Иммунологически значимые гликопротеины p54 и CD2v вируса африканской чумы свиней: биоинформатический анализ генетических вариаций и гетерогенности

Бесплатный доступ

Вирус африканской чумы свиней (АЧС) - уникальный представитель возбудителей арбовирусных инфекций, который до сих пор остается единственным представителем семейства Asfarviridae. Он служит возбудителем одной из самых опасных болезней представителей семейства Suidae и, кроме того, способен инфицировать мягких клещей рода Ornithodoros. Генетическая и фенотипическая гетерогенность вируса АЧС остается одной из основных причин отсутствия вакцин против этого опасного трансграничного заболевания. Нами изучена структура и функции наиболее вариабельных гликопротеинов вируса АЧС p54 и CD2v с использованием биоинформатического анализа и рекомбинантных конструкций, экспрессируемых в экстрахромосомном состоянии в культурах клеток млекопитающих COS-I (клетки африканской зеленой мартышки) и HEK-293 (клетки почки эмбриона человека). Согласно результатам проведенного биоинформатического анализа, основанного на расчете индекса разнообразия аминокислотных последовательностей в пропорциях по методу Симпсона, вариабельная область (N-концевой участок) СD2v сильно гликозилирована (содержит 28-30 сайтов N- и О-гликозилирования) и находится на наружной поверхности клеточной мембраны. Эта область также содержит иммуноглобулиновый домен (1-225-я аминокислоты), что обусловливает взаимодействие СD2v с антителами. Выявленные различия в посттрансляционных модификациях и наличие генетических вариаций по белку СD2v могут объяснять разнообразие в проявлении феномена гемадсорбции у изолятов вируса АЧС. Напротив, белок p54 имеет вариабельную часть, локализованную с внутренней стороны клеточной мембраны, и гликозилированный экстраклеточный участок, расположенный с ее внешней стороны. Высокий уровень различий в нуклеотидных последовательностях гена p54 ( E183L ) у разных изолятов вируса АЧС может быть результатом мутационной изменчивости в ходе эволюции. Выявленными особенностями посттрансляционных модификаций и генетическими вариациями по белку СD2v, по всей видимости, объясняется разнообразие антигенных свойств изолятов вируса АЧС. Таким образом, в представленной работе впервые проанализирована посттрансляционная модификация наиболее вариабельных гликопротеинов вируса АЧС - p54 и СD2v. Посредством транзиентной экспрессии в клеточных линиях млекопитающих получены рекомбинантные химерные продукты p54-EGFP и CD2v-HA, что позволило выявить различную локализацию вирусных белков в трансфицированных клетках. В частности, при исследовании культуры клеток COS-I, трансфицированных плазмидой р54-pEGFP-N1, была установлена цитоплазматическая локализация флуоресцентно меченного рекомбинантного белка p54-EGFP. В культуре клеток НЕК-293 белок CD2v обнаруживался исключительно в составе клеточной мембраны. По данным иммуноблоттинга, молекулярная масса CD2v равнялась примерно 90 кДа (при расчетной 65 кДа). Следовательно, в этом поверхностном гликопротеине вириона АЧС на углеводный компонент приходится около 30 % массы. Кроме того, результаты иммуноблоттинга указывали на наличие двух вариантов белка CD2v с молекулярной массой 25 кДа и 90 кДа, то есть предположительно его различных гликозилированных форм, что согласуется с сообщениями в специальной литературе. Итак, выполненный биоинформатический анализ и результаты исследований в культурах клеток COS-I и HEK-293 показали, что именно СD2v может считаться наиболее вероятным белком-кандидатом, определяющим взаимодействие вируса АЧС с вирусоспецифическими антителами.

