Гистопатологические изменения в печени котят Felis catus при экспериментальном заражении Diphyllobothrium dendriticum (Nitzsch, 1824) (Pseudophyllidea: Diphyllobothriidae)

Работа выполнена при финансовой поддержке гранта БГУ «Научные и инновационные исследования, 2006 г,».

Установлено экспериментально, что структура функциональных изменений печени кошек, зараженных Diphyi-labothrium dendriticum имеет неспецифическую природу. Сосудистые дефекты, лейкоцитная реакция и активация reticuloendothelial cells (macrophages) в печени зараженных особей об иммунном характере инвазионного процесса и токсичности продуктов выделяемых лентецом чаечным, для котят, которые не являются, облигатным дефинитивным хозяином паразита.

S. V. Pronina, О.Е. Mazur, L. V. Tolochko

HISTOPATHOLOGICAL CHANGES IN THE LIVER OF KITTENS FEUS CATUS AT EXPERIMENTALLY INFECTION WITH DIPHYLLOBOTHRIUM DENDRITICUM (NITZSCH, 1824) (PSEUDOPHYLLIDEA: DIPHYLLOBOTHRIIDAE)

It is established experimentally that the structure functional alterations in the liver of lattens infected with Diphyllobothrium dendriticum have nonspecific nature. The vascular abnormalities, the leukocytic reaction and the activation of reticuloendothelial cells (macrophages) in the liver of the infected individuals testify to the immune character of the invasive process and to the toxicity of tapeworms ’ vital functions products for kitten which are not obligate definitive host.

Дифиллоботриоз является широко распространенным гельминтозом среди населения Российской Федерации и имеет тенденцию к увеличению. В 1999 г. по сравнению с

1998 г. количество больных дифиллоботрио-зом увеличилось на 3,3% (Сыскова и др., 2001). Уровень заболеваемости дифиллобот-риозом в Республике Бурятия выше средне- федерального. В Бурятии дифиллоботриозом в основном болеют жители районов, прилегающих к Байкалу или озерным системам (Селенгинский, Еравнинский), где регистрируется от 54 до 240 случаев заболевания на 100 тыс. населения (Пронин, 2000).

Из трех известных в Байкальской Сибири дифиллоботриид (Diphyllobothrium latum, D, dendriticum и D. ditremum) основным возбудителем дифиллоботриоза человека и животных в Прибайкалье является D. dendriticum (лен-тец чаечный). Данные о характере патогенного влияния паразита на окончательного хозяина, у которого он локализуется в кишечнике, весьма ограничены (Герасимова и др., 1969; Майборода и др., 1987; Пронина, Тимошенко, 1991) и нуждаются в значительном пополнении для получения целостной картины патологического процесса при заражении D. dendriticum.

Печень занимает центральное место в регуляции обменных процессов, обезвреживает токсические вещества эндогенного и экзогенного происхождения, а принимая участие в выработке факторов гемо- и иммуногенеза, играет важную роль и в иммунном статусе организма. Все это свидетельствует об исключительной значимости органа в оценке патогенеза дифиллоботриоза.

Цель работы заключалась в выявлении структурных изменений в печени млекопитающих при экспериментальном заражении плероцеркоидами D. dendriticum.

Материал и методы

Для моделирования инвазионного процесса использовали беспородных котят в возрасте 18 суток. Животных разделили на 3 группы (п=3): 1-я - контрольная (здоровые котята); 2ая и 3-я - подопытные. Подопотных котят 2-й группы заразили однократно, перорально плероцеркоидами D. dendriticum (извлеченными из байкальского омуля) в дозе 8 зкз. плероцеркоидов на одно животное, 3-й группы в дозе 16 экз. плероцеркоидов. На 7-е сутки после заражения котят декапитировали. Кусочки печени фиксировали в 10%-ном нейтральном формалине и жидкости Карнуа, Парафиновые срезы толщиной 5-6 мкм окрашивали гематоксилином Эрлиха и эозином, по методу Маллори и азур П-эозином. Гликоген выявляли постановкой ПАС-реакции, нуклеиновые кислоты - окраской галлоцианин-хромовыми квасцами по Эйнарсону. Экстрагирование гликогена проводили обработкой контрольных гистопрепаратов амилазой слю ны в течение часа при температуре 37 °C, экстракцию РНК - 10%-ным раствором холодной хлорной кислоты в течение 3 часов. Общий белок в печени выявляли окрашиванием гистосрезов бромфеноловым синим по Бонхег.

Для оценки микроморфологических изменений в печени у интактных и зараженных котят определяли ядерно-цитоплазматическое отношение гепатоцитов в перипортальной зоне, площадь сечения центральной и междольковой вен, площадь портальной зоны, диаметр синусных капилляров, определяли абсолютное и относительное содержание двухядерных клеток, деструктивных ядер в центральной и портальной зонах. Гистоструктуры измеряли под микроскопом «Мойс» с использованием программы «Motic Images 2000» с учетом рекомендаций (Автандилов, 1990). Полученные цифровые данные обработаны статистическими методами (Лакин, 1990).

