Генетика. Рубрика в журнале - Саратовский научно-медицинский журнал
Анализ получения децеллюляризированных матриксов и их применения в сердечно-сосудистой хирургии
Статья научная
Проанализированы литературные данные по применению децеллюляризированных матриксов в сердечнососудистой хирургии, а также оценен ряд методических подходов, используемых для их получения. Использовались ресурсы научно-исследовательских данных систем Pubmed, Science Direct. Предпочтение отдавалось наиболее информативным работам за последние десять лет.
Бесплатно
Статья научная
Цель: изучить влияние инкубации в гипертонических растворах NaCI на относительный количественный выход однонитевых разрывов (ОР) и щелочно-лабильных сайтов (ЩС) ДНК, индуцированных у-излучением и перекисью водорода в лимфоцитах периферической крови человека in vitro. Материал и методы. Для исследований использовали лимфоциты, выделенные из периферической крови физически здоровых женщин-доноров в возрасте 21-26 лет. Облучение клеток в дозах 1, 2, 3 и 5 Гр проводили на установке «АГАТ-Р1» (Россия, источник у-излучения 60Со, мощность дозы 1 Гр/мин) при 4°С. С перекисью водорода (25, 50 и 100 мкмоль/л) клетки инкубировали 15 мин при 4°С. Анализ ОР и ЩС ДНК проводили с помощью метода ДНК-комет в щелочных условиях. Результаты. Инкубация клеток в 0,35 моль/л растворе NaCI (диссоциация негистоновых белков) приводит к увеличению выхода ОР и ЩС ДНК, индуцируемых у-излучением и перекисью водорода, приблизительно в 1,3 раза. Увеличение концентрации NaCI до 0,6 моль/л (диссоциация линкерного гистона Н1) приводит почти к двойному увеличению выхода повреждений ДНК (~ в 1,7-1,8 раза). Дальнейшее повышение концентрации NaCI, ведущее к нарушению структуры нуклеосом (1,2 моль/л) и почти полной депротеинизации хроматина (2 моль/л), увеличивает выход повреждений ДНК не столь выраженно, как предполагалось (~ в 2,2 раза при концентрации 2 моль/л). Заключение. Результаты исследований показали, что инкубация в гипертонических растворах NaCI значительно увеличивает чувствительность ДНК лимфоцитов к повреждающему действию свободных радикалов.
Бесплатно
Иммуногенетические маркеры болезни Крона у взрослого населения Московского региона
Статья научная
Цель: изучить иммуногенетические маркеры предрасположенности и протекции к развитию болезни Крона (БК) у взрослого населения Московского региона. Материал и методы. В исследование включены 53 образца периферической крови больных БК Московского региона. Контрольную группу составили 1700 образцов пупо-винной крови новорожденных условно здоровых детей. Изучение вариантов групп аллелей HLA проводили методом генотипирования с применением полимеразной цепной реакции (ПЦР). Использовались коммерческие наборы по методу SSO (Sequence Specific Oligonucleotides) с применением специфических олигонуклеотидных зондов и по методу SSP (Sequence Specific Primer) с применением специфических праймеров (Ivitrogen). Ре- зультаты. Обнаружены положительная и отрицательная ассоциации групп аллелей HLA с клинической формой, течением заболевания БК и ответом на терапию глюкокортикоидами, в частности выявлено, что с развитием БК у женщин и с восприимчивостью к гормональной терапии при данном заболевании ассоциирована группа аллелей С*12. К характерным маркерам стриктурирующего типа БК относятся В*38 и А*11. Маркерами нестриктурирующего, непенетрирующего типа являются группы аллелей В*56 и С*14, причем С*14 также ассоциирована с риском развития БК у мужчин. Характерными маркерами протекции к развитию БК с хроническим рецидивирующим течением и тяжелым течением являются DQB1*02 и DQB1*03 соответственно. Заключение. Полученные результаты указывают на необходимость проведения исследований полиморфизма генов HLA-системы не только в отношении заболевания в целом, но и в отдельных клинических группах больных.
