Иммуногенные и агглютиногенные свойства культуры бруцелл штамма 82, выращенные в глубинно-суспензионных условиях и на плотных питательных средах

Для изучения приживаемости агглютиногенных и иммуногенных свойств в организме животных использовали 24-х и 48 часовые культуры бруцелл штамма 82,полученные путем выращивания на лабораторном ферментационном    стенде    (СФЛ-И)    в    полусинтетической гидролизатлактальбуминовой среде (ГЛА) и печеночно-пептонном бульоне (ППБ), а также на печеночно-мартеновском агаре Хоттингера (МПХ) – контрольная культура.

Культуру суспензировали в физиологическом растворе и вводили морским свинкам весом 350-400 г подкожно в область правого паха в дозах 100 тыс., 1 млн. и 1 млрд. микробных клеток. Для определения приживаемости в организме и агглютиногенных свойств из каждой группы животных, иммунизированных данной культурой, через 25 дней убивали по 3 головы и проводили баквысев из 10 органов и лимфатических узлов: паховые, заглоточные, подчелюстные, парааортальные, печень, селезенка, костный мозг. Высев производили на ППБ,ППА и МПХ. Читку баквысева осуществляли через 7-10 дней. Индекс инфицированности рассчитывали по формуле:

х=а*100 , где в*с х – индекс инфицированности, а – количество выделенных культур; в – количество взятых в опыт животных; с – количество засеваемых органов и лимфоузлов; 100 – коэффициент. Агглютиногенные свойства культур изучали в РА по классической методике. В качестве антигена использовали стандартный антиген единый для РА, РСК, (РДСК), нормальную сыворотку – от кролика. Параллельно ставили реакцию с антигеном из штамма 82 (гомологичный). Для изучения иммуногенных свойств бруцелл вакцинированных морских свинок, через 4,5 месяца заражали оттитрованной вирулентной культурой Br. abortus 54.Заражение проводили подкожно в область левого паха. Животных разделили на две группы. Первой группе доза введения составляла 10-ти кратную минимально инфицирующую – 75 микробных клеток, второй группе двадцатикратная минимально инфицирующая – 150 микробных клеток.

Через 30 дней животных убивали и проводили баквысев из 10 органов и лимфатических узлов (как и в случае определения приживаемости). Определяли индекс инфицированности, с сывороткой крови ставили РА.

Всего в опытах использовано 169 голов морских свинок.

В таблице 1 приведены результаты по приживаемости бруцелл штамма 82 в организме морских свинок и агглютиногенные свойства данных культур.

• 1.    Приживаемость (диссеминация) бруцелл шт.82 в организме морских свинок и агглютиногенные свойства культур

  Культура бруцелл	Доза введения ( м. к.)	Индекс инфицир.	Агглютинабельность
  			антиген.	ср.титр. РА
  24-х часовая гидро-лизатлактальбуми-новая среда	100 тыс.	53,3	шт.82 стандарт.	1:187 отр.
  	1 млн.	70,0	шт.82 стандарт.	1: 107 отр.
  	1 млрд.	60,0	шт.82 стандарт.	1: 93 отр.
  48-и часовая гидролизатлактальбумин овая среда	100 тыс.	25,0	шт.82 стандарт.	1:133 отр.
  	1 млн.	43,3	шт.82 стандарт.	1: 160 отр.
  	1 млрд.	64,3	шт.82 стандарт.	1 : 80 отр.

