Гепатопротекторное действие модифицированного фитобактериального средства при остром токсическом гепатите

Гепатопротекторное действие модифицированного фитобактериально-го средства (МФС) исследовано на общепринятых экспериментальных моделях в условиях острого токсического поражения печени белых крыс тет-рахлорметаном CCl 4 .

По данным ВОЗ, заболевания печени также занимают существенное место в мире среди причин нетрудоспособности и смертности населения. Так, гепатит В является самой распространенной вирусной инфекцией, в мире около 2000 млн. инфицированных и 350 млн хронических носителей. Многообразными стали токсические и аллергические повреждения органов гепатобилиарной системы, как результат попадания с пищей и водой различных ксенобиотиков, включая фармакологические препараты. Это обусловливает большое социальное и медицинское значение создания и применения новых лекарственных средств для профилактики и лечения заболеваний органов гепатобилиарной системы, среди которых особого внимания заслуживают лекарственные средства природного происхождения [6].

Печень — самый крупный и сложный в метаболическом отношении орган, выполняющий разнообразные функции по синтезу и детоксикации различных веществ. Заболевания печени — острые и хронические воспалительные заболевания (гепатиты), лекарственные и алкогольные поражения печени, синдром почечной недостаточности, цирроз печени требуют осторожного назначения синтетических лекарственных средств, альтернативой которым является фитотерапия [1].

Комплексное МФС представляет собой сочетанное действие трех компонентов природного происхождения: минерального, растительного происхождения и пробиотика. В современном мире, в условиях усугубляющейся экологической ситуации, все больше внимания уделяется изысканию новых лекарственных средств природного происхождения [2].

Материал и методы исследования

МФС готовили на стерильном обезжиренном коровьем молоке с использованием активизированной чистой культуры бифидобактерий шт. B. longum B 379 M, сухого экстракта плодов шиповника Rosa (ГФ XI, ст. 38) (в экстракте из плодов шиповника аскорбиновой кислоты не менее 0,2%) и природный цеолит (ПЦ) Холинского месторождения (клиноптилолит) фракцией 0,1–1,0 мм (ТУ 2163-002-12763074-97). Содержание клеток бифидобактерий в готовом средстве 8-9 lg КОЕ/см3.

При исследовании возможности культивирования бифидобактерий на молочной основе с экстрактом плодов шиповника и ПЦ выявлено ускорение роста бифидобактерий с повышением их кислотообразующей способности [3].

Морфология клеток бифидобактерий в МФС сохраняла характерную для них бифуркацию, свойственную при культивировании бифидобактерий на среде Блаурокк (рис. 1).

Рис. 1. Бифидобактерии шт. В. longum B 379 M, выращенные на среде Blaurock. Окраска по Граму. Увел. 7 х 90

Характерная для бифидобактерий штамма B.longum B379M микроскопическая картина свидетельствует о том, что условия культивирования, состав питательной среды МФС отвечают требованиям нормального роста бифидобактерий в молоке.

В процессе приготовления бифидосодержащих средств на молочной основе самым важным свойством бактерий считают их быстрый рост и способность сквашивать молоко.

Известно, что бифидобактерии (облигатные анаэробы) почти не растут в молоке, в отличие от молочнокислых бактерий. Развитие бифидобактерий может зависеть от особых веществ, так называемых бифидус-факторов, которые практически отсутствуют в коровьем молоке. Химические исследования показали, что бифидус-факторы представляют собой смесь близких по составу олигосахаридов.

В настоящее время существует несколько направлений для получения олигосахаридов-промоторов (стимуляторов роста) для бифидобактерий. Одним из таких направлений является выделение олигосахаридов из растительного сырья. Стимулирующее действие олигосахаридов объясняется тем, что они играют важную роль в синтезе пептидогликана клеточных стенок бифидибактерий.

МФС вводили per os в дозе 1 мл/100 мг массы животных. В качестве препарата сравнения использовали кверцетин в изоэффективной дозе 50 мг/кг массы 1 раз в сутки. Контрольная группа животных получала дистиллированную воду в эквиобъемном количестве.

