Характеристика гуморального иммунного статуса у молодых лиц при тяжелом течении орофациальной герпетической инфекции после проведения комплексной терапии с применением лечебной герпетической культуральной инактивированной сухой вакцины «Герповакс»

Введение. Герпесвирусы широко распространены в человеческой популяции, способны поражать практически все органы и системы хозяина, длительно, пожизненно персистировать в его тканях, вызывая поражения различной степени тяжести [2, 4, 5, 9]. К тяжелым формам герпетической инфекции относятся случаи часто (более 6 раз в году) рецидивирующей инфекции (Н.А. Дидков-ский, И.К. Милашенкова и др.). Важной задачей современной иммунологии является анализ механизмов тяжелого течения вирусного заболевания, способов уклонения патогенов от иммунного контроля [3, 6, 7, 11]. Учитывая важную роль гуморального иммунитета в защите против внутриклеточных патогенов [5, 10], особое значение приобретает при тяжелой орофациальной герпетической инфекции у молодых людей изучение состояния данной ветви иммунитета [1, 8,10,12].

Материалы и методы. Исследование проводили на базе аллергологического отделения городской клинической больницы №2 г. Челябинска и кафедры иммунологии и аллергологии Челябинской государственной медицинской академии.

Все обследуемые пациенты (55 человек) -больные рецидивирующей герпетической инфекцией орофациальной локализации клинических проявлений, подтвержденной с помощью определения специфических противогерпетических антител класса IgG в диагностически значимых титрах у 100 % пациентов и с помощью ПЦР диагностики у 64,8 % из них. Возраст обследуемых молодых людей 18-30 лет, а рецидивы герпетической ин фекции составили не менее 6 эпизодов в год. Методом простой рандомизации (генератор случайных чисел) все пациенты были разделены на 2 подгруппы: А - 23 человека, которым было назначено стандартное противогерпетическое лечение (диета с повышенным содержанием в пищевых продуктах незаменимой аминокислоты - лизина, перорально ацикловир 400 мг 5 раз в сутки в течение 14 дней, амиксин 0,125 г в течение 3 дней, затем через 48 часов в течение 4 недель, начиная с 7-10-го дня рецидива герпетической инфекции, природные антиоксиданты (витамины Е, С) в течение 10-14 дней, местно ацикловир-крем 5 %-ный) [11], и В - 32 человека, которым была рекомендована комплексная терапия с включением лечебной герпетической культуральной инактивированной сухой вакцины «Герповакс». Вакцинация проводилась в стадию ремиссии, не ранее чем через 2 недели после полного исчезновения клинических проявлений орофациальной герпетической инфекции. Препарат вводили внутрикожно в область внутренней поверхности предплечья, в разовой дозе 0,2 мл в течение 5 дней с интервалом 3-4 дня.

При появлении на фоне вакцинации обострения ГИ, вакцинация прекращалась и пациенты исключались из исследования. В ходе лечения из группы В были исключены первоначально 2 человека, т.к. при проведении первого этапа стандартного лечения у них не удалось достигнуть длительности ремиссии более 2 недель, что является необходимым условием для начала вакционотерапии.

Группа В стала составлять 30 человек. В дальнейшем в процессе проведения вакцинального этапа лечения из группы В было исключено еще 3 человека, у которых появились побочные местные и общие реакции на вакцину. Группа В в финале исследования составила 27 человек. Проведена оценка показателей гуморального звена иммунитета.

Количество иммуноглобулинов классов А, М, G в сыворотке крови определяли методом радиальной иммунодиффузии в агаровом геле, предложенным G. Mancini (1965), с использованием мо-носпецифических сывороток и человеческих иммуноглобулинов (НПО «Диагностические системы», Н. Новгород).

Определение количества иммуноглобулинов субклассов G1-G4 проводили в сыворотке крови с помощью иммуноферментного метода с использованием тест-систем производства Вектор-Бест (г. Новосибирск). Учет результата проводился на «Multiscan plus» (Финляндия) при длине волны 450 нм. Результат выражали в мг/мл.

Определение общей гемолитической активности комплемента в сыворотке крови (СН50) по методу Л.С. Резниковой (1967) в модификации Е.Кэбот, М. Мейер (1968) по 50 %-ному гемолизу. Определение индекса авидности иммуноглобулинов класса G к ВПГ 1-го, 2-го типа в сыворотке крови проводилось с помощью тест-системы «ВектоВПГ 1,2 - IgG-авидность» методом иммуноферментного анализа. Статистическая обработка производилась с использованием пакета программ StatSoft STATISTICA 6.0.

