Иммунобиологические свойства ассоциированной вакцины против инфекционного кератоконъюнктивита крупного рогатого скота на основе антигенов бактерий Moraxella bovis и Moraxella bovoculi

Инфекционный кератоконъюнктивит (ИКК) крупного рогатого скота (КРС) – острое заразное заболевание, проявляющееся серозно-гнойными истечениями из глаз, инъекцией сосудов конъюнктивы, помутнением и изъязвлением роговицы и частичной или полной потерей зрения пораженного глаза. Инфекционный кератоконъюнктивит крупного рогатого скота широко распространен во многих странах мира с развитым животноводством, наносящий большой экономический ущерб [4, 6]. Наиболее подвержены заболеванию молодые животные.

В Российской Федерации это представляет немалую опасность для крупных животноводческих хозяйств, специализирующихся на выращивании скота мясного направления. Как правило, поражения глаз начинают регистрироваться весной, мак- симальная заболеваемость наблюдается в июле-августе, а минимальная – в октябре.

Конъюнктивит регистрируется у всех возрастных групп животных, чаще всего у телок, в возрасте от 0 до 3 месяцев – 31% случаев, от 3 до 6 месяцев – 40 % случаев подвержены заболеваниям глаз. Заболеваемость мало зависит от породы животного; в большинстве случаев подвержены болезням те животные, которые содержатся в неблагоприятных условиях и получают несбалансированный корм в условиях высокой продуктивности [1].

Первостепенная роль в развитии инфекционного кератоконъюнктивита принадлежит вирулентной бактерии Moraxella bovis. Потоки активного солнечного света предрасполагают к воздействию бактерий на глаза крупного рогатого скота. Источником бактерий Moraxella bovis яв- ляются больные животные, клинически здоровые животные могут быть переносчиками возбудителя. Возбудитель инфекционного кератоконъюнктивита был завезен во многие животноводческие хозяйства с импортируемым скотом из других государств. Ведущими диагностическими признаками при подозрении на инфекционный кератоконъюнктивит являются: интенсивное проявление острого конъюнктивита, светобоязнь, выделения из глаз и носа, эрозия роговицы и нарушение зрения [9].

Бактерии сохраняют жизнеспособность в секретах глаз и носа в течение многих месяцев после клинического выздоровления [2, 7].

До недавнего времени наиболее важным представителем этого рода в ветеринарии считалась Moraxella bovis, вызывающая инфекционный кератоконъюнктивит у крупного рогатого скота. В последние годы нами установлено, что инфекционный кератоконъюнктивит крупного рогатого скота может быть вызван другими представителями рода Moraxella, в частности, бактериями Moraxella bovoculi [5]. Проведенные нами исследования подтверждаются данными зарубежных авторов, согласно которым инфекционный кератоконъюнктивит может быть вызван бактериями Moraxella bovoculi [10, 11, 8].

Для специфической профилактики ИКК у крупного рогатого скота используется ряд вакцин, различающихся принципами получения и способом вакцинации [12, 14]. Качество вакцин и их иммуногенная активность во многом определяется интенсивностью реакции организма [3].

При применении биопрепарата важен предварительный подбор используемого штамма бактерий. Иммунизация очень эффективна на ранней стадии вспышки инфекционного кератоконъюнктивита [13]. Рекомендуется вакцинировать животных за шесть недель до выпаса, а ревакцинацию – через 14 дней. Таким образом, практически возможно добиться искоренения ИКК или понизить заболеваемость животных [15].

Целью данного исследования явилась оценка напряженности иммунитета у вакцинированных животных в течение определенного периода времени, а также изучение иммунобиологических свойств ассоциированной вакцины против ИКК крупного рогатого скота на основе антигенов бактерий Moraxella bovis и Moraxella bovoculi через 12 месяцев хранения при температуре 4-8 0С по следующим показателям: стерильность, безвредность и антигенная активность у лабораторных животных.

Материал и методы исследований. Вакцина против инфекционного кератоконъюнктивита крупного рогатого скота на основе бактерий Moraxella bovis и Moraxella bovoculi в качестве антигенов содержит инактивированные формалином клеточные суспензии штаммов бактерий Moraxella bovis «Г97-ВНИВИ» и Moraxella bovoculi «СХ-Ч6-ДЕП» в одинаковых соотношениях и адсорбент – 6 % гель гидроксида алюминия.

Разработанная вакцина была проис-следована на стерильность, безвредность, ареактогенность и антигенную активность на лабораторных животных. Для этого из разных мест каждой партии вакцины отбирали пробу в количестве, определенном ГОСТ 31929-2013. Контроль вакцины на стерильность проводили путем высева препарата на питательные среды по общепринятой методике (ГОСТ 28085-2013).

Для проверки безвредности использовали смесь вакцины из трех флаконов по 15 см3 каждый, объединенных в стерильных условиях в отдельной емкости. Вакцинную смесь перемешивали и вводили подкожно 10 белым мышам в дозе 0,5 см3 в область лопаток. Наблюдение продолжалось 10 дней.

