Гепатозащитное действие липотона - нового фосфолипидного препарата природного происхождения

В литературе имеются единичные сообщения об эффективности препаратов и адаптогенов природного происхождения при лечении токсических , медикаментозных , вирусных поражений печени . Препараты животного происхождения , лекарственные растения , содержащие в оптимальных количествах биологически активные вещества , легко усваиваемые организмом , являются средствами не только симптоматической , но и патогенетической терапии (2, 3). Их использование позволяет восстановить нарушенный гомеостаз , структуру и целостность мембран гепатоцитов , ингибировать перекисное окисление липидов ( ПОЛ ) как одно из звеньев патогенеза гепатитов , стимулировать антиоксидантную защиту ( АОЗ ), активировать репаративные процессы печеночной ткани (6).

Целью настоящего исследования явилось изучение гепатопротекторных и антиоксидантных свойств липотона , оригинального препарата животного происхождения (7) на модели острого токсического СС I 4 - гепатита у крыс .

Методы исследования . Эксперименты выполнены на 50 белых беспородных крысах - самцах массой 190-210 г , которых содержали в виварии при естественном световом режиме на стандартной диете при свободном доступе к воде и пище . Острый токсический гепатит воспроизводили подкожным введением 50% масляного раствора четыреххлористого углерода из расчета 0,5 мл на 100 г массы тела животного в течение 3 дней . Были сформированы группы животных : интактная (10 особей ), контрольная (10 особей ), группа сравнения с применением гепатопротектора эссенциале (10 особей ) и 2 опытных группы с введением липотона ( по 10 особей в каждой ). Препараты начинали вводить через сутки после последнего введения тетрахлорметана , ежедневно , в течение 5 дней в ранее установленных эффективных дозах : липотон – 1,0 и 5,0 мкг / кг массы тела ( внутримышечно ); эссенциале – 0,3 мл / кг ( внутрибрюшинно ). Животные контрольной группы получали гепатотоксин и эквиобъемное количество растворителя . Крыс декапитировали под эфирным наркозом на 6 сутки . В сыворотке крови определяли активность аланинаминотрансферазы ( АлАТ ), аспартатаминотрансферазы ( АсАТ ), γ - глутамилтранспептитазы ( γ - ГТП ) и щелочной фосфотазы ( ЩФ ), содержание общего белка , альбумина , мочевины , креатинина , билирубина , холестерола , общих липидов со стандартными наборами реактивов фирмы “Lachema”. По ранее описанным методикам (1) определяли малоновый диальдегид ( МДА ), диеновые конъюгаты ( ДК ), кетодиены ( КД ), глютатионпероксидазу ( ГПО ), глютатионредуктазу ( ГР ), каталазу .

Достоверность различий оценивали с помощью существующих методов математической статистики , принятых в биологии и медицины .

Результаты и исследования . Введение четыреххлористого углерода ( гепатотропного яда ) крысам вызывало у них патологические изменения , отразившиеся в сдвигах гематологических показателей : лейкоцитоз – увеличение числа лейкоцитов , снижение содержания гемоглобина вследствие гемолиза эритроцитов и снижения гемопоэза , ядерный сдвиг влево ( увеличение количества палочкоядерных нейтрофилов ).

Изменение биохимических показателей сыворотки крови свидетельствовали о развитии синдромов цитолиза , холестаза и эндогенной интоксикации . Результаты эксперимента представлены в таблице 1. В группе контрольных животных по сравнению с нормой возрастала активность цитолитических ферментов : трансаминаз – в 3,9-6,1 раза , γ - ГГТ – 2 раза . Активность индикатора холестаза ЩФ повышалась в 2 раза , содержание общего билирубина сыворотки крови – в 6 раз . При анализе биохимических показателей так же отмечали снижение содержания альбумина в 1,5 раза , увеличение содержания холестерина на 51,4%.

Эндогенная интоксикация представляет ответ организма на токсическую агрессию экзогенной или эндогенной природы . При этом в организме накапливаются в избытке продукты нормального или измененного обмена веществ . Принято оценивать уровень эндогенной интоксикации по содержанию так называемых средних молекул . В группу молекул средней массы входят креатинин и мочевина (4). Это гидрофильные соединения , накопление их связано с нарушением функции почек , сопровождающим синдром эндогенной интоксикации . Содержание мочевины и креатинина в сыворотке крови контрольных животных достоверно возрастало в 1,5 раза и 14,8% соответственно .