Опыты по моделированию острого токсического гепатита проводили на белых беспородных крысах введением 50%-ного масляного раствора тетрахлорметана (CCl 4 ) (ГОСТ 20288-86) в объеме 0,4 мл/100 г массы крысы ежедневно в течение четырех дней, который разводили ex tempore в стерильном оливковом масле в соотношении 1:1 [4, 6].

Экспериментальные исследования проводились в соответствии с Конвенцией по защите животных, используемых в эксперименте и других научных целях, принятой Советом Европы в 1986 г., и требованиями, регламентирующими работу с экспериментальными животными.

Результаты исследования и их обсуждение

По патогистологических исследованиях на 7-е сутки с момента вве-

дения четыреххлористого углерода в печени животных выявлены резкие структурные изменения, которые сводятся к значительным гемодинамическим нарушениям в виде полнокровия междольковых сосудов, расширения просвета центральных вен, утолщения их стенок с миграцией элементов крови в паренхиму органа, периваскулярного отека и расширения перивас- кулярного пространства, а также к выраженным изменениям в форме жировой дистрофии.

В ранние сроки исследования в центре и вокруг некротических очагов отмечено снижение активности сукцинатдегидрогеназы (рис. 2).

В паренхиме органа наблюдается в различной степени выраженная клеточная инфильтрация. Острый процесс повреждения печени тет-рахлорметаном протекает с участием пролиферативно-инфильтрационных реакций с образованием инфильтратов в портальных и перипортальных зонах по ходу кровеносных сосудов и внутри долек.

В печени животных на 7-е сутки (контрольная группа) выявлены резкие структурные изменения в виде периваскулярного отека с очагами некроза. Повреждения носят характер мелкокапельной и среднекапельной жировой дистрофии и клеточной инфильтрации. Характерны гемодинамические нарушения.

Рис. 2. Острый токсический гепатит, 7-е сутки. Печень белой крысы. Снижение активности сукцинатдегидрогеназы (А) по сравнению с ин-тактом (В). Окраска по Нахласу. Увел. 10 х 10

Рис. 3. Острый токсический гепатит, 14-е сутки. Контрольная группа. Печень белой крысы. Выраженная клеточная инфильтрация внутри долек по ходу сосудов и желчному протоку. Окраска гематоксилином и эозином. Увел. 10 х 20

На 14-е сутки все отмеченные нарушения продолжают сохраняться. Также выявлена деструкция стенок кровеносных сосудов, краевое стояние лейкоцитов у стенки сосуда с миграцией клеточных элементов в паренхиму органа. Гепатоциты с боковым или центральным расположением ядра, увеличены в размерах. Выражена клеточная инфильтрация внутри долек по ходу сосудов (рис. 3).

В паренхиме печени обнаруживали очаги некроза, локализованные чаще в центролобулярных зонах.

На фоне введения МФС в печени слабее выражены признаки токсического гепатита, в частности, жировая и клеточная инфильтрация, гемодинамические нарушения. На 7-е сутки введения модифицированного фитобактериального средства в паренхиме органа выявлены гипертрофированные и двуядерные гепатоциты и клетки Купфера. В большинстве случаев отсутствовали выраженные альтеративные изменения, отмечалась сохранность структуры долек и балок.

У животных, получавших МФС, на 14-е сутки опытов гемодинамические нарушения и изменения в печени были выражены в гораздо меньшей степени, чем у контрольных животных. Центролобулярные очаги некроза исчезли, хотя гепатоциты, заполнившие их, еще не приближались к норме. Об активности регенераторных процессов судили по выявлению крупных темноокрашенных клеток с гипохромными ядрами, по частоте митозов и увеличению числа двуядерных гепатоцитов.

Клеточная инфильтрация внутри долек и по ходу сосудов менее выражена. В инфильтратах преобладали гистиолимфоцитарные и макрофагальные элементы.

У животных, получавших МФС, быстрее проходили гемодинамические нарушения, отечный процесс, гораздо раньше по сравнению с контролем происходило замещение некротических очагов в центре долек вновь образованными гепатоцитами и за счет гипертрофии печеночных клеток, не подвергавшихся альтеративным изменениям, быстрее исчезали клеточные инфильтраты.

Во все сроки исследования вышеописанные признаки регенерации выявляли в печени животных, получавших МФС гораздо чаще, чем у животных контрольной группы [3].

