Иммуногенетические маркеры болезни Крона у взрослого населения Московского региона

¹Введение. Болезнь Крона (БК) относятся к воспалительным заболеваниям кишечника (ВЗК), при которых наблюдаются комплексные расстройства организма. Заболеваемость БК составляет 3,5–62 случая на 100000 взрослого населения в год [1-4]. Наиболее высокая частота встречаемости БК отмечается в экономически развитых странах, особенно в США, Скандинавских странах, Израиле, Великобритании, Европе, Австралии и России; низкая — в странах Азии, Японии и Южной Америки [3–4]. В России показатели распространенности БК крайне мало изучены и составляют от 5 до 20 на 100 тыс. населения [5–8].

Важная роль в иммунном ответе, а также в возникновении БК принадлежит главному комплексу гистосовместимости MHC, а развитие заболевания связано с изменениями на уровне генов. Проведено значительное количество исследований, связывающих БК с определенными генами HLA-системы. Так, исследователями разных стран: США [9], Канады [10], Испании [11], Финляндии [12] — подтверждена связь аллеля HLA- DRB1*0103 с развитием БК, а также с характером течения заболеваний и их осложнений.

Существуют данные о том, что при возникновении БК в разных странах важную роль играет наличие конкретных групп аллелей. Взаимосвязь развития болезни Крона установлена в Израиле с DR15 [13], в Германии с HLA DRB1*0701 [14], в Китае с HLA Cw*12 [15], в Японии с HLA- DRB1*0405 и 0410 [16]. Развитие БК связали с клинической формой заболевания, в частности в Италии DRB1*0304, DRB1*0305, DRB1*0307, DRB1*0309 с тотальным поражением толстой кишки [17], в Испании HLA-DRB1*07 с терминальным илеитом при БК и HLA-DRB1*0103 — с колитом [18]. Было показано, что определенные HLA-гаплотипы дают более выраженную ассоциацию с БК. Так, в Японии наличие гаплотипа Cw*1202-B*5201-DRB1*1502 снижает риск возникновения БК [16].

В России эти исследования менее освещены и проводились с использованием серологических методов типирования. Так, развитие БК было ассоциировано с B14, DR3 и DR5 [1, 19].

Цель: изучение иммуногенетических маркеров предрасположенности и протекции к развитию БК у взрослого населения Московского региона.

Материал и методы. В исследование включены 53 образца периферической крови больных БК Московского региона в возрасте от 20 до 73 лет и от 19 лет до 70 лет (21 женщина и 32 мужчины, средний возраст составил 38,1±12,9 года) за период с 2010 по 2013 г. Диагноз БК выставлен согласно международным стандартам, разработанным Европейским доказательным консенсусом по диагностике и лечению БК [20–21]. Контрольную группу составили 1700 образцов пуповинной крови новорожденных условно здоровых детей Московского региона, типированных по системе HLA и внесенных в реестр неродственных доноров в г. Москве за период с 2004 по 2009 г. Пациенты БК и доноры контрольных групп являлись этническими славянами.

Пациенты с БК согласно Монреальской классификации [22] были разделены в зависимости от следующих факторов:

• —    локализации поражения кишечника — на 3 группы: с терминальным илеитом 12 пациентов (7 мужчин и 5 женщин), средний возраст 42,4±14,5 года; с колитом 16 пациентов (9 мужчин и 7 женщин), средний возраст 37,8±9,4; с илеоколитом 25 человек (16 мужчин и 9 женщин), средний возраст 36,2±13,5 года;

• —    характера течения заболевания — на 3 группы: с острым течением 2 пациента (мужчины в возрасте 26 и 48 лет), на момент исследования заболевание впервые выявлено и время от дебюта его составляло менее 6 месяцев; с хроническим непрерывным течением 21 пациент (8 женщин и 13 мужчин), средний возраст 35,8±11,7 года, у которых периоды ремиссии отсутствовали более чем 6 месяцев; с хроническим рецидивирующим течением — 30 пациентов (17 мужчин и 13 женщин), средний возраст 39,8±13,5 года, у которых длительность ремиссии была более 6 месяцев;

• —    тяжести течения заболевания — на 3 группы: с легким течением 3 пациента (2 мужчины в возрасте 27 и 62 лет и 1 женщина в возрасте 64 лет); со среднетяжелым течением 28 пациентов (16 мужчин и 12 женщин), средний возраст 39,2±12,2 года; с тяжелым течением 22 пациента (14 мужчины и 8 женщины), средний возраст 34,8±11,7 года;

