Гистоморфология двенадцатиперстной кишки поросят при неспецифическом гастроэнтерите

Введение. Известно, что гастроэнтерит является постоянным спутником новорожденных животных в первые дни жизни и, как правило, продолжает беспокоить молодняк и в более старшем возрасте [4, 5].

Поэтому одним из важнейших направлений современной ветеринарной медицины является разработка и совершенствование средств и методов ранней диагностики болезней молодняка сельскохозяйственных животных и на этой основе создание надежной защиты от болезней, среди которых большое место занимают болезни пищеварительной системы [2, 3].

Цель исследований . Изучить гистологические и морфометрические изменения двенадцатиперстной кишки поросят, больных неспецифическим гастроэнтеритом.

Материалы и методы исследований. Исследования проводили в период с 2006 по 2013 год в лаборатории кафедры патологии, морфологии и физиологии факультета ветеринарной медицины и зоотехнии Дальневосточного государственного аграрного университета, а также в ФГУСП «Поля-ное» села Крестовоздвиженки Константиновского района Амурской области.

Объектом исследования были поросята-отъемыши живой массой 10–13 кг в возрасте 35–40 дней. Поросята содержались в маточниках. Животных кормили 5 раз в день, в одно и то же время суток. Рацион состоял из комбикорма СПК-3 для поросят-отъемышей и овсяной каши. Поение осуществлялось при помощи автоматической поилки.

Для проведения опыта среди поросят-отъемышей отбирались животные с явной клинической картиной гастроэнтерита, из которых была сформирована группа из 10 голов.

Для установления гистологических и морфометрических изменений двенадцатиперстной кишки на микроскопическом уровне материал получали от вынужденно убитых и павших животных. Вскрытие проводили в ФГУСП «Поляное» села Крестовоздвиженки Константиновского района Амурской области и в прозектории ФВМЗ ДальГАУ.

Для установления микроскопических изменений отбирался патологический материал для гистологического исследования (12-перстная кишка), который фиксировали в 10%-м водном нейтральном формалине, дегидрировали в спиртах возрастающей крепости, заливали в парафиновые блоки, делали гистосрезы на санном микротоме МС-2 толщиной 4–6 мкм и окрашивали гематоксилином Эрлиха и эозином, а также прочным зеленым по ван Гизон. С помощью ШИК-реакции в препаратах выявляли нейтральные ШИК-положительные соединения типа гликогена и нейтральные гликозаминогликаны (ГАГ). Азур II – эозином по Романовскому, в препаратах выявлялись экзо-криноциты с ацидофильными гранулами (клетки Панета) и микроорганизмы в наложениях слизи на поверхностных каемчатых эпителиоцитах и столбчатых эпителиоцитах кишечных желез. Основным коричневым по Шубичу и альциановым синим идентифицировались сульфатированные гликозаминогликаны [1].

В гистологических и гистохимических препаратах слизистой оболочки (СО) двенадцатиперстной кишки проводилось морфометрическое изучение СО, отражающее состояние ее эпителиального пласта и собственной пластинки; толщину СО и глубины желез; высоту поверхностных и железистых эпителиоцитов, а также инфильтрацию их межэпителиальными лимфоцитами, эозинофильными и нейтрофильными гранулоцитами; содержание бокаловидных экзокриноцитов, а также их активность в эпителиальном пласте; количество митозов в эпителии желез, а также высоту поверхностных и железистых эпителиоцитов.

Микрометрические исследования 12-перстной кишки выполняли при помощи окуляр-микрометра МОВ-1-15М. Математическую обработку данных осуществляли с помощью программы Microsoft Excel 2003 по общепринятым методам вариационной статистики. Фотографии получали с помощью микроскопа Альтами 104 и цифровой фотосъемки «Samsung ST 50».

Результаты исследований и их обсуждение. При патогистологическом исследовании в СО 12-перстной кишки у поросят с признаками острого гастроэнтерита (рис.) выявлялась картина острого катарального дуоденита. При этом 63,9 % учитываемых нами морфометрических показателей отличались от таковых в норме (рис., А).