Результаты исследований. Результаты оценки гуморального иммунитета у обследуемых лиц до лечения в периоде ремиссии и обострения, а также через 1 месяц после проведенного курса стандартной и комплексной терапии представлены в табл. 1.

Анализ таблицы показывает, что уровень IgA как после стандартного, так и после комплексного лечения существенно не отличался от исходного уровня, характерного для периода ремиссии и обострения. Выявлен достоверно значимый рост иммуноглобулинов первичного иммунного ответа (IgM) в группе пациентов, получавших комплексное лечение с включением вакцинации, по сравнению с периодом ремиссии, с периодом обострения, а также в сопоставлении с группой пациентов, получавших стандартное противовирусное лечение. Возможно, вакцинные штаммы содержат какие-то антигены, отсутствующие у герпетических вирусов, персистирующих в организме обследуемых пациентов, что и приводит к подъему уровня иммуноглобулинов первичного иммунного ответа.

Общий уровень иммуноглобулинов класса G является стабильным и не отличается в сравниваемых между собой группах, что вполне ожидаемо, исходя из рецидивирующего течения вирусной инфекции. Вместе с тем после курса комплексного лечения с включением герпетической вакцины выявлены изменения в содержании в сыворотке крови субклассов иммуноглобулинов Gl, G2 и G4. В этой группе пациентов уровень иммуноглобулинов G1 оказался минимальным среди всех сравниваемых групп и был достоверно ниже, чем в периоде обострения инфекции и в сравнении с группой пациентов, получавших стандартную эрадика-ционную терапию. Достоверно ниже после комплексной терапии стал уровень IgG4 в сравнении с периодом обострения. В обеих группах после стандартного и комплексного лечения выявлен максимальный уровень IgG2, который после комплексной терапии отличался от периода ремиссии достоверно (р = 0,049), а после стандартного лечения был на уровне статистически вероятной тенденции (р = 0,06).

Уровень специфических антигерпетических антител класса G у обследуемых лиц до лечения, а также после проведения лечения во всех группах достигал диагностически значимой величины 1:3200 при отсутствии колебаний показателя авидности.

Существенно растет после проведенного лечения (стандартного и комплексного) уровень общей активности комплемента в сопоставлении с периодом до ремиссии и обострения. Максимум СН50 фиксируется после комплексной терапии. Активация системы комплемента может способствовать усилению опсонизирующих свойств белков комплемента, а также процессов элиминации вне-клеточно расположенных антигенов.

Таким образом, особенностью иммунотроп-ных эффектов комплексного лечения в сопоставлении со стандартным является на уровне гуморального звена иммунной системы достоверное повышение уровня иммуноглобулинов первичного иммунного ответа со снижением количества иммуноглобулинов вторичного иммунного ответа субкласса G2, а также существенный рост общей активности комплемента (р=0,00002). Выявленные особенности гуморального иммунного ответа при включении герпетической вакцины в комплексное лечение молодых пациентов с тяжелым течением орофациальной инфекции свидетельствуют об усилении механизмов (IgM, СН50), участвующих в клиренсе внеклеточно расположенных патогенов и иммунных комплексов.

Характер изменения уровня цитокинов после проведенного лечения представлен в табл. 2.

Из табл. 2 следует, что после проведения противовирусной стандартной терапии (группа А) достоверных изменений уровня IL-4 и INF-a у пациентов в сопоставлении с периодом ремиссии и обострения не установлено, но у них отмечена тенденция роста уровня IL-12, достигающая степени статистической достоверности в сопоставлении только со стадией ремиссии.

В группе, получавшей комплексное лечение,

Вестник ЮУрГУ, № 27, 2009

Таблица 1

Характеристика гуморальных иммунных показателей у обследуемых пациентов до и после лечения