• —    фенотипического варианта — на 3 группы: с нестриктурирующим, непенетрирующим типом 24 пациента (17 мужчин и 7 женщин), средний возраст 37,8±13,5 года; со стриктурирующим типом 24 пациента (14 мужчин и 10 женщин), средний возраст 39,1±12,1 года; с пенетрирующим типом 5 пациентов (1 мужчина и 4 женщины), средний возраст 34,4±12,8 года;

• —    ответа на терапию глюкокортикоидами — на 2 группы: с гормональной рефрактерностью к терапии 21 больной (14 мужчин и 7 женщин), средний возраст составил 32,6±9,8 года, в которую были объединены 14 пациентов с гормональной зависимостью, 7 пациентов с гормональной резистентностью, у 5 из которых гормональная резистентность развилась на фоне гормональной зависимости; с гормональной восприимчивостью к терапии 32 пациента (18 мужчин и 14 женщин), средний возраст 41,7±12,9 года;

— возраста установления диагноза — на 2 группы: младше 35 лет — 37 пациентов (23 мужчины и 14 женщин) в возрасте от 19 до 60 лет, средний возраст составил 30,7±7,3 года, диагноз БК установлен в возрасте от 9 до 34 лет, средний возраст составил 23,5±4,5 года; старше 35 лет — 16 больных (9 мужчин и 7 женщин) в возрасте от 44 до 70 лет, средний возраст составил 55,1±6,1 года, диагноз БК установлен в возрасте от 37 до 61 года, средний возраст составил 49,8±6,4 года.

Изучение вариантов групп аллелей HLA проводили методом генотипирования с применением полимеразной цепной реакции (ПЦР). Исследование проводилось с использованием коммерческих наборов по методу SSO (Sequence Specific Oligonucleotides) c применением специфических олигонуклеотидных зондов и по методу SSP (Sequence Specific Primer) с применением специфических праймеров.

Статистическая обработка осуществлялась с помощью программного обеспечения Open Source Epidemiologic Statistics for Public Health или «Open Epi», версия 3.01 от 2013/04/06. Рассчитывались показатели: встречаемость в долях f; уровень достоверности (р); отношение шансов (ОШ).

Результаты. У больных БК и в контрольной группе выявлены группы аллелей HLA I класса (А*, В*, C*) и II класса (DRB1* и DQB1*): А*01, А*02, А*03, А*11, А*23, А*24, А*25, А*26, А*29, А*30, А*31, А*32, А*33, А*66, А*68, В*07, В*08, В*13, В*14, В*15, В*18, В*27, В*35, В*37, В*38, В*39, В*40, В*41, В*44, В*46, В*47, В*48, В*49, В*50, В*51, В*52, В*53, В*54, В*55, В*56, В*57, В*58, В*73, В*78, C*01, C*02, C*03, C*04, C*05, C*06, C*07, C*08, C*12, C*14, C*15, C*16, C*17, C*18, DRB1*01, DRB1*03, DRB1*04, DRB1*07, DRB1*08, DRB1*09, DRB1*10, DRB1*11, DRB1*12, DRB1*13, DRB1*14, DRB1*15, DRB1*16, DQB1*02, DQB1*03, DQB1*04, DQB1*05, DQB1*06.

Группа аллелей С*12 встречалась достоверно чаще у пациентов с БК, чем в контрольной группе, увеличивая вероятность развития заболевания в 2,2 раза (ДИ 1,301–3,946) (рис. 1) .

Рис. 1. Частота групп аллелей HLA в группе пациентов с БК в зависимости от течения заболевания и в контрольной группе

При сравнении встречаемости групп аллелей HLA у пациентов с илеоколитом при БК и в контрольной группе статистически значимых отличий выявлено не было. Группы пациентов с колитом (n=16) и терминальным илеитом (n=12) не оценивались по причине их малочисленности.

Достоверных отличий от контрольной группы в подгруппе больных с хроническим непрерывным течением БК не обнаружено. Группу пациентов с острым течением БК не оценивали в связи с ее малочисленностью (n=2). У пациентов с хроническим рецидивирующим течением заболевания значимо чаще, чем в контроле, встречается группа С*12, в то время как DQB1*02 — достоверно реже (см. рис. 1).

Подгруппа пациентов с легким течением БК не оценивалась из-за малочисленности. Для тяжелого течения БК характерна достоверно более низкая частота DQB1*03 (ОШ=0,35 ДИ 0,14–0,86), отмечалась низкая встречаемость А*03, однако доверительный интервал (ДИ 0,019–1,06) отношения шансов (ОШ=0,15) проходит через 1, что не позволяет использовать данный показатель (см. рис. 1).

