Иммунологический статус ремонтного молодняка крупного рогатого скота на фоне применения разных доз тканевого биостимулятора

Введение. Проблема получения и выращивания здорового молодняка в условиях промышленного ведения молочного скотоводства с каждым годом только обостряется [1, 2]. В условиях неблагоприятной экологии, технологических стрессов у животных снижается иммунный статус, что способствует возникновению болезней различной этиологии, снижению продуктивности [3–5].

Известно, что иммунная система обеспечивает защиту организма от чужеродных агентов и различных веществ, несущих на себе признаки генетической чужеродности. В последние годы появилось большое количество работ, посвященных исследованию применения биологически активных веществ на развитие и становление иммунитета молодых животных [6].

Тканевые препараты содержат в своем составе биологические вещества, способные активизировать функциональную активность иммунной системы. Известны работы, в которых показано стимулирующее влияние тканевых препаратов на фагоцитарную активность ней- трофилов, бактерицидной активности сыворотки крови [7]. Однако остается малоизученным влияние тканевых препаратов на становление Т- и В-систем иммунитета ремонтного молодняка крупного рогатого скота.

Цель исследования : изучение влияния тканевого биостимулятора на иммунный статус ремонтного молодняка крупного рогатого скота.

В задачи исследования входило:

– выявить относительное и абсолютное количество субпопуляций Т- и В-лимфоцитов крови телочек в зависимости от применяемых доз тканевого биостимулятора:

– рассчитать индекс абсолютного соотношения «индукторов-хелперов» и «киллеров-супрессоров» в крови ремонтного молодняка.

Материалы и методы исследования. Научно-хозяйственный опыт проведен в 2020 г. на базе АО «Учхоз “Пригородное”» Индустриального района г. Барнаула Алтайского края на ремонтном молодняке крупного рогатого скота. Схема опыта представлена в таблице 1.

Таблица 1

Группа	n	Препарат	Возраст ремонтных телок при введении препарата, мес.	Доза подкожной инъекции препарата, мл/гол.
Контрольная	10	Физиологический раствор	1	3,0
I опытная	10	Тканевой биостимулятор	1	2,0
II опытная	10	Тканевой биостимулятор	1	3,0
III опытная	10	Тканевой биостимулятор	1	4,0

Схема опыта

Согласно схеме опыта, представленной в таблице 1, было сформировано 4 аналогичных группы ремонтных телочек по 10 голов в каждой. При подборе животных учитывались возраст (1 мес.) и живая масса (51,0 кг). Продолжительность опыта составляла 14 дней.

В ходе проведения опыта животные контрольной и опытных групп получали одинаковый рацион, сбалансированный по всем нормируемым элементам питания. Опытную партию тканевого биостимулятора изготовили из субпродуктов и боенских отходов пантовых оленей по запатентованной технологии. Контроль качества на токсичность и реактогенность проводили на белых мышах, ГОСТ 31926-2013 «Средства лекарственные для ветеринарного применения. Методы определения безвредности» и методические указания «По бактериологическому контролю стерильности ветеринарных биологических препаратов» № 115-6А от 03.06.1980.

Таблица 2

Относительное содержание Т- и В-лимфоцитов крови ремонтного молодняка, %

Отбор проб крови для иммунологических исследований проводился дважды перед началом введения препарата и на 14-й день после инъекции. Забор крови осуществляли из шейной вены в вакуумные пробирки (консервант литий гепарин).

Относительное количество Т-лимфоцитов (%) определяли путем спонтанного розеткообразова-ния с эритроцитами барана при разных режимах инкубации, В-лимфоцитов – розеткообразования с эритроцитами мыши. Абсолютное количество Т- и В-лимфоцитов (кл/мм3) и коэффициент отношения «индукторов-хелперов» и «киллеров супрессоров» (%) – расчетным методом.

Результаты исследования и их обсуждение. Результаты исследования по влиянию нового тканевого биостимулятора на относительное содержание Т- и В-лимфоцитов в крови ремонтного молодняка представлены в таблице 2.