Проведенные биохимические исследования сыворотки крови крыс отражали положительную динамику влияния липотона и эссенциале на течение экспериментального гепатоза ( табл . 1). Однако исследуемые препараты в разной степени препятствовали развитию характерных для СС I 4 - гепатоза метаболических нарушений . В результате терапии активность трансаминаз по отношению к группе СС I₄- гепатоз снижалась в 1,2-4,6 раз , ГГТ и ЩФ в 1,4-1,9 и 1,1-2,1 раза , билирубина – в 1,4-4,6 раза .

Наряду с этим при применении липотона в меньшей степени ( на 14,7%), чем при применении эссенциале ( на 78,6%) повышалась активность и маркерного фермента холестаза – щелочной фосфатазы . Липотон в дозе 5,0 мкг / кг ( по ДВ ) при СС I₄- интоксикации так же препятствовал росту уровня креатинина ( на 8,7%), мочевины ( на 24%) и холестерина ( на 71,7%).

Применение липотона животным, у которых вызывали развитие токсического ССl4-индуцированного гепатоза, снижало уровень МДА на 41,8% (в дозе 1,0 мкг/кг) и на 51,6 % (в дозе 5,0 мкг/кг), в то время как в группе животных, которых лечили эссенциале (табл. 2) это снижение было менее выражено (31,7%). Уровень первичных продуктов ПОЛ в опытных группах снижался на 20,9-47,8% .

• 1.    Влияние липотона и эссенциале на биохимические показатели сыворотки крови крыс при токсическом гепатозе

• 2.    Влияние липотона на показатели ПОЛ в крови крыс при токсическом повреждении печени

Показатели	СС I 4 - индуцированный гепатоз
	Контроль	ССI 4 -гепатоз	CCl 4 + эссенциале	CCl 4 + липотон
				1,0 мкг/кг	5,0 мкг/кг
АсАТ, ЕД/л	17,6±1,9	67,9±1,27*	58,5±2,51*	15,81±2,04 а	14,9±2,34 а
АлАТ, ЕД/л	36,6±2,8	222,3±14,7*	59,5±3,02* а	87,4±11,8* а	34,8±5,10 а
ЩФ, ЕД/л	74,4±15,2	146,6±3,65*	132,9±33,2*	71,49±8,96 а	85,3±13,2 а
γ-ГГТ, ЕД/л	18,08±4,8	35,5±4,44*	25,11±2,57*	21,74±4,80	18,50±4,30 а
Общий белок, г/л	71,4±5,4	65,7±3,40	67,0±4,80	68,7±4,90	74,30±3,43
Альбумин, г/л	41,9±2,58	27,6±0,37*	33,2±1,95 а	38,4±3,90 а	40,22±1,20 а
Креатинин, кМ/л	163,1±6,2	187,2±5,178*	176,3±8,93	172,6±9,11	170,9±5,11
Мочевина, мМ/л	5,20±0.21	7,80±1,61*	6,24±0,58*	7,80±1,61	5,93±0,42 а
Общ. липиды, г/л	2,77±0,09	3,95±0,11*	3,18±0,07* а	2,93±0,10*	2,90±0,08*
Холестерин,мМ/л	2,10±0,14	3,18±0,07*	1,40±0,25* а	2,11±0,29 а	0,90±0,11* а
Билирубин,мкМ/л	1,70±0,23	10,2±1,45*	7,30±1,47*	3,30±0,90 а	2,22±0,23 а

* - Р<0,05-0,001 по сравнению с контролем; ^а - Р<0,05-0,001 по сравнению с СС1 4

При применении липотона активность глутатионзависимых ферментов увеличивалась в среднем на 19,0-31,5% и 9,4-16,0%. Наиболее выраженное действие липотон оказывал в дозе 5,0 мкг / кг .

Группа животных	Диеновые конъюгаты, D 232 /мг липидов	Кетодиены, D 278 /мг липидов	МДА, мкМ/л
Контроль	0,126 ± 0,008	0,034 ± 0,009	1,30 ± 0,02
ССl 4	0,276 ± 0,016*	0,067 ± 0,006*	2,87 ± 0,11*
Эссенциале + CCl 4	0,191 ± 0,046	0,049 ± 0,011	1,96 ± 0,04* а
Липотон, 1,0 + CCl 4	0,189 ± 0,021* а	0,053 ± 0,018	1,67 ± 0,15* а
Липотон, 5,0 + CCl 4	0,169 ± 0,012* а	0,035±0,007 а	1,39 ± 0,09 а

* - Р < 0,05-0,001 по сравнению с контролем; ^а - Р < 0,05-0,001 по сравнению с СС1 4

Фосфолипиды являясь важным структурным звеном клеточных мембран и мембран органелл, регулируют проницаемость биомембран, активность мембраносвязанных ферментов, обеспечивая физиологическую норму процессов окислительного фосфорилирования в клеточном метаболизме. Таким образом, с одной стороны, фосфолипиды, входящие в состав липотона обладают способностью восстанавливать мембраны клеток. Их основу составляет полиненасыщенный фосфотидилхолин (ПФХ), который благодаря структурному сходству с мембранными фосфолипидами гепатоцитов, способен встраиваться в поврежденные мембранные участки, как бы «заклеивая» их и нормализуя мембранную проницаемость и функционирование клетки (5, 8).

