяжелым течением гриппа A(H1N)pdm2009.

Выводы:

1. Носительство генов HLA DRB1*01*04, DRB1*07*08, DRB1*11*13 выполняет протекторную роль в отношении гриппа A(H1N1)pdm2009.
2. Присутствие в фенотипе у беременных женщин DRB1*07*15 ассоциировано с тяжелым течением гриппа.
3. Генотип DRB1*16*16 выявлен только в 1 случае едва не умершей женщины с гриппом A(H1N1)pdm2009.

Список литературы Генетический полиморфизм HLA DRB1 специфичностей у беременных с гриппом A(H1N1)pdm2009

Болдырева, М.Н. HLA (класс II) и естественный отбор. "Функциональный" генотип, гипотеза преимущества "функциональной" гетерозиготности: Автореф. дис. докт. мед. наук. -М., 2007. 47 с.
Ильинских, Н.Н. Маркеры системы HLA у больных респираторными инфекциями у рабочих нефтегазопромыслов севера Томской области/Н.Н. Ильинских, Е.Н. Ильинских, Е.В. Ямковая и др.//Сборник научных трудов «Актуальные проблемы современной науки». -Томск, 2013. С. 67-68.
О санитарно-эпидемиологической обстановке в Российской Федерации в 2009 году: Государственный доклад. -М.: Федеральный центр гигиены и эпидемиологии Роспотребнадзора, 2010. 456 с.
Родина, Н.Н. Клинико-эпидемиологическая характеристика гриппа A(H1N1)09/Н.Н. Родина, Е.М. Скрипченко, А.А. Дорожкова//Мат. Всеросс. научно-практической конференции с международным участием «Итоги эпидемии гриппа». -Чита, 2010. С. 165-167.
Савченко, Н.А. Клинико-генетические аспекты острых стенозов гортани, трахеи и бронхов при острых респираторных вирусных инфекциях у детей: Автореф. дисс. канд.мед. наук. -СПб., 1994. 15 с.
Цыбалова, Л.М. Значение гетерогенности человеческой популяции по антигенам гистосовместимости и некоторых экологических факторов для эпидемического процесса при гриппе и ОРЗ: дисс… докт. мед. наук. -СПб., 2003. 329 с.
Lin, M. Association of HLA class I with severe acute respiratory syndrome coronavirus infection/M. Lin et al.//BMC Medical Genetics. 2003. V. 4. Р. 9.
Wang, S.F. Human-leukocyte antigen class I Cw 1502 and class II DR 0301 genotypes are associated with resistance to severe acute respiratory syndrome (SARS) infection/S.F. Wang et al.//Viral Immunol., 2011. V. 24, N 2. P. 421-426.

Еще

Статья научная