Показатель	Группа
	Контроль	I опытная	II опытная	III опытная
тЕ-РОК	31,8±4,26	36,5±4,31	30,1±1,25	33,5±2,84
	30,7±0,48	32,2±0,83	33,2±0,77*	34,8±1,14*
бЕ-РОК	11,1±3,99	12,9±4,39	11,8±0,25	12,0±2,21
	11,2±0,17	11,8±0,15*	12,7±0,51*	12,2±0,59
рЕ-РОК	15,4±0,72 15,6±0,22	17,4±1,48 15,5±0,56	16,6±1,01 17,4±0,44*	14,0±0,34 16,1±0,64
вЕ-РОК	15,1±5,77 15,8±0,53	17,6±2,88 14,2±0,22*	16,2±1,26 13,2±0,22*	17,9±2,19 13,4±0,58*
ЕМ-РОК	26,6±1,10	26,7±1,50	26,0±0,34	26,5±0,71
	26,4±0,30	27,9±0,46*	28,1±0,35*(*)	28,7±0,36**(*)

Примечание : в верхней строчке – перед введением препарата, в нижней – строчке на 14-й день после введения препарата. Достоверно по отношению к контрольной группе при *p ≤ 0,05, по отношению к началу опыта – при (*) p≤0,05.

Из анализа данных, представленных в таблице 2, следует, что до введения препарата значимых достоверных различий по содержанию в крови телочек, исследуемых субпопуляций Т- и В-лимфоцитов не обнаружено. После инъекций тканевого биостимулятора молодняку I, II и III опытных групп отмечали увеличение количества тотальных лимфоцитов тЕ-РОК на 1,5; 2,5 (p ≤ 0,05) и 4,1 % (p ≤ 0,05) в сравнении с контролем. По сравнению с началом опыта число тЕ-РОК в крови телочек II и III опытных групп увеличилось на 3,1 и 1,3 %, соответственно. У животных в контроле и I опытной группе рассматриваемый показатель стал меньше на 1,1 и 4,3 % соответственно. Тотальные лимфоциты, являясь клетками иммунологической памяти, осуществляют «надзор» за проникновением в организм чужеродных агентов.

Пролиферативная активность субпопуляции бЕ-РОК «активированных лимфоцитов» в крови ремонтного молодняка II опытной группы протекала более активно – на 1,5 % (p ≤ 0,05), чем в контроле. Аналоги I и III опытных групп по рассматриваемому показателю также превосходили на 0,6 (p ≤ 0,05) и 1,0 % контроль соответственно. При сопоставлении количества бЕ-РОК в крови животных контрольной, II и III опытных групп с началом опыта выявлено увеличение рассматриваемой субпопуляции Т-лимфоцитов на 0,1–0,9 %. В I опытной группе число бЕ-РОК в крови уменьшилось на 1,1 %. Субпопуляция бЕ-РОК является активированными лимфоцитами, обладающими разнообразными функциями. Они могут синтезировать молекулы цитокинов в случае, когда они играют роль Т-хелперов или же лизис пораженных клеток в случае Т-киллеров, также часть активированных лимфоцитов преобразуется в Т-клетки памяти.

Число «индукторов-хелперов» рЕ-РОК в крови телочек II и III опытных групп превосходило на 1,5 (p ≤ 0,05) и 0,5 % аналогичный показатель в кон- троле, что указывает на стимуляцию иммунного ответа. У молодняка I опытной группы рассматриваемый показатель находился практически на одном уровне с контролем при незначительном расхождении в 0,1 %. В сравнении с исходными значениями количество субпопуляции рЕ-РОК в крови телочек контрольной, II и III опытных групп увеличилось на 0,2; 0,8 и 2,1 % соответственно. В I опытной группе рассматриваемый показатель уменьшился на 1,9 %.

Количество «киллеров-супрессоров» в Е-РОК в крови телочек I, II и III опытных групп меньше на 1,6 (p ≤ 0,05); 2,6 (p ≤ 0,05) и 2,4 % (p ≤ 0,05) в сравнении с контролем. В сравнении с началом опыта профилиративная активность «киллеров-супрессоров» в крови молодняка контрольной группы увеличилась на 0,7 %, в то время как в крови телочек опытных групп рассматриваемый показатель уменьшился на 3,0– 4,5 %. Установленный факт указывает на напряженность иммунитета в организме телочек контрольной группы, связанную с уничтожением инфекций или других чужеродных агентов.