Еще

Африканская чума свиней, гликопротеины, вариабельность, гликозилирование, транзиентная экспрессия, иммунотипы

Короткий адрес: https://sciup.org/142134845

IDR: 142134845   |   DOI: 10.15389/agrobiology.2015.6.785rus

Список литературы Иммунологически значимые гликопротеины p54 и CD2v вируса африканской чумы свиней: биоинформатический анализ генетических вариаций и гетерогенности

  • Dixon L.K., Rock D.L., Vinuela E. African swine fever-like viruses. Virus taxonomy: classification and nomenclature of viruses. Arch. Virol., 1995, 69(10): 92-94.
  • Michaud V., Randriamparany T., Albina E. Comprehensive phylogenetic reconstructions of African swine fever virus: proposal for a new classification and molecular dating of the virus. PLoS ONE, 2013, 8(7): 1-14 ( ) DOI: 10.1371/journal.pone.0069662
  • Hubalek Z., Rudolf I., Nowotny N. Arboviruses pathogenic for domestic and wild animals. Adv. Virus Res., 2014, 89: 201-275 ( ) DOI: 10.1016/B978-0-12-800172-1.00005-7
  • Porterfield J.S. The basis of arbovirus classification. Med. Biol., 1975, 53(5): 400-405.
  • Burrage T.G. African swine fever virus infection in Ornithodoros ticks. Virus Res., 2013, 173(1): 131-139 ( ) DOI: 10.1016/j.virusres.2012.10.010
  • Boinas F., Ribeiro R., Madeira S., Palma M., de Carvalho I.L., Nuncio S., Wilson A.J. The medical and veterinary role of Ornithodoros erraticus complex ticks (Acari: Ixodida) on the Iberian Peninsula. Journal of Vector Ecology, 2014, 39(2): 238-248 ( ) DOI: 10.1111/jvec.12098
  • Wilkinson P.J. African swine fever virus. In: Virus infections of porcines/M. Pensaert (ed.). Elsevier Science Publishers, Amsterdam, The Netherlands, 1989: 17-35.
  • Chapman D.A., Tcherepanov V., Upton C., Dixon L.K. Comparison of the genome sequences of non-pathogenic and pathogenic African swine fever virus. J. Gen. Virol., 2008, 89(2): 397-408 ( ) DOI: 10.1099/vir.0.83343-0
  • Nix R.J., Gallardo C., Hutchings G., Blanco E., Dixon L.K. Molecular epidemiology of African swine fever virus studied by analysis of four variable genome regions. Arch. Virol., 2006, 151(12): 2475-2494 ( ) DOI: 10.1007/s00705-006-0794-z
  • Yanez R.J., Rodriguez J.M., Nogal M.L., Yuste L., Enriquez C., Rodriguez J.F., Vinuela E. Analysis of the complete nucleotide sequence of African swine fever virus. Virology, 1995, 208(1): 249-278.
  • Villiers E.P., Gallardo C., Arias M., Silva M., Upton C., Martin R., Bishop R.P. Phylogenomic analysis of 11 complete African swine fever virus genome sequences. Virology, 2010, 400(1): 128-136 ( ) DOI: 10.1016/j.virol.2010.01.019
  • Chacon M.R., Almazan F., Nogal M.L., Vinuela E., Rodriguez J.F. The African swine fever. Virology, 1995, 214(2): 670-674.
  • Martinez P.L., Simon M.C., Lopez-Otín C., Vinuela E. Characterization of the African swine fever virus protein p14.5: a DNA binding protein. Virology, 1997, 229(1): 201-211.
  • Dixon L.K., Chapman D.A., Netherton C.L., Upton C. African swine fever virus replication and genomics. Virus Res., 2013, 173(1): 3-14 ( ) DOI: 10.1016/j.virusres.2012.10.020
  • Simon M.C., Freije J.M., Andres G., Lopez-Otín C., Vinuela E. Mapping and sequence of the gene encoding protein p17, a major African swine fever virus structural protein. Virology, 1995, 206(2): 1140-1144.
