Иммуногистохимические исследования органов и тканей крыс при экспериментальном хламидиозе

Различные виды хламидий вызывают заболевания широко распространенные в популяции животных. Кроме острых процессов, хламидийная инфекция ассоциирована с большим числом хронических заболеваний, сопровожда-ющихся воспалением и фиброзом, что приводит к значительному поражению вовлеченных в инфекционный процесс органов и тканей. Зачастую при хламидиозе отсутствуют специфические клинические симптомы, поэтому методы лабораторной диагностики имеют первостепенное значение.

Материалы и методы исследований. Иммуногистохимическое окрашивание серийных срезов тканей производили пероксидазным методом, используя моно - и поликлональные антитела к хламидийному антигену и систему визуализации EnVision™ (DAKO). Для разведения первичных антител использовали растворитель антител, редуцирующий фоновое окрашивание (DAKO). Все этапы окрашивания проходили на нагревательном столике при температуре 37°С. Суммарное время реакции (без микроскопии и оценки полученных результатов): 12 мин 05 с. Учитывая время, необходимое для приготовления криостатных срезов, для микроскопии и оценки полученных результатов суммарное время колебалось в пределах 20-22 минут.

Результаты исследований. В органах репродуктивной системы взрослой особи отмечена экспрессия хламидийного антигена в эпителиальных тканях шейки матки и эндометрия. В случае наступления беременности возбудитель гематогенным путем может распространяться в ткани плода, повреждая их.

Нами установлена экспрессия антигена в эпителиальных клетках шиповатого слоя эпителия (рис. 1). Именно здесь хламидии могли переживать длительно внутриклеточно, не вызывая четких клинических проявлений заболевания у взрослой особи.

Рисунок 1- Иммуногистохимическая реакция с хламидийным антигеном. Экспрессия хламидийного антигена в клетках многослойного плоского эпителия шейки матки. х 4.

Иммунная система репродуктивных органов реагировала на внедрение возбудителя, но в связи с биологическими особенностями его иммунный ответ был несовершенен. О наличии иммунной активации иммунокомпетентных клеток свидетельствовала положительная экспрессия антигена в лимфоцитах и макрофагальных элементах субэпителиальных отделов шейки матки и эндометрия.

О гематогенном пути распространения инфекции свидетельствует повреждение клеток эндотелия. Именно этот фактор является первоопределяющим патогенетическим звеном при развитии хламидийной инфекции у плода. С одной стороны, эндотелиальные клетки оказывают защитную роль при распространении инфекции, с другой стороны, при их повреждении возбудитель может гематогенным путем мигрировать в организме, как взрослой особи, так и в организме плода. Именно такой путь распространения является наиболее опасным для внутриутробного заражения

Иммунологические реакции, обеспечи- ваемые клеточными и гуморальными факторами, в своем течении имеют целый ряд стадий. В них принимают участие клеточные элементы (макрофаги, лимфоциты Т – клеточного и В – клеточного ряда) и плазменные факторы, в частности, иммуноглобулины, участвующие в реакциях гиперчувствительности немедленного типа. К органам иммунокомпетентной системы относятся тимус у плодов и молодых особей, селезенка, лимфатические образования различной локализации, прослеживаемые наиболее хорошо в органах дыхательных путей и желудочно– кишечного тракта, т.е. там, где вероятность контакта клеточных систем организма с возбудителем наиболее высока. В связи с этим нами была прослежена локализация возбудителя в органах иммунокомпетентной системы (селезенке, лимфатических узлах).

Особенно остро на внедрение хламидий в организм реагирует лимфоидная система – барьер на пути любого патологического агента при распространении его в макроорганизме. В лимфатических узлах экспрессию хла- мидийного антигена наблюдали, в первую очередь, в макрофагальных элементах пери-фолликулярных зон – именно в том месте, где происходит контакт иммунокомпетентных клеток с антигеном и старт иммунного ответа

(рис. 2). Иммунокомпетентные клетки выяв ляли также на уровне синусов (субкапсуляр ных и мозговых) с характерной цитоплазма тической экспрессией хламидийного антиге на.

Рисунок 2 - Экспрессия хламидий в клетке лимфатического узла крысы. Иммуногистохимическая реакция с хламидийным антигеном. х 4

В тимусе плода и новорожденных экспрессия хламидийного антигена прослеживается на уровне мозгового слоя (рис. 3), где наиболее интенсивен уровень иммунных реакций и наблюдаются изменения, связанные со становлением иммунного ответа на внедрение возбудителя. При этом следует учесть незрелость тимуса у особей раннего возраста (слабую выраженность ретикулоэпителиаль-ной системы – телец Гассаля, принимающих участие в выработке иммунокомпетентных поэтинов, стимулирующих созревание и бла-сттрансформацию лимфоцитов).