Показатель	Группа 1		Группа 2		Группа В		Группа А		Рьв	Р1-А	Рг-в	Р2-А	Рв-А
	Ремиссия		Обострение		Вакцинированные		Невакцинированные
	Me	Q25-Q75	Me	Q25-Q75	Me	Q25-Q75	Me	Q25-Q75
IgA	1,56	1,25-2,3	1,26	1,70-1,98	1,25	1,1-2,3	1,54	0,98-2,54	0,63	0,63	0,95	0,61	0,89
IgM	1,55	0,96-2,34	1,42	1,16-1,23	2,31	1,0-3,2	1,65	1,16-1,23	0,05	0,40	0,03	0,25	0,02
IgG	12,30	10,5-12,6	12,55	9,20-11,00	11,43	10,9-12,3	12,30	11,23-12,6	0,90	0,90	0,40	0,50	0,6
IgGl	9,09	6,28-10,4	10,60	9,2-11,0	8,87	5,03-10,30	10,20	7,3-10,5	0,90	0,31	0,04	0,41	0,05
IgG2	2,9	5,68-10,2	3,80	2,3-6,01	5,30	2,14-6,47	5,30	3,85-8,14	0,049	0,06	0,50	0,33	0,68
IgG3	1,25	0,75-1,6	1,20	1,2-2,3	1,28	1,2-1,6	1,30	1,0-1,6	0,36	0,48	0,40	0,75	0,7
IgG4	0,12	0,01-0,3	0,25	0,002-0,21	0,01	0,002-0,68	0,05	0,002-0,47	0,48	0,80	0,003	0,11	0,73
Титры специфических IgG антител к ВПП,2	1:3200	1:600-1:3200	1:3200	1:600-1:3200	1:3200	1,600-1,3200	1:3200	1:600-1:3200	0,97	0,88	0,92	0,97	0,97
Авидность IgG антител	95,33	91,45-96,26	93,92	89,73-97,31	97,19	94,37-97,85	94,97	89,53-98,79	0,25	0,55	0,35	0,84	0,06
СН50	60,25	57,3-65,1	60,08	54,14-66,75	101,42	67,41-133,12	88,54	85,80-95,63	0,006	0,04	0,0008	0,01	0,0002

Таблица 2

Уровни IL-4 и IL-12 после стандартной и комплексной противовирусной терапии

Показатель	Группа 1		Группа 2		Группа В		Группа А		Р 1-В	Р 1-А	Р 2-В	Р 2-А	Р В-А
	Ремиссия		Обострение		Комплексное лечение		Стандартное лечение
	Me	Q25-Q75	Me	Q25-Q75	Me	Q25-Q75	Me	Q25-Q75
IL-4	2,85	0-7,89	6,61	3,86-20,45	12,10	5,45-28,3	6,68	3,65-14,60	0,001	0,21	0,003	0,67	0,006
IL-12	56,12	71,79-149,5	79,60	59,8-97,18	71,81	55,15-121,5	105,15	80,39-159,1	0,31	0,03	0,58	0,07	0,02
ат к INF-a	0,001	0,001-0,001	4,56	2,3-12,3	0,001	0,001-0,001	0,001	0,001-0,001	0,86	0,91	0,00	0,01	0,4
INF-a	0,001	0,001-0,001	23,64	4,47-40,99	0,001	0,001-0,001	0,001	0,001-0,001	0,16	0,06	0,003	0,002	0,7

Проблемы здравоохранения

достоверно вырос уровень IL4 в сопоставлении с периодом ремиссии в 5 раз и в сопоставлении со стадией обострения вдвое. Уровень IL-12 достоверно не отличался после комплексного лечения ни с периодом ремиссии, ни с периодом обострения. Уровень интерферона в сравнении с периодом ремиссии существенно не изменился в этой группе, но достоверно снизился в сопоставлении с периодом обострения. И при стандартной терапии, и при комплексном лечении уровень антител к INF-ct достоверно снизился с периодом обострения.

Как видно из табл. 2, достоверные различия в содержании цитокинов между группами пациентов, получавших разное лечение, установлено со стороны IL-4, IL-12. После комплексного лечения в сравнении со стандартной терапией вдвое вырос уровень IL-4 и приблизительно в 1,5 раза снизился в крови уровень IL-12. Известно, что IL-4 продуцируется Тх2, участвующими в формировании и аллергического, антипаразитарного ответа, a EL-12 продуцируется антиген-представляющими клетками и определяет Txl-девиацию иммунного ответа, т.е. способствует формированию клеточного иммунного ответа.

Полученные уровни цитокинов свидетельствуют о повышающей регуляции комплексной терапии в отношении Тх2-зависимого иммунного ответа и понижающей в отношении Тх1-зависимого иммунного ответа. Изучаемые показатели интерферонового статуса у молодых лиц с тяжелой орофациальной герпетической инфекцией в группах, получавших различное лечение, не изменялись.

Таким образом, включение герпетической вакцины в комплексное лечение молодых пациентов с тяжелым рецидивирующим течением орофациальной инфекции в сопоставлении со стандартным лечением оказывает более выраженное воздействие на гуморальное звено иммунной системы через усиление продукции IL-4, рост уровня иммуноглобулинов первичного иммунного ответа со снижением иммуноглобулинов вторичного иммунного ответа субкласса G1 и усиление общей активности комплемента - механизмов, имеющих ключевое значение в элиминации внеклеточно расположенных патогенов, что может способствовать продлению ремиссии в данной группе пациентов.