Иммуноферментный анализ галактоманнана с ГКР-детекцией в образцах бронхоальвеолярного лаважа

Обоснование. Инвазивный аспергиллёз является опасной грибковой инфекцией с высокой статистикой смертности. Одним из ключевых факторов своевременной диагностики заболевания является подход, основанный на обнаружении галактоманнана — полисахарида клеточной стенки возбудителя. Существующие иммуноферментные (ИФА) тест-системы для определения галактоманнана используют колориметрический метод регистрации. Появление новых высокочувствительных методик для измерения пероксидазной метки в иммуноферментном анализе, основанных, в частности, на эффекте гигантского комбинационного рассеяния (ГКР), открывает возможности для создания нового поколения тест-систем с улучшенной чувствительностью и потенциально более широким спектром пригодных для анализа биологических жидкостей. Важным этапом разработки новой тест-системы является демонстрация возможности измерений реальных клинических образцов и сравнение полученных результатов с референтным методом. Цель исследования — изучить применимость ранее разработанного высокочувствительного и селективного протокола иммуноферментного анализа, использующего детекцию сигнала методом гигантского комбинационного рассеяния, для определения галактоманнана Aspergillus в смывах с поверхности слизистой оболочки трахеи и бронхов, полученных с помощью процедуры бронхоальвеолярного лаважа. Методы. Десять образцов бронхоальвеолярного лаважа были проанализированы с помощью набора реагентов «GalMAg-ИФА» (ХЕМА, Россия), а также разработанного ранее метода иммуноферментного анализа с ГКР-детекцией, использующего субстрат о-фенилендиамин и золь наночастиц серебра. Результаты. Для калибровочных образцов, содержащих культуральный галактоманнан, предел обнаружения методики иммуноферментного анализа с ГКР-детекцией составил 53 пг/мл с рабочим диапазоном до 10,8 нг/мл и средним коэффициентом вариации в рабочем диапазоне 4%. C помощью набора реагентов «GalMAg-ИФА» 6 из 10 образцов бронхоальвеолярного лаважа были идентифицированы как положительные, 4 — как отрицательные. Сопоставление результатов двух методов демонстрирует нелинейную зависимость с коэффициентом корреляции Спирмена 0,93–0,95 (p=2,3×10-5–1,1×10-4). Заключение. Для образцов бронхоальвеолярного лаважа продемонстрирована сопоставимость результатов при определении галактоманнана с помощью коммерческого набора «GalMAg-ИФА» и разработанного иммуноферментного анализа с ГКР-детекцией. Полученные результаты свидетельствуют, что предложенный протокол иммуноферментного анализа с ГКР-детекцией для определения галактоманнана Aspergillus обладает высокой чувствительностью и является перспективным для применения в лабораторной практике. Преимуществом регистрации методом ГКР по сравнению с хромогенной детекцией являются снижение предела обнаружения галактоманнана и увеличение чувствительности в области низких значений индекса позитивности (<2), что в будущем может позволить более точно определить порог разграничения положительных и отрицательных результатов. Таким образом, исследование предоставляет обоснование для испытаний предлагаемого протокола на большей выборке с целью получения заключения о возможности использования его в клинико-лабораторной диагностике.