Антигенную активность изготовленной вакцины контролировали на 3 кроликах массой 2,5-3,0 кг, которым биопрепарат вводили подкожно в дозе 2 см3 дважды с интервалом 14 дней. Крупный рогатый скот вакцинировали следующими дозами: от 2 до 6 месяцев – 2,5 см3, молодняк от 6 до 9 месяцев - 4 см3, молодняк старше года и взрослых особей – 5 см3.

Через регулярные промежутки времени у животных брали кровь и сыворотку исследовали на наличие специфических антител к антигенам бактерий Moraxella bovis и Moraxella bovoculi в иммунофер-ментном анализе (ИФА). Оценка иммунобиологических свойств ассоциированной вакцины после изготовления и через 1 год хранения при температуре 4-8 0C проводилась по показателям стерильности, без- вредности и антигенной активности.

Результат исследований. Результаты изучения антигенной активности биопрепарата на животных представлены в таблицах 1-3.

Таблица 1 – Уровень специфических антител в сыворотке крови вакцинированных кроликов

(p<0,05)
Срок исследований после второй иммунизации	Уровень антител в ИФА сыворотке крови кроликов (М±m, n=3)
	Moraxella bovoculi	Moraxella bovis
14 день	7466,67±3456,40	3733,33±1728,20
90 день	5333,33±1306,39	2133,33±653,20
180 день	4266,67±1306,39	2133,33±653,20
270 день	3200,00±0,00	1600±0,00
360 день	3200,00±0,00	1600±0,00

Таблица 2 – Уровень антител в сыворотке крови кроликов, иммунизированных ассоциированной вакциной, хранившейся в течение 12 месяцев при 4-8 0С (p<0,05)

Срок исследования после второй иммунизации	Уровень антител в ИФА сыворотке крови кроликов (М±m, n=3)
	Moraxella bovoculi	Moraxella bovis
14 день	6400,0±0,0	3200,0±0,0
180 день	5333,33±1306,39	2666,67±653,20
360 день	2666,67±653,20	1600,0±0,0

Таблица 3 – Уровень специфических антител в сыворотке крови крупного рогатого скота, иммунизированного против ИКК (p<0,05)

Группа животных Доза, см3 Уровень антител в ИФА (М±m, n=5) Moraxella bovoculi Moraxella bovis промежуток времени, дни через 14 через 180 через 360 через 14 через 180 через 360 Молодняк 2-4 месяцев 2,5 5760,0 ±715,54 4800,0 ±1066,67 2560,0 ±438,18 3840,0 ±715,54 3200,0 ±0,0 2240,0 ±438,18 Молодняк 6-9 месяцев 4,0 4480,0 ±876,36 3840,00 ±715,54 2560,0 ±438,18 3840,0 ±715,54 2880,0 ±357,77 2880,0 ±357,77 Молодняк старше 12 месяцев 5,0 5760,0 ±715,54 4480,0 ±876,36 2880,0 ±357,77 4480,0 ±876,36 3520,0 ±876,36 2240,0 ±438,18 Из данных таблицы 1 видно, что первоначальной, существенно не понизи-после иммунизации антигенная активность лась. В течение срока наблюдения вакцина разработанной вакцины сохраняется в те- оставалась стерильной и безвредной. чение 12 месяцев на достаточном уровне. Вследствие этого, срок годности вакцины Результаты проведенных исследо- установлен в течение 12 месяцев. ваний показали, что антигенная активность Результаты таблицы 3 показывают, ассоциированной вакцины против ИКК что ассоциированная вакцина против ин-крупного рогатого скота, хранившейся в фекционного кератоконъюнктивита круп-течение года при 4-8 0С, по сравнению с ного рогатого обладает антигенной актив- ностью и вызывает формирование напряженного иммунного ответа у крупного рогатого скота после двукратной вакцинации. Через 12 месяцев после иммунизации у животных наблюдается незначительное снижение специфических антител в сыворотке крови, что существенно не сказывается на напряженности иммунитета.

Заключение. Предложена ассоциированная вакцина против инфекционного кератоконъюнктивита крупного рогатого скота на основе антигенов бактерий Moraxella bovis и Moraxella bovoculi. Проведено изучение ее безвредности, антигенной и иммуногенной активности на лабораторных животных и крупном рогатом скоте. Установлено, что ассоциированная вакцина безвредна для лабораторных и восприимчивых животных, обладает высокой антигенной и иммуногенной активностью.

Резюме

Представлена ассоциированная вакцина против инфекционного кератоконъюнктивита крупного рогатого скота на основе антигенов бактерий Moraxella bovis и Moraxella bovoculi. В качестве антигенов вакцина содержит инактивированные формалином клеточные суспензии штаммов бактерий Moraxella bovis «Г97-ВНИВИ» и Moraxella bovoculi «СХ-Ч6-ДЕП», взятые в одинаковых соотношениях, и адсорбент – 6 % гель гидроксида алюминия. Представлены результаты изучения иммунобиологических свойств ассоциированной вакцины против ИКК крупного рогатого скота на основе антигенов бактерий Moraxella bovis и Moraxella bovoculi. Полученные данные показывают, что ассоциированная вакцина оставалась стерильной, безвредной и антигенно активной в течение периода наблюдения.