Бесплатно
Статья научная
Цель: изучить закономерности изменений количества двунитевых разрывов (ДР) ДНК в клетках млекопитающих при длительном воздействии низкоинтенсивного у-излучения. Материал и методы. В работе использовали культуру фибробластов легкого китайского хомячка (линия V79). Облучение клеток у-лучами при мощности дозы 0,1 мГр/мин проводили на установке «Гамма-Панорама» (Cs-137). Для оценки изменений количества ДР ДНК использовали иммунофлуоресцентный анализ фокусов фосфорилированного гистона Н2АХ (у-Н2АХ). Частоту апоптотических клеток определяли методом «ДНК-гало». Для анализа продукции активных форм кислорода (АФК) использовали 5 (6) — хлорметил-2,7-дихлордигидрофлуоресцеиндиацетат. Результаты. Продемонстрировано, что при длительном низкоинтенсивном облучении клеток линии V79 в ранние сроки облучения (6-24 ч, дозы 3,6-14,4 сГр) наблюдается увеличение количества фокусов у-Н2АХ и продукции АФК, а в более поздние сроки (48-72 ч, дозы 28,8-43,2 сГр) снижение этих показателей практически до контрольного уровня. Статистически достоверных изменений доли апоптотических клеток при этом обнаружено не было. Заключение. Процессы, обусловливающие изменения количества ДР ДНК в клетках млекопитающих при длительном воздействии низкоинтенсивного у-излучения, по всей видимости, сопряжены с развитием оксидативного стресса и последующей активизацией антиоксидантных защитных систем клеток.
Бесплатно
Статья научная
Хотя основные участники множества митогенетических, про- и антиапоптотических и др. сигнальных путей в клетке подробно исследовались в последние десятилетия, конкретные патологические изменения в этих сигнальных путях у индивидуальных раковых больных до настоящего времени исследованы не были. В данной статье мы предлагаем новый метод исследования влияния онкологического заболевания на интенсивность про- и антимитотических сигналов. В рамках этого подхода биоптат злокачественной опухоли индивидуального больного сначала исследуют с помощью микрочипового анализа мРНК, определяя относительные (по сравнению с нормой для аналогичной ткани / органа в аналогичной популяции) уровни экспрессии нескольких тысяч генов. Затем вычисляют и анализируют уровни патологических изменений в десятках митогенетических сигнальных путей.
Бесплатно
Статья научная
В обзорно-аналитическом исследовании рассмотрены эпидемиологические данные о частоте генных перестроек RET/PTC в спорадических и радиогенных (пациенты после радиотерапии, резиденты загрязненных после аварии на Чернобыльской АЭС территорий, пострадавшие от атомных бомбардировок и др.) карциномах щитовидной железы (ЩЖ). В целом обнаруженные эпидемиологические закономерности подтверждались в радиобиологических экспериментах при облучении различных культур клеток ЩЖ и воздействия ex vivo, за исключением чернобыльских когорт. Индукция генных перестроек RET/РТС предполагаемой экспозицией 1311 в детских карциномах резидентов Чернобыля в опытах на мышах также не воспроизводилась. Сделан вывод, что ситуация с частотой перестроек RET/РТС в карциномах ЩЖ в чернобыльских когортах еще раз подтверждает мультифакторный характер индукции и развития этих опухолей, со вкладом как облучения, так и нерадиационных воздействий (йоддефицит и стрессы различной природы).
Бесплатно
Статья научная
Цель: оценить новые способы криоконсервации, размораживания и стерилизации сосудистых аллотрансплантатов человека маргинального происхождения для тканевой инженерии с помощью перспективного хла-доносителя— полидиметилсилоксана и без использования криопротекторных и витрифицирующих растворов, что позволит использовать эти аллотрансплантаты после размораживания и децеллюляризации, а также разработать протокол безопасной криоконсервации сложных тканеинженерных сосудистых конструкций. Материал и методы. После математического моделирования процесса охлаждения и его тестирования проведен опыт по изолированному замораживанию в условиях низких температур с помощью хладоносителя— полидиметилсилоксана 30 участков бедренных артерий длиной не менее 10 см от 15 маргинальных доноров в возрасте 65-85 лет с одинаковым распределением по полу. После процедуры размораживания в этом же хладоносителе аллотрансплантаты были подвергнуты проверке их физико-механических свойств на аппарате Instron. По итогам проведено моделирование режима их стерилизации в замороженном виде. Результаты. Оценка физико-механических свойств и ограниченное гистологическое исследование показали соответствие параметров размороженных аллотрансплантатов из одной из шести групп с нативными сосудами. Остальные данные требуют дополнительной проверки. Заключение. Опробованный метод криоконсервации и размораживания аллотрансплантатов показал эффективность и возможность использования в дальнейшей работе.