Известно, что печень является также барьерной системой для многих возбудителей, проникающих и распространяющихся по организму гематогенным путем. В первую очередь следует отметить лимфоидномакрофагальную систему, клетки которой способны выполнять роль макрофагов, реагировать на внедрение возбудителя и осуществлять иммуногенные функции. Так, на нашем материале была установлена экспрессия хламидийного антигена на уровне клеток синусоидных капилляров, т.е. в клетках лимфоидно-макрофагальной системы (рис. 4).

Рисунок 3 - Иммуногистохимическая реакция с хламидийным антигеном. Экспрессия антигена в макрофагах мозгового слоя дольки тимуса плода крысы. х 10.

Рисунок 4 - Иммуногистохимическая реакция с хламидийным антигеном. Экспрессия антигена в макрофагах на уровне синусоидных капилляров печени плода крысы. х 4.

Важную роль в развитии патогенеза при хламидиозе играет селезенка. В светлых центрах фолликулов органа происходит активизация элементов клеточного и гуморального звена иммунопатологических реакций. Клеточные элементы макрофагального звена иммунных реакций способны осуществлять фагоцитоз чужеродных, биологически активных, антигенов, в частности, бактериальных. Хламидии, также являющиеся высокоспецифическим антигеном, подвергаются фагоцитозу клетками макрофагальной системы. Эту реакцию можно наглядно проследить применением иммуногистохимической реакции.

Известно, что центральная нервная сис- тема является наиболее чувствительной к проникновению инфекционного возбудителя в условиях повреждения, функциональной и морфологической незрелости гематоэнцефалического барьера с учетом тропизма возбудителя, куда он проникает гематогенным путем. В структуре сосудистых стенок, в первую очередь, повреждаются клетки внутренней оболочки – эндотелиоциты, в цитоплазме которых хламидии могут переживать и мигрировать по организму. Нами была выявлена экспрессия хламидийного антигена в цитоплазме эндотелиальных клеток мягкой мозговой оболочки (рис. 5).

Рисунок 5 - Иммуногистохимическая реакция с хламидийным антигеном. Экспрессия антигена в эндотелиальных клетках сосудистой стенки мягкой мозговой оболочки плода крысы. х 4.

При использовании иммуногистохимического метода исследования удалось проследить основные патогенетические звенья в развитии хламидийной инфекции. У взрослых особей страдают, в первую очередь, репродуктивные органы (матка), где инфекция чаще имеет хронический характер течения, возбудитель может находиться в латентном состоянии, что особенно опасно для заражения потомства гематогенным путем. Органы лимфоидно-макрофагальной системы (печень, лимфатические узлы) являются первым барьером защитного характера на пути хламидий в организме. Наличие хламидийных антигенов в иммуннокомпетентных клетках, способных выполнять макрофагальную функцию, доказывает формирование иммунного ответа в «барьерных» органах, что может сдерживать гематогенное распространение возбудителя по организму. Если деятельность этой системы, несовершенна по каким – либо причинам (сопутствующая патология, иммунодефицитные состояния, ослабление организма и другие), страдают органы, в частности, головной мозг, который является наиболее защищенным в связи с существованием гематоэнцефалического барьера.

Обсуждение результатов. Хламидийная инфекция принимает генерализованный характер течения с возможностью повреждения самых защищенных органов при недостатке местных барьерных структур, что и было доказано при использовании иммуногистохимического метода исследования с хламидийным антигеном. На нашем материа- ле с помощью иммуногистохимического метода исследова-ния удалось проследить точки фиксации возбудителя в организме взрослой особи, плодовых тканях крыс. Точками воздействия при патогенетическом развитии инфекционного хламидийного процесса, являются: у взрослых особей - органы репродуктивной системы, у плодов и новорожденных иммунокомпетентные органы, в частности, тимус, селезенка, лимфатические узлы. В случае внутриутробной контаминации плода и рождения зараженного организма возбудитель находит благоприятные условия для развития на уровне головного мозга и паренхиматозных органов.

Заключение. Таким образом, в основе изучения интранатального и постнатального патогенеза инфекции можно отметить следующие звенья. Прохождение через родовые пути способствует попаданию возбудителя в организм новорожденного при прямом контакте с инфицированными эпителиальными клетками репродуктивных органов (следует учесть также возможность аспирации и заглатывания плодом инфицированных околоплодных вод с высоким содержанием возбудителя), далее происходит гематогенное распространение возбудителя, включая иммунокомпетентные органы, которые утрачивают способность адекватно реагировать на инфекционное начало, с дальнейшей фиксацией в органах – мишенях с развитием той или иной клинико – морфологической формы заболевания.

Достоверным в диагностике хламидийной инфекции является иммуноморфологический метод, который позволил с большой точностью установить тропизм возбудителя в органах и тканях крыс при экспериментальном заражении.