• 2.    Иммуногенные свойства бруцелл штамма 82, выращенные глубинным методом в жидких и на плотных питательных средах

  Возраст культур	Доза введения (м.к.)	Исслед. голов	В т.ч.иммунных			Заразилось		Из них(%)		Выделено культур	Индекс инфици рован ности	Положи тельно реагир. в РА (гол)
  			Гол.	%		Гол.	%	Генерализ. форма	Регионар. форма
  Культура гидролизатлактальбуминовой среды ( ГЛА )
  24-х часовая	100 тыс.	7	8	85,7		1	14,3	14,3	-	8	11,4	1
  	1 млн.	6	5	83,4		1	16,6	-	16,6	2	3,3	-
  	1 млрд.	15	11	73,4		4	26,6	6,6	20,0	8	5,3	-
  48-и часовая	100 тыс.	9	8	88,9		1	11,1	11,1	-	5	8,3	1
  	1 млн.	6	3	50,0		1	50,0	33,3	16,7	8	8,8	1
  	1 млрд.	22	16	72,7		6	27,3	-	27,3	13	5,9	-
  Культура печеночно-пептонного бульона ( ПП									Б )
  24-х часовая	100 тыс.	10	4	40		6	60	60	-	20	20	1
  	1 млн.	10	5	50		5	50	25	25	6	6,0	1
  	1 млрд.	8	5	62,5		3	37,5	37,5	-	13	16,2	1
  48-и часовая	100 тыс.	9	2	22		7	78	66,9	11,1	36	40	5
  	1 млн.	10	3	30		7	70	70	-	42	42	7
  	1 млрд.	16	8	50		8	50	31,3	18,7	45	28,1	4
  Исходная культура с печеночно-мартеновского хоттингеровского агара (2-х суточная) – ( МПХ )
  48-и часовая	100 тыс.	6	2	33,3		4	66,7	66,7	-	26	43,3	2
  	1 млн.	5	2	40		3	60	60	-	15	30	1
  	1 млрд.	12	6	50		6	50	33,9	16,1	29	24,1	6
  Контрольные животные, невакцинарованные, зараженные шт.54
  	75 клеток	9	-	-	9		100	100	-	82	91,1	9
  	150 клеток	9	-	-	9		100	100	-	69	76,6	9

Контроль антигенов РА с S-сыв. РА с R-сыв. С физраствором

Антиген шт.82        + + + +      + + + +           отр.

Стандартный          + + + +        отр.            отр.

Таким образом, экспериментально установлено, что культура бруцелл штамма 82, полученная глубинным методом культивирования сравнительно хорошо приживалась в организме морских свинок. Индекс инфицированности возрастал с увеличением дозы введения. Культура, выделенная от всех животных, главным образом, из селезенки, парааортального, паховых, заглоточных, подчелюстных лимфоузлов, свидетельствует о полной диссеминации организма животных бруцеллами.

При вскрытии не отмечено патологоанатомических изменений органов и лимфоузлов, нехарактерных для вакцинного процесса. Исследования показали, что культура бруцелл штамма 82, полученная глубинным методом выращивания, проявляла характерные для данного штамма агглютиногенные свойства. Через 25 дней после введения в организм морских свинок она не вызывала серопозитивности со стандартным антигеном в РА, положительная реакция отмечалась только с гомологичным антигеном из штамма 82 в титрах 1: 80 - 1: 187. Это дополнительно характеризует штамм 82 как слабоагглютиногенный.

В таблице 2 представлены сводные данные по изучению иммуногенных свойств бруцелл штамма 82, выращенных глубинным методом в гидролизатлактальбуминовой (ГЛА) и печеночно-пептонном бульоне (ППБ) в сравнении с культурой, выращенной общепринятым методом на плотной питательной среде печеночно-мартеновском агаре Хоттингера (МПХ).