С другой стороны , фосфолипиды липотона - сложные жироподобные вещества , представляющие собой эфиры фосфатидных и ненасыщенных жирных кислот ( в основном олеиновой и линолевой ), методом конкурентного ингибирования перекисных процессов : встраиваясь в биомембраны , ненасыщенные жирные кислоты способны принимать на себя токсикогенные воздействия вместо мембранных липидов печени . Таким образом , нормализуются функции печени и возрастает ее дезинтоксикационная роль .

Выводы . 1. Установлено мембранопротекторное и антиоксидантное действие липотона , что подтверждается уменьшением активности аминотрансфераз , содержания в сыворотке крови общего билирубина , конечных ( малоновый диальдегид ) продуктов липопероксидации . 2. Механизм гепатопротекторного влияния липотона обусловлен восстановлением нормального спектра мембранных фосфолипидов , его антиоксидантным действием , улучшением антитоксической функции печени .

ЛИТЕРАТУРА : 1. Бузлама В . С . Методическое пособие по изучению процессов перекисного окисления липидов и системы антиоксидантной защиты организма животных / В . С . Бузлама , М . И . Рецкий , Н . П . Мещеряков , Т . Е . Рогачева // Воронеж , 1997. – 35 с . 2. Васильев А . В . Лекарственные растения России – неиссякаемый источник для создания новых высокоэффективных лечебно - профилактических препаратов и биологически активных пищевых добавок / А . В . Васильев , Т . П . Полоз , Н . Н . Соколов // Вопр . мед . химии . – 2000. – 46 (2). – С . 101-109. 3. Епишин А . В . Применение антиоксидантов у больных хроническими заболеваниями гепатобилиарной системы / А . В . Епишин , Г . И . Рудяк // Врачебное дело . -1990. - № 4. – С . 24-27. 4. Копытова Т . В . Молекулы средней массы как субстрат эндогенной интоксикации при тяжелых дерматозах / Т . В . Копытова // Фундаментальные исследования . – 2006. – № 9 – С . 7-10. 5. Подымова С . А . Болезни печени / С . А . Подымова . – М .: Медицина , 1998.314 с . 6. Саратиков А . С . Эффективность гепатозащитных средств при экспериментальном хроническом гепатите / А . С . Саратиков , А . И . Венгеровский , Н . О . Батурина , B.C. Чучалин // Эксперим . и клин . фармакол .- 1995. - Т .59. - № 1. - С . 24-26. 7. Патент № 2237486 Россия , C1, 7 А 61 К 35/50. Способ получения биологически активных липофильной и гидрофильной фракций плаценты свиной / С . В . Шабунин , Г . А . Востроилова , Н . П . Мещеряков , Н . Ф . Курило и др .; ЗАО НПП « Агрофарм » (RU) –

2003124738; Заявл . 07.08.2003; Опубл . 10.10.2004; Бюл . № 28 // ИСМ . – 2004. 8. K.-J. Gundermann, The «essential» phospholipids as a membrane thera peutic. Szczecin. (1993).

ГЕПАТОЗАЩИТНОЕ ДЕЙСТВИЕ ЛИПОТОНА – НОВОГО ФОСФОЛИПИДНОГО ПРЕПАРАТА ПРИРОДНОГО ПРОИСХОЖДЕНИЯ

Востроилова Г . А ., Баранова Т . Ю ., Ермакова Т . И .

Резюме

Проведено исследование гепатопротекторной активности оригинального комплекса животного происхождения , в состав которого входят фосфолипиды , триглицериды , ненасыщенные жирные кислоты , витамины А и Е , микроэлементы : цинк , марганец и др . Установлено , что механизм гепатопротекторного влияния липотона обусловлен восстановлением нормального спектра мембранных фосфолипидов , его антиоксидантным действием , улучшением антитоксической функции печени .

LIPOTON – A NEW PHOSHPOLIPID NATURAL PREPARATION OF HEPATO-PROTECTIVE ACTION

Vostroilova G.A., Baranova T.Yu., Yermakova T.I.