Гипотермическое хранение декриоконсервированных эритроцитов, заготовленных в закрытой системе

троцитов производства ОАО «Синтез», устройство для стерильного соединения полимерных трубок TSCD ®-II Terumo. Морфофункциональное состояние ОРЭ после криоконсервирования оценивали с помощью комплекса общепринятых лабораторных методик, показателей, полученных с использованием газоанализатора RADIOMETER ABL800 FLEX и гематологического анализатора М10 Medoniс M-Series, АТФ определяли хемилюминесцентным методом на флуориметре Bio Tek Fl×800. Исследование острой токсичности разработанных растворов проводилось на крысах в соответствии с требованиями фармакопейной статьи «ОФС.1.2.4.0004.15.», пирогенных свойств растворов – на кроликах («ОФС.1.2.4.0005.15. Пирогенность»).

Результаты. Создание замкнутой («закрытой») системы при безаппаратном методе криоконсервирования эритроцитов (патент на полезную модель №180533 от 15.06.2018 г.), обеспечивающей герметичность на всех его этапах, создало предпосылки для разработки раствора для гипотермического хранения ОРЭ. Были разработаны композиции добавочных растворов, содержащие основные субстраты для поддержания энергетического потенциала отмытых размороженных эритроцитов, вещества, сохраняющие резистентность мембраны клеток и равновесие осмотического давления, ингредиенты, воздействующие на внутриклеточный рН, естественный антигипоксант.

По результатам исследований in vitro выбраны два варианта раствора оптимального состава, который по основным показателям морфофункциональной сохранности эритроцитов во взвеси (проценту гемолиза, содержанию свободного гемоглобина, АТФ, осмотически неустойчивых эритроцитов, р50, MCV) превосходит эритроконсервант SAG-M, широко использующийся для ОРЭ за рубежом.

Эффективность раствора показана в восьми сериях экспериментов по хранению отмытых размороженных эритроцитов, кри-оконсервированных аппаратным (с использованием аппарата Haemonetics ACP) и безаппаратным методами, при температурах -40°С и -80°С. Так, через 1 неделю хранения при +4°С взвесей отмытых размороженных эритроцитов, криоконсервированных при

-40°С, в экспериментальном растворе отмечены низкие процент гемолиза – 0,29±0,027 и содержание осмотически неустойчивых эритроцитов – 2,6±0,52%, высокие уровень АТФ – 5,5±0,20 мкмоль/г Hb и морфологический индекс – 87,0±1,68. Содержание внеклеточного калия (6,8±0,46 ммоль/л) и лактата (8,7±0,42 ммоль/л) соответствуют их содержанию в нативной эритроцитной массе 2-х суток хранения. Показано минимальное снижение рH (до 6,90 ± 0,012) за счет оптимальной буферной системы раствора.

Исследование первичных биологических свойств вариантов нового добавочного раствора на двух видах лабораторных животных показало, что приготовление его по разработанной технологии позволяет получить стерильный, апирогенный, не обладающий острыми токсическими свойствами раствор.

Разработана технологическая инструкция по получению нового отечественного добавочного раствора для хранения размороженных и отмытых эритроцитов в учреждениях службы крови.

Выводы. Разработанная авторами модификация изделий для безаппаратного криоконсервирования и декриоконсервирования эритроцитов (полезная модель) обеспечивает стерильное соединение магистралей контейнеров с растворами и емкости для отмывания, что исключает возможность бактериальной контаминации взвеси отмытых размороженных эритроцитов и повышает ее инфекционную безопасность.

Применение нового добавочного раствора позволит увеличить срок хранения декриоконсервированных эритроцитов c 24-х часов до 7 суток (целевой срок хранения взвеси отмытых размороженных эритроцитов) и более. Включение в его состав естественного анти-гипоксанта (фумарата натрия) может оказывать положительное влияние не только на сохранность эритроцитов, но и на эффективность проводимой гемотерапии. Использование разработанного добавочного раствора будет способствовать повышению качества и доступности ареактогенного эритроцитного компонента крови для оказания трансфузиологической помощи населению, в том числе в труднодоступных и удаленных населенных пунктах Российской Федерации.