Бесплатно
Статья научная
Цель: провести сравнительные исследования особенностей репарации двунитевых разрывов ДНК в клетках млекопитающих, подвергающихся острому и пролонгированному воздействию рентгеновского излучения с различной мощностью дозы. Материал и методы. Исследования выполнены на первичных культурах фи-бробластов, выделенных из биоптатов кожи здоровых добровольцев (женщины 29 и 30 лет). Облучение клеток проводили на рентгеновской биологической установке РУБ РУСТ-М1 (Россия) при температуре 37°С с мощностью дозы 400 мГр/мин (200 кВ, 2*2,4 мА, фильтр 1,5 мм AI) и 4 мГр/мин (50 кВ, 2*0,4 мА, фильтр 1,5 мм AI). Для анализа фокусов уН2АХ и Rad51 использовали иммуноцитохимическое окрашивание белков. Результаты. Проведено одновременное исследование кинетики формирования и деградации фокусов фосфорилированно-го гистона Н2АХ (уН2АХ) и ключевого белка гомологической рекомбинации Rad51 в клетках первичных фибро-бластов кожи человека, подвергавшихся острому и пролонгированному воздействию рентгеновского излучения с одинаковой накопленной дозой. Показано, что относительное число фокусов уН2АХ в пересчете на дозу облучения убывает с уменьшением мощности дозы, в то время как относительное число фокусов Rad51, наоборот, возрастает. Заключение. Полученные данные свидетельствуют о принципиальных различиях в соотношении вкладов негомологичного соединения концов и гомологической рекомбинации в репарацию ДНК в клетках, подвергавшихся острому или пролонгированному облучению.
Бесплатно
Статья научная
Цель; сравнить количественный выход однонитевых разрывов (ОР) и щелочнолабильных сайтов (ЩС) ДНК, индуцированных 365 нм ультрафиолетовым (УФ) и рентгеновским излучениями в лимфоцитах периферической крови человека in vitro. Материал и методы. Выделение лимфоцитов крови человека проводили путем центрифугирования в градиенте плотности фикол-верографин. Облучение клеток проводили на УФ-установке BLX-365 (длина волны 365±10 нм) и рентгеновской биологической установке РУБ РУСТ-М1. Анализ ОР и ЩС ДНК проводили с использованием метода ДНК-комет в щелочных условиях. Результаты. Впервые показано, что выход ОР и ЩС ДНК в лимфоцитах крови человека при воздействии 365 нм УФ излучения в дозе 10 кДж/м2 соответствует эффекту рентгеновского излучения ~ в дозе 1 Гр. Заключение. Воздействие 365 нм УФ излучения в дозе 1 кДж/м2 на лимфоциты периферической крови человека индуцирует -100 ОР ДНК на клетку.
Бесплатно
Статья научная
Цель: ретроспективная цитогенетическая индикация доз, возможно полученных отдельными индивидуумами при проживании в регионе Семипалатинского атомного полигона, при работе или прохождении службы в рядах Вооруженных сил на нем. Материал и методы. Выполнялся анализ аберраций хромосом в культурах лимфоцитов периферической крови 16 человек с помощью FISH-метода. Результаты. В 7 случаях из 16 частоты FISH-регистрируемых транслокаций статистически значимо не отличались от контрольных значений; у остальных 9 обследованных лиц оценки полученных доз облучения варьировали от 0,20 до 0,75 Зв. Заключение. FISH-методика анализа аберраций хромосом позволяет производить ретроспективную оценку дозы, однако для более правильной трактовки получаемых результатов желательно одновременно производить и классический анализ. Для лиц, находившихся в зонах загрязнения альфа-излучающими радионуклидами, характерно обнаружение в культурах лимфоцитов периферической крови единичных сильноаберрантных клеток, дающих возможность говорить о радиационном поражении, но не позволяющих производить дозовые оценки.