  • Simon M.C., Andres G., Almazan F., Vinuela E. Proteolytic processing in African swine fever virus: evidence for a new structural polyprotein, pp62. J. Virol., 1997, 71(8): 5799-5804.
  • Carrascosa J.L., Carazo J.M., Carrascosa A.L., Garcia N., Santisteban A., Vinuela E. General morphology and capsid fine structure of African swine fever virus particles. Virology, 1984, 132(1): 160-172.
  • Andres G., Simon M.C., Vinuela E. Assembly of African swine fever virus: role of polyprotein pp220. J. Virol., 1966, 71(3): 2331-2341.
  • Breese S.S. Jr., DeBoer C.J. Electron microscope observation of African swine fever virus in tissue culture cells. Virology, 1966, 28(3): 420-428.
  • Karalova E.M., Voskanian G.E., Sarkisian Kh.V., Abroian L.O., Avetisian A.S., Akopian L.A., Semerdzhian Z.B., Zakarian O.S., Arzumanian G.A., Karalian Z.A. Pathology of lymphoid tissue cells infected by African swine fever virus in vitro. Voprosy virusologii, 2011, 56(1): 33-37.
  • Salas M.L., Andres G. African swine fever virus morphogenesis. Virus Res., 2013, 173(1): 29-41 ( ) DOI: 10.1016/j.virusres.2012.09.016
  • Suarez C., Salas M.L., Rodriguez J.M. African swine fever virus polyprotein pp62 is essential for viral core development. J. Virol., 2010, 84(1): 176-187 ( ) DOI: 10.1128/JVI.01858-09
  • Gomez-Puertas P., Rodriguez F., Oviedo J.M., Brun A., Alonso C., Escribano J.M. The African swine fever virus proteins p54 and p30 are involved in two distinct steps of virus attachment and both contribute to the antibody-mediated protective immune response. Virology, 1998, 243(2): 461-471.
  • Середа А.Д., Балышев В.М. Антигенное разнообразие вируса африканской чумы свиней. Вопросы вирусологии, 2011, 4: 38-42.
  • Borca M.V., Carrillo C., Zsak L., Laegreid W.W., Kutish G.F., Neilan J.G., Burrage T.G., Rock D.L. Deletion of a CD2-like gene, 8-DR, from African swine fever virus affects viral infection in domestic swine. J. Virol., 1998, 72(4): 2881-2889.
  • Quintero J.C., Wesley R.D., Whyard T.C., Gregg D., Mebus C.A. In vitro and in vivo association of African swine fever virus with swine erythrocytes. Am. J. Vet. Res., 1986, 47(5): 1125-1131.
  • Rodriguez J.M., Yanez R.J., Almazan F., Vinuela E., Rodriguez J.F. African swine fever virus encodes a Cd2 homolog responsible for the adhesion of erythrocytes to infected cells. J. Virol., 1993, 67(9): 5312-5320.
  • Казакова А.С. Конструирование продуцентов рекомбинантных белков Р72, Р30 и Р54 вируса африканской чумы свиней. Канд. дис. Покров, 2013.
  • Garcia-Boronat M., Diez-Rivero C.M., Reinherz E.L., Reche P.A. PVS: a web server for protein sequence variability analysis tuned to facilitate conserved epitope discovery. Nucl. Acids Res., 2008, 36: 35-41 ( ) DOI: 10.1093/nar/gkn211
  • Díez-Rivero C.M., Reche P. Discovery of conserved epitopes through sequence variability analyses. Bioinformatics for Immunomics, 2010, 3: 95-101 ( ) DOI: 10.1007/978-1-4419-0540-6_8
  • Maurisse R., De Semir D., Emamekhoo H., Bedayat B., Abdolmohammadi A., Parsi H., Gruenert D.C. Comparative transfection of DNA into primary and transformed mammalian cells from different lineages. BioMed Central Biotechnol., 2010, 10(9): 2-9 ( ) DOI: 10.1186/1472-6750-10-9
  • Laemmli U.K. Cleavage of structural proteins during the assembly of the head of bacteriophage T4. Nature, 1970, 227(5259): 680-685.
Еще
Статья научная