Подгруппа пациентов с пенетрирующим типом БК не оценивалась ввиду ее малочисленности (n=5). Выявлено, что у пациентов со стриктурирующим типом БК достоверно чаще встречались группы аллелей А*11, В*38 и С*12, увеличивая шансы возникно- вения данного типа БК в 2,5 (при С*12), 3,0 и 3,5 (при А*11 и В*38 соответственно) раза (рис. 2 и табл. 1).

При сравнении показателей в группе пациентов с гормональной рефрактерностью к терапии при БК и контрольной группе статистически значимых отличий не выявлено. В группе пациентов с гормональной восприимчивостью достоверно чаще встречался С*12 (ОШ=0,96 ДИ 1,464–5,963), который, соответственно, ассоциирован с предрасположенностью к данной форме заболевания (см. рис. 2).

При сравнении показателей встречаемости групп аллелей HLA у больных БК мужчин и женщин с контрольной группой обнаружено, что С*14 встречался достоверно чаще у больных мужчин (см. рис. 2).

При изучении характера распределения групп аллелей HLA в подгруппе пациентов с возрастом установления диагноза БК младше 35 лет статистически значимых отличий от контроля обнаружено не было. Группа пациентов с возрастом установления диагноза БК старше 35 лет не изучалась по причине ее малочисленности. Обобщенные данные по HLA-маркерам предрасположенности и протекции к БК в исследованных группах приведены в табл. 2.

Обсуждение. Обобщая полученные данные, можно говорить о существовании групп аллелей HLA, ассоциированных с БК, с определенными формами и тяжестью течения заболевания, ответом на гормональную терапию, полом и возрастом пациентов.

Таблица 1

HLA-маркеры предрасположенности к стриктурирующему (n=24), нестриктурирующему, непенетрирующему типам БК (n=24)

Группа аллелей HLA	p	ОШ	ДИ
Группа пациентов со стриктурирующим типом БК (n=24)
А*11	0,04	3,05	1,25–7,459
В*38	0,03	3,52	1,38–9,01
С*12	0,04	2,5	1,11–5,63

Группа пациентов с нестриктурирующим, непенетрирующим типом БК (n=24)

В*56	0,04	5,99	1,712–20,92
С*12	0,012	2,96	1,317–6,63
С*14	0,017	5,85	1,93–17,74

П р и м еч а н и е : ОШ — отношение шансов, ДИ — доверительный интервал.

Таблица 2

HLA-маркеры предрасположенности и протекции к БК в исследованных группах

ОШ

Группа аллелей HLA	Общая группа с БК, n= 53	Рецидивирующее течение БК, n= 30	Тяжелое течение БК, n= 22	Среднетяжелое течение БК, n= 28	Стрикту-рирующий тип БК, n= 24	Нестрик-туриру-ющий, непене-трирую-щий тип БК, n= 24	Восприимчивые к гормональной терапии при БК, n= 32	Мужчины, n= 32	Женщины, n= 21
А*11	-	-	-	-	-	-	-	-	-
В*38	-	-	-	-	-	-	-	-	-
В*56	-	-	-	-	-	5,985	-	-	-
С*12	2,265	2,955	-	-	2,5	2,955	2,955	-	2,686
С*14	-	-	-	-	-	5,854	-	-	-
DQB1*02	-	-	-	-	-	-	-	-	-
DQB1*03	-	-	0,3474	-	-	-	-	-	-

П р и м еч а н и е : ОШ — отношение шансов.

Контрольная группа

Рис. 2. Частота групп аллелей HLA в группе пациентов с БК в зависимости от типа заболевания, восприимчивости к гормональной терапии, пола и в контрольной группе

С предрасположенностью к заболеванию БК ассоциирована группа аллелей С*12. С*12 (ОШ=2,96 ДИ 1,43–6,098) можно также рассматривать в качестве маркера предрасположенности к хроническому рецидивирующему течению БК, а DQB1*02 (ОШ=0,38 ДИ 0,16–0,94) — маркер протекции к данной форме заболевания.

У пациентов со среднетяжелым течением БК значимо чаще встречалась группа аллелей С*12 (ОШ=2,56 ДИ 1,21–5,43), а следовательно, наличие в генотипе указанной группы аллелей может служить маркером предрасположенности к соответствующей форме течения заболевания.

При нестриктурирующем, непенетрирующем типе БК частота групп аллелей В*56, С*12 и С*14 статистически значимо выше, в частности при наличии в генотипе В*56 и С*14 риск возникновения именно данного фенотипического варианта заболевания составляет 5,9 и 5,8 раза соответственно.