Бесплатно
Частота аберраций хромосом в лимфоцитах и риск развития заболеваний
Статья научная
Представлен анализ опубликованных данных по проблеме прогноза риска развития заболеваний по частотам аберраций хромосом в культурах лимфоцитов периферической крови человека. В последнее двадцатилетие появились данные, свидетельствующие о возможности такого прогноза в отношении злокачественных болезней, когда в целом цитогенетические показатели не превышают контрольные значения. Однако имеются существенные неопределенности и сложности, обусловленные межиндивидуальной и внутрииндивидуальной вариабельностью и различением аберраций хромосом, индуцированных внешне средовыми воздействиями и обусловленных внутренними процессами, происходящими в организме.
Бесплатно
Экспрессия генов семейства ММР и RhoA у лиц, подвергавшихся ионизирующему излучению
Статья научная
Цель: изучение механизмов пострадиационного изменения экспрессии генов семейства ММР, а также RhoA. Материал и методы. Исследовали кровь 27 здоровых доноров, 32 больных раком предстательной железы до и после лучевой терапии, а также 32 пациентов, кровь которых была взята в отдаленный период после воздействия клинически значимых доз радиации. Методом ПЦР в реальном времени определяли уровни экспрессии генов ММР-7, -13, TIMP-2, RhoA. Результаты.Установлено, что наиболее выраженные изменения экспрессии изученных генов наблюдаются у больных раком предстательной железы в стадии 2 (T2N0M0). По-видимому, изменения обусловлены развитием опухолевого процесса и не связаны с лучевой терапией. У пациентов, перенесших лучевую болезнь, в отдаленный период экспрессия RhoA достоверно снижалась.
Бесплатно
Статья научная
Цель: исследовать содержание зрелых микроРНК, участвующих в функционировании р53-зависимой системы сохранения стабильности генома, в крови пациентов в отдаленные сроки после облучения в клинически значимых дозах и сопоставить эти показатели с развитием злокачественных опухолей в период отдаленных последствий лучевого поражения. Материал и методы. Объектом исследования явилась кровь пациентов с диагнозом: острая лучевая болезнь (ОПБ), острая лучевая болезнь с развитием местных лучевых поражений (ОЛБ+МЛП) и местные лучевые поражения (МЛП), полученная через 1-51 год после лучевого поражения. Зрелые mir34a, mir21, mir145, mir16, mir125b, Iet7a, содержащиеся в общей фракции РНК, были обратно транскрибированы с использованием специфических "stem-loop" — праймеров. Методом ПЦР в реальном времени определялось относительное количество микроРНК в крови пациентов. Статистическая обработка результатов проводилась с использованием непараметрического критерия Манна — Уитни. Данные приведены как медиана и квартили, нормированные к медиане группы «контроль», принятой за 1. Результаты. Обнаружено достоверное снижение mir34a, mir21 в крови пациентов с диагнозом ОЛБ и увеличение содержания mir145 у больных МЛП. Анализ индивидуальных значений микроРНК в крови больных, у которых был выявлен рак, за исключением больных с базалиомами, показал соответствия изменений с риском развития канцерогенеза. Заключение. Впервые исследована функциональная активность р53-зависимой системы сохранения стабильности генома по содержанию микроРНК в крови пациентов, облученных в клинически значимых дозах, спустя годы после лучевого поражения. Обнаружено достоверное снижение mir34a, mir21 в группе больных ОЛБ и увеличение mir145 у больных МЛП. Полученные результаты позволяют надеяться, что дальнейшие исследования, с расширением групп обследуемых пациентов и анализом динамики изменения показателей, позволят использовать микроРНК в качестве показателей риска формирования отдаленных последствий после ОЛБ и МЛП.
Бесплатно