На поверхности кишечных ворсинок определялись значительные наложения слизи с единичными лимфоцитами в ней. Слизь весьма интенсивно окрашивалась ШИК-реактивом и альциановым синим. Толщина СО, высота кишечных ворсинок и глубина кишечных желез не отличались от таковых в норме. Кишечные ворсинки меняли свою форму с пальцевидной на листовидную. При этом ширина кишечных ворсинок доверительно повышалась. Просвет кишечных желез слегка расширялся и был заполнен умеренным количеством ШИК-позитивного и альцианположительного секрета.

Высота столбчатых эпителиоцитов ворсинок снижалась, но тем не менее они имели цилиндрическую форму (рис., Б). Их гиперхромные ядра смещались в цитоплазме в область трети высоты клетки. Эозинофильная цитоплазма эпителиоцитов ворсинок находилась в состоянии зернистой и вакуольной дистрофии, в ней нейтральные и кислые ГАГ имели весьма умеренную интенсивность окраски. Толщина исчерченной каемки эпителиоцитов ворсинок не менялась, но становилась разреженной и теряла четкие контуры.

Нейтральные и кислые ГАГ в ней умеренно окрашивались. В эпителиальном пласте ворсинок процент бокаловидных экзокриноцитов значительно возрастал. Мукоциты эпителия ворсинок находились в состоянии повышенной секреторной активности. Нейтральные и кислые ГАГ в их цито- плазме окрашивались весьма умеренно. В эпителии кишечных ворсинок количество межэпителиальных лимфоцитов (рис., В) почти вдвое превышало норму, тогда как число эозинофильных гранулоцитов в нем увеличивалось почти в четыре раза. Большинство межэпителиальных лейкоцитов было с зонами лизиса.

Высота столбчатых экзокриноцитов кишечных желез у этих больных животных увеличивалась, но тем не менее они имели кубическую форму. Их нормохромные ядра перемещались в цитоплазме из базальной области на уровень нижней трети высоты клеток. Кислые и нейтральные ГАГ в цитоплазме эпителиоцитов окрашивались весьма интенсивно. В эпителиальном пласте кишечных желез процент бокаловидных экзокриноцитов повышался (рис., Г).

Острый катаральный дуоденит: А - изменение формы кишечных ворсинок с пальцевидной на листовидную. ШИК-реакция, увеличение ок.10; об. 4; Б - столбчатые эпителиоциты ворсинок.

Окраска гематоксилином и эозином, увеличение ок.10; об. 40; В - лимфоидная инфильтрация концевых отделов желез и подслизистого слоя. Окраска гематоксилином и эозином, увеличение ок.10; об. 40; Г - активная секреция бокаловидных клеток. Окраска гематоксилином и эозином.

Ув. ок. 10 об. 40

Мукоциты эпителия крипт находились в состоянии повышенной секреторный активности. Нейтральные и кислые ГАГ в их цитоплазме окрашивались весьма интенсивно. В эпителии кишечных желез повышалось количество межэпителиальных лимфоцитов и эозинофильных гранулоци- тов (16,9 ±0,8 и 0,3±0,07% соответственно), большинство из которых были с зонами лизиса. Число экзокриноцитов с ацидофильными гранулами в дне крипт значительно уменьшалось. Цитоплазма этих клеток содержала крупные, немногочисленные эозинофильные гранулы. Подслизистые железы поднимались в собственную пластинку СО, их просвет умеренно расширялся и был заполнен слабоэозинофильным секретом. Высота эпителия этих желез снижалась. Цитоплазма эпителия желез была слабоэозинофильной и ШИК-позитивной. В эпителиальном пласте желез повышалось количество межэпителиальных лимфоцитов. Отмечалась умеренная атрофия подслизистых желез.

Состояние слизистой оболочки 12-перстной кишки у больных с гастроэнтеральной формой в разгаре болезни

Примечание: СЭВ – столбчатые эпителиоциты ворсинки; ЭКЖ – эпителиоциты кишечных желез.

Выводы. Таким образом, изменения СО 12-перстной кишки у больных с гастроэнтеральной формой в разгар болезни характеризуются повышением числа бокаловидных экзокриноцитов в поверхностном эпителии и эпителии кишечных желез, гиперпродукцией слизи мукоцитами, увеличением в собственной пластинке плотности воспалительного клеточного инфильтрата за счет лимфоцитов, нейтрофильных и эозинофильных гранулоцитов и расширением сосудов микроциркулятор-ного русла в собственной пластинке.