При этом шанс заболеть БК для мужчин при наличии С*14 (ОШ=4,18 ДИ 1,42–12,35) составляет 4,1 раза. При изучении характера распределения групп аллелей HLA у женщин с БК выявлена значимо более высокая частота С*12 (ОШ=2,69 ДИ 1,42–12,35). Следовательно, группа аллелей С*12 является маркером предрасположенности к БК у женщин.

Относительно ассоциации групп аллелей HLA с тяжестью и характером течения заболеваний выявлены следующие закономерности. Группа аллелей DQB1*03 при БК достоверно реже выявляется у пациентов с тяжелым течением заболевания и является характерным маркером протекции к данной форме БК.

Как видно из представленных данных, иммуно-генетическим маркером предрасположенности к развитию БК является С*12, и в том числе к среднетяжелому течению, стриктурирующему, нестриктури-рующему, непенетрирующему типам заболевания, восприимчивости к гормональной терапии. Данная группа аллелей также увеличивает риск развития БК у женщин Московского региона. Иммуногенетиче-скими маркерами предрасположенности к развитию БК стриктурирующего типа являются В*38 и А*11, которые характерны как маркеры данной формы заболевания нестриктурирующего, непенетрирующего типа — В*56 и С*14. С*14 выступает маркером предрасположенности к БК у мужчин Московского региона. Маркером протекции к развитию хронического рецидивирующего течения БК является DQB1*02, характерным маркером протекции к тяжелому течению заболевания является DQB1*02, характерным маркером протекции к тяжелому течению заболевания является группа аллелей DQB1*03.

Несмотря на многочисленные исследования, механизм участия HLA-системы в возникновении БК окончательно не выяснен. Наиболее распространена теория о нарушении иммунологической толерантности к собственным антигенам через аберрантную презентацию Т-лимфоцитам в составе молекул HLA собственных пептидов или чужеродных пептидов, на которые не должен развиваться иммунный ответ [23, 24, 25]. От уникального набора HLA-антигенов может зависеть характер иммунного ответа, а также вероятность развития аутоиммунной агрессии [24, 25].

Как известно, частотное распределение аллельных вариантов HLA генов неоднородно в разных по- пуляциях мира [26, 27, 28]. Среди населения России также имеются свои особенности, причем у представителей разных этнических групп, проживающих в разных регионах России, имеются различия в частотах аллелей HLA [29,30]. Вероятно, именно данный факт обусловливает ассоциацию БК с разными группами и аллелями HLA, обнаруженную исследователями из различных стран.

Так, в исследованиях, проведенных в Европе и Северной Америке, с развитием БК установлены положительные ассоциации с наличием в генотипе определенных HLA-генов II класса. В частности, в различных странах указанных регионов наиболее часто ассоциируются с наличием HLA-DRB1*0103, что воспроизводится в многочисленных исследованиях [9–12], а также ассоциирована у европейцев с DRB1*07 [14, 18].

В России работ, посвященных изучению распределения HLA-генов у больных БК, крайне мало, и, как отмечалось ранее, большинство из них выполнено с применением серологических методов типирования. БК в Московском регионе, по данным одного из исследований, положительно ассоциирована с В14 и А3, отрицательно — с А19 [19]. По данным другого исследования, положительная ассоциация найдена для А3, отрицательная — для DR1 [1]. В18 и DRB1*01 также представлены как маркеры БК авторами [31].

Как видно, данные по Московскому региону значительно отличаются и противоречивы, а учитывая различную номенклатуру HLA-системы при серологическом и генетическом типировании, обобщение результатов нашего исследования и литературных данных затруднительно.

Заключение. Таким образом, в проведенном исследовании выявлено, что определенные группы аллелей HLA тесно ассоциированы с патогенезом БК у взрослого славянского населения Московского региона. Выявлены иммуногенетические факторы предрасположенности и протекции к возникновению заболевания в целом, а также в зависимости от пола и возраста. Обнаружена положительная и отрицательная ассоциации групп аллелей HLA с клинической формой, течением заболевания БК и ответом на терапию глюкокортикоидами. В частности, выявлено, что с развитием БК у женщин и с восприимчивостью к гормональной терапии при данном заболевании ассоциирована группа аллелей С*12; к характерным маркерам стриктурирующего типа БК относятся В*38 и А*11; маркерами нестриктурирующего, непенетри-рующего типа являются группы аллелей В*56 и С*14, причем С*14 также ассоциирована с риском развития БК у мужчин; характерными маркерами протекции к развитию БК с хроническим рецидивирующим течением и тяжелым течением являются DQB1*02 и DQB1*03 соответственно. Полученные результаты указывают на необходимость проведения исследований полиморфизма генов HLA-системы не только в отношении заболевания в целом, но и в отдельных клинических группах больных.