Как явствует из таблицы, культуры бруцелл, полученные в логарифмической фазе роста в процессе глубинного культивирования (24х и 48-и часовые) обладают высокими иммуногенными свойствами.При заражении вирулентной культурой в десятикратной минимально инфицирующей дозе, выявлено, что бруцеллы штамма 82 вызывали достаточно стойкий иммунитет в организме животных - 72,7 - 85,7%, а у животных, из которых была выделена культура, отмечалась, как правило, регионарная форма заражения. Особенно при введении культуры в дозах 1 млн. и 1 млрд. микробных клеток. Из исследованных 59 животных этой группы выделена 31 культура, что составляет 5,2% от общего количества баквысева из органов и лимфоузлов. Индекс инфицированности варьировал в пределах 3,3-11,4. Опыты показали, что бруцеллы штамма 82 в процессе 48-часового культивирования в жидкой среде сохраняли свои иммуногенные свойства. При введении в дозе 100 тыс.м.к. они вызывали стойкий иммунитет у 85,7-88,9% животных. В опытах на других группах морских свинок, подвергшихся заражению минимально инфицирующей дозой вирулентного штамма, относительно высокий иммунитет сохранялся у животных, вакцинированных в дозах 1млн. и 1 млрд. м.к. в пределах 5062,5%, а у животных, вакцинированных контрольной культурой - 50%. Контрольные животные (невакцинированные, зараженные) все заразились.

Следовательно культура бруцелл штамма 82 в процессе культивирования в данной питательной средств течение 48 часов полностью сохраняла свои агглютиногенные и иммуногенные свойства и обладала приживаемостью в организме опытных животных.

Кроме того, можно отметить, что культура бруцелл штамма 82, выращенная в полусинтетической гидролизатлактальбуминовой среде, разработанная в лаборатории экспериментальной технологии биопрепаратов, является

биологически полноценной средой для глубинного культивирования данной культуры. Она обеспечивает хороший выход бактериальной массы и не уступает средам печеночно-пептонному бульону (ППБ), печеночномартеновскому агару Хоттингера (МПХ), печеночно-пептонному глюкозо-глицериновому агару (ППГГА), которые используются в настоящее время в лабораторной и производственной практике.

ЛИТЕРАТУРА: 1. Волик Е.К. Глубинный способ выращивания бактериальных культур для получения биопрепаратов // Тр. науч.конт.ин-та ветеринарных препаратов.-М.,1954.-№3.-С.241-250. 2. Высоцкий В.В. Ультраструктура бруцелл // ЖМЭИ,1967,3.-С.19-22. 3. Никоноров Б.А. Изучение условий глубинного культивирования бруцелл штамма 19 // Тр. ГНКИ.- М.,1972.-С.71-73. 4. Орлов Е.С. Результаты изучения слабоагглютиногенных культур штаммов B. abortus 4004 // Тр. ВИЭВ,1967.-Т.33.-С.161-167. 5. Равилов А.З.и др. Микробиологические среды // Л.: Казань.1999.- 398с. 6. Салмаков К.М. Изучение антигенных и иммуногенных свойств штамма бруцелл // Уч.записки КВИ, 1964.- Т.90.-С.32. 7. Тараканов Ю.И. Глубинное культивирование Br. abortus19 на бульоне Хоттингера // Микробиологическая промышленность,1973,в,3.-С.51-53.

ИММУНОГЕННЫЕ И АГГЛЮТИНОГЕННЫЕ СВОЙСТВА КУЛЬТУРЫ БРУЦЕЛЛ ШТАММА 82,ВЫРАЩЕННЫЕ В ГЛУБИННО-СУСПЕНЗИОННЫХ УСЛОВИЯХ И НА ПЛОТНЫХ ПИТАТЕЛЬНЫХ СРЕДАХ

Акимов Е. К., Галиуллин А.К., Гумеров В.Г.

Резюме

Культура бруцелл штамма 82 в процессе культивирования в данной питательной средств течение 48 часов, полностью сохраняла свои агглютиногенные и иммуногенные свойства и обладала приживаемостью в организме опытных животных.

IMMUNOGENIC ANDAGGLUTINOGENIC PROPERTIES OF BRUCELLA CULTURE OF THE 82 STRAIN CULTIVATED IN DEEP-SUSPENSION CONDITIONS AND ON THE SOLID MEDIUM

Akimov Ye.K.,Galiullin A.K.,Gumerov V.G.