При микробиологическом исследовании содержимого толстого отдела кишечника крыс отмечали, что МФС оказывало положительное действие на состав микрофлоры толстого отдела кишечника (табл. 1).

Так, повышался титр бифидобактерий и лактобацилл, снижалось количество энтерококков, стафилококков, клостридий, грибов рода Кандида, возрастало по сравнению с данными у животных контрольной группы количество полноценной формы кишечной палочки и, соответственно, снижалось число бактерий с ослабленными свойствами.

Таблица 1

Влияние модифицированного фитобактериального средства на состав микрофлоры кишечника белых крыс при остром токсическом гепатите (М±m, n=6) lgKOE/см3

Группы бактерий	Интактная группа ( Н2О )	Контрольная группа	Опытные группы, получавшие МФС
			7 сутки	14 сутки	21 сутки
Bifidobacterium sp.	7,26±0,39	4,71±0,32*	5,84 ±0,22	6,08 ±0,31**	6,63 ±0,26**
Lactobacillussp.	6,07±0,29	4,30±0,18*	4,39 ±0,26	4,92 ±0,17	5,53 ±0,24**
Clostridiumsp.	1,48±0,13	3,62±0,19*	2,83 ±0,20**	2,53 ±0,14**	2,00 ±0,16**
E.coli	5,31±0,23	5,58±0,26	5,44 ±0,16	5,53 ±0,18	5,64 ±0,14
Enterococcussp.	4,35±0,20	6,63±0,25*	6,21 ±0,23	4,93 ±0,22**	4,09 ±0,21**
Staphylococcus	3,16±0,15	5,00±0,18*	4,77 ±0,21	4,58 ±0,17	4,31   ±0,18 **
Candidasp.	1,29±0,10	3,64±0,18*	3,23 ±0,14	3,08 ±0,22	2,63 ±0,18**

Примечание: * — данные достоверны по сравнению с интактной группой при Р≤ 0,05; ** — данные достоверны по сравнению с контрольной группой при Р≤ 0,05.

Положительный эффект МФС на организм проявляется через нормализацию микробной экологии кишечника за счет стимуляции роста представителей индигенной микрофлоры, в результате синтеза витаминов и других ростстимулирующих факторов, нормализации рН, нейтрализации токсинов, изменения микробного метаболизма.

МФС реализует свое положительное влияние на физиологическую функцию и биохимические реакции либо непосредственно вмешиваясь в метаболическую активность клеток соответствующих органов и тканей, либо опосредовано через регуляцию функционирования биопленок на слизистых организма.

Заключение

В экспериментальных исследованиях на модели острого гепатита выявлена способность МФС подавлять процессы цитолиза, нормализовать активность ферментов и метаболизм в клетках печени. Гепатопро-текторное действие МФС сочетается с гиполипидемическим эффектом, тем самым предупреждая развитие дегенеративных процессов, перерождение клеток печени и возникновение фиброза.

Курсовое назначение исследуемого средства привело к торможению свободнорадикальных реакций в биологических мембранах гепатоцитов.

Скорость накопления МДА к 7 суткам развития токсического гепатита снижалась под действием модифицированного фитобактериального средства в 2,4 раза. Регуляция интенсивности ПОЛ данным средством уменьшала проницаемость и стабилизировала клеточные мембраны гепатоцитов, о чем свидетельствовало снижение активности аланинаминотрансферазы АлАТ под действием МФС на 61%. Активность щелочной фосфатазы в сыворотке крови при введении МФС снижалась почти в 2 раза, содержание общего билирубина также в значительной степени снижалось.

К 14-м суткам развития острого токсического гепатита у крыс исследуемое средство также оказывало благоприятное воздействие. Активность щелочной фосфатазы в сыворотке крови при введении МФС снижалась на 38%. Концентрация гликогена возрастала, по сравнению с показателями в контроле, в 1,5 раза.

К 21-м суткам эксперимента при введении МФС у животных с экспериментальным гепатитом в значительной степени тормозился процесс ПОЛ: содержание МДА в печени снижалось под действием МФС в 1,8 раза. Также стимулировались процессы синтеза гликогена в ткани печени.