Результаты

У зараженных котят наблюдается лейкоцитарная инфильтрация капсулы, покрывающей орган, портальных зон (диффузная и мелкоузелковая), наличие мелкоочаговых скоплений лимфоцитов в синусных капиллярах и пристеночное их прилегание. Площадь портальных зон у зараженных достоверно превосходит таковую у интактных животных, что обусловлено увеличением и огрубением соединительной ткани, сопровождающей триады, пролиферацией ретикулоэндотелиальных клеток (макрофагов). Коллагеновые волокна выявляются и в стенке сину-соидов, особенно в портальных зонах. У одного котенка склеротический процесс заходит еще дальше. В печени присутствовали два островка гепатоцитов, окруженных грубоволокнистой соединительной тканью. Печеночные клетки в островках с признаками дистрофии и некроза. Отмечаются нарушения кровоснабжения и микрогемоциркулии в печени. Центральные вены расширены. Площадь сечения их достоверно больше по сравнению с таковыми у незараженных (табл.). Различия в размерах междольковых вен недостоверны. В перивенулярных зонах многих долек синусные капилляры сильно расширены, и их доля у зараженных особей увеличивается в 1,5 раза по сравнению с этим показателем у интактных животных. В некоторых синусоидах наблюдаются застойные явления, в тоже время большинство синусоидов запустевшие.

Сдавливание и нарушение пцтания пече-

Пронина С.В., Мазур О.Е. .Толочко Л.В. ГИСТОПАТОЛОГИЧЕСКИЕ ИЗМЕНЕНИЯ В ПЕЧЕНИ КОТЯТ FELIS CATUS ПРИ ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНОМ ЗАРАЖЕНИИ DIPHYLLOBOTHRIUM DENDRiTiCUM (N1T2SCH. 1824) (PSEUDOPHYLLIDEA: D1PHYLLOBOTHRHDAE)

ночных балок приводят к развитию дистрофических и некротических процессов в печени. Наблюдается декомплексация печеночных балок, а в местах сильного расширения сину-соидов - их истончение и частичная атрофия. Выявляются очаги отека паренхимы с мелкозернистым выпотом плазмы, часто с эритроцитами, У зараженных котят количество гепатоцитов с деструктивными изменениями достоверно выше как по относительным, так и абсолютным показателям. Это характерно для паренхимы перивенулярной и перипорталь-ной зон долек (табл,). Доля деструктивных ядер несколько выше на периферии дольки по сравнению с центральной зоной, однако статистически эти различия не достоверны. По всему органу выявляются микроочаги зернистой дистрофии, некробиоза и некроза гепатоцитов.

Таблица

Соотношение тканевых структур в печени интактных и зараженных D. dendriticum котят

Г истоструктуры печени	Средние величины гистоструктур (М ± т)
	Интактные	Зараженные
Площадь центральной вены, мкм2	741 ±82.22	1490 ±211,80
Площадь портальной вены, мкм2	610,2 ±87,42	760,9 ±109,30
Площадь портальной зоны, мкм2	3682 ±366,30	2442 ±327,8
Диаметр синусных капилляров, мкм	7,2 ±0,37	9,3 ±0,31
Доля синусоидов, %	П,6±1,1,18	I         17,7 ±1,59
Среднее количество в поле зрения двуядерных клеток (периферическая зона)	0,5 ± 0,23	'         0.94 ±0,18
Среднее количество в поле зрения клеток с деструктивными изменениями (периферичесая зона)	5,0 ±0,53	7,5 ± 0,50
Среднее количество в поле зрения клеток с деструктивными изменениями (центральная зона)	6,3 ± 0,48	8,8 ±0,52
Относительная доля клеток с деструктивными изменениями в периферической зоне, %	9,6 ±0,86	13,2 ±0,78
Относительная доля клеток с деструктивными изменениями в центральной зоне, %	8,8*0,80	12,6*0,82
Ядерно-цитоплазматические отношения гепатоцитов (пе-рипортальная зона)	0,236 ±0,001	0,287 ±0,04

Все приведенные в таблице параметры по зараженным животным достоверно отличаются от интактных при Р < 0,05, исключением является площадь портальных вен.

В совокупности имеющиеся морфологические нарушения приводят к функциональным изменениям в органе. В печени зараженных животных значительно снижается содержание гликогена. У интактных животных при постановке РАС-реакции наиболее интенсивно окрашиваются гепатоциты перипортальной зоны, а наименее интенсивно - паренхима срединной (интермедиальной) зоны. У зараженных животных гепатоциты во всех зонах окрашиваются значительно слабее. При этом в перипортальной зоне обеднение гликогеном гепатоцитов более выражено по сравнению с другими зонами.

Гепатоциты интактных животных богаты мелкими, средними, а в интермедиальной зоне и крупными, не окрашивающимися вакуо лями. Вероятно, они содержат жир, который растворяется в спиртах при подготовке кусочков органа для заключения в парафин. Основываясь на этом, предполагаем, что при жизни в клетках печени котят в ранний постнатальный период идет активное накопление жира. При окраске гематоксилин-эозином, галлоционин-хромовыми квасцами и бромфеноловым синим цитоплазма гепатоцитов у этих животных окрашивается слабо, особенно в интермедиальной зоне.

У зараженных животных гепатоциты центральной и перипортальной зон бедны вакуолями. Они более интенсивно окрашиваются галлоционин-хромовыми квасцами и бромфеноловым синим по сравнению с этими зонами у интактных животных. Это свидетельствует о большем содержании у зараженных котят в гепатоцитах центральной и перипорталыюй зон РНК и суммарного белка,

Величина ядерно-цитоплазматических отношений гепатоцитов и доля двуядерных клеток в перипортальной зоне у зараженных котят выше по сравнению с интактными животными. В центральной зоне эти показатели у инвазированных и здоровых особей почти не отличаются (табл.).

Следовательно, одновременно с деструктивными изменениями в печени зараженных животных происходят компенсаторновосстановительные процессы. Повышение ядерно-цитоплазмотических отношений в гепатоцитах и увеличение доли двуядерных клеток в периферической зоне долек свидетельствует об активизации репаративной регенерации в печени. Увеличение содержания белка и РНК в печени зараженных особей направлено на компенсаторную адаптацию органа к новым физиологическим условиям, вызванным гельминтозной инвазией.

В печени облигатного доминантного хозяина птенцов серебристой чайки нами (Пронина и др., 2006) были выявлены сходные морфофункциональные изменения, но при более высокой интенсивности заражения лен-тецом чаечным.

Полученные результаты подтверждают и дополняют литературные данные, свидетельствующие, что патологические процессы в печени возникают при различных гельминтозах независимо от биологии, миграции и локализации паразита (Чебышев, Гринева, 1976; Рачков-ская, 1981; Чебышев, Богоявленский, Гришина, 1998; Гришина, Гончарова, 2002 и др.).

Заключение

В печени котят, зараженных D dendriticum, структурно-функциональные изменения не являются специфичными для ди-филлоботриоза. Сходные патологические процессы в печени животных возникают и при других кишечных гельминтозах. Сосудистые нарушения, лейкоцитарная инфильтрация и активизация ретикуло-эндотелиальных клеток (макрофагов) в печени зараженных особей свидетельствуют об иммунном харак тере инвазионного процесса и токсичности продуктов, выделяемых лентецом чаечным, для котят, которые не являются облигатным дефинитивным хозяином паразита.

Липирапура

• 1.    Автандилов Г.Г. Медицинская морфометрия. -М.: Медицина, 1990.-384 с,

• 2.    Лакин Г.Ф, Биометрияю М.: Высш, школа, 1990. - 352 с.

• 3.    Майборода А.А., Тимошенко Т.М., Козакова АА. и др. Структура природного очага дифиллоботрио-за в районе пролива Малое Море оз. Байкал // Гельмин-тозы человека: сб. науч. тр. - Л., 1987. - 56-62.

• 4.    Пронин Н.М. Паразиты рыб и других гидробионтов Байкальского региона опасные для людей // Проблемы общей и региональной паразитологии. - Улан-Удэ: Изд-во Бурят, гос. с.-х. академии, 2000. - С.134140.

• 5.    Пронина С.В., Сверкунова О.П., Толочко Л.В., Мазур О.С. Морфофункциональные изменения в печени птенцов серебристой чайки Lanis argentatus при заражении Diphyllobothrium dendriticum Nitzsch, 1824 И Современные проблемы орнитологии Сибири и Центральной Азии: в 2 ч, / отв. ред. Ц.З. Доржиев. - Улан-Удэ: Изд-во Бурят, госун-та, 2006. Выв. 3. 4.2.-С. 113-115.

• 6.    Прони на С. В., Тимошенко Т. М. Влияние лентеца чаек Diphyllobothrium dendriticum, Nitzsch, 1824) на мик-роморфологическую картину органов пищеварения у золотистых хомячков // Сибирский экологический журнал. 1991.-№2.-С. 47-52. - '

• 7.    Гришина Е.А., Гончарова Г.В. Поражения печени при нематодозах до и после лечения некоторыми антигельминтными препаратами //Теоретические и прикладные проблемы паразитологии / отв. ред. С.А. Беэр]. - М.: Наука, 2002. - С. 91-102. (Тр. Ин-та паразитологии; Т. XLI11).

• 8.    Рачковская И.В. Мнкроморфологические изменения в печени млекопитающих и птиц при кишечных гельминтозах и после воздействия антигельминтных соединений // Тез. докл. IX Всесоюз. съезда анатомов, гистологов и эмбриологов. — Минск, 1981. — С.326.

• 9.    Сыскова Т.Г., Цыбина Т.Н., Сидоренко А.Г., Ясинский А.А. Состояние паразитарной заболеваемости населения Российской Федерации в 1999 году // Медицинская паразитология. -2001. -№ 3. -С. 32-35.

• 10.    Чебышев Н.В., Гринева Г.Г. Гистологическое, гистохимическое и электронно-микроскопическое исследование печени экспериментальных, животных, зараженных личинками аскариды // Актуальные вопросы тропической медицины. - М., 1976. — С.220-222.