Уровень В-лимфоцитов ЕМ-РОК в крови молодняка III опытной группы был наибольшим и превосходил на 2,3 % (p ≤ 0,05) аналогичный показатель в контроле, соответственно у телочек I и II опытных групп – на 1,5 (p ≤ 0,05) и 1,7 % (p ≤ 0,05). В сравнении с началом опыта количество ЕМ-РОК в крови телочек опытных групп увеличилось на 1,2–2,2 % (p ≤ 0,05), в контроле аналогичный показатель стал меньше на 0,2 %. Значительное повышение B-лимфоцитов в крови животных при использовании тканевого биопрепарата может свидетельствовать об активации и пролиферации клеток гуморального звена иммунной системы у животных опытных групп.

Абсолютное количество Т- и В-лимфоцитов крови ремонтного молодняка представлено в таблице 3.

Таблица 3

Абсолютное содержание Т-и В-лимфоцитов крови ремонтного молодняка, кл/мм3

Показатель	Группа
	Контроль	I опытная	II опытная	III опытная
1	2	3	4	5
тЕ-РОК	0,82±0,024 0,93±0,108	0,92±0,156 1,10±0,085	1,04±0,321 1,10±0,120	1,03±0,203 1,26±0,186
бЕ-РОК	0,22±0,067 0,27±0,030	0,22±0,067 0,37±0,039	0,34±0,104 0,40±0,017*	0,27±0,050 0,36±0,033
рЕ-РОК	0,41±0,059 0,41±0,045	0,33±0,024 0,44±0,054	0,45±0,152 0,52±0,040	0,35±0,064 0,41±0,037

Окончание табл. 3

1	2	3	4	5
вЕ-РОК	0,48±0,234 0,42±0,032	0,32±0,037 0,37±0,048	0,41±0,082 0,40±0,049	0,43±0,090 0,36±0,033
ЕМ-РОК	0,98±0,052 0,71±0,075(*)	0,67±0,023 0,94±0,095(*)	0,88±0,025 1,04±0,037*(*)	0,79±0,150 0,88±0,045*

Примечание : в верхней строчке – значения перед введением препарата, в нижней строчке – на 14-й день после введения препарата. Достоверно по отношению к контрольной группе при *p ≤ 0,05, по отношению к началу опыта – при (*) p ≤ 0,05.

Абсолютное количество Т- и В-лимфоцитов в крови телочек контрольной и опытных групп перед началом опыта не имели статистически достоверных различий (см. табл. 3). После введения тканевого биостимулятора значимые достоверные различия выявлены по абсолютному количеству бЕ-РОК в крови молодняка II опытной группы, что на 48,1 % (p ≤ 0,05) превосходит аналогичный показатель в контроле. В крови телочек I и III опытных групп число бЕ-РОК увеличилось на 37,0 и 33,3 %, соответственно. В сравнении с началом опыта пролиферативная активность субпопуляции бЕ-РОК в крови молодняка опытных групп увеличилась на 17,6–68,1 %.

Количество тЕ-РОК в крови телочек опытных групп больше на 18,2–35,4 %, чем в контроле. В сравнении с исходными данными число тЕ-РОК в крови молодняка контрольной и опытных групп увеличилось на 5,7–22,3 %.

Профилиративная активность рЕ-РОК в крови телочек I и II опытных групп больше на 7,3 и 26,8 % соответственно, в III опытной группе количество рЕ-РОК находилось на одном уровне с контролем. В сравнении с началом опыта количество рЕ-РОК в крови животных опытных групп увеличилось на 15,5–33,3 %, в контроле рассматрив аемый показатель остался на том же уровне.

Число вЕ-РОК в крови ремонтного молодняка опытных групп ниже на 4,8–14,3 %, чем в контроле. При сопоставлении количества вЕ-РОК в крови телочек подопытных групп после введения препарата с началом опыта выявлено уменьшение рассматриваемого показателя в крови животных контрольной, II и III опытных групп на 2,5–16,3 %, в I опытной группе количество вЕ-РОК увеличилось на 15,6 %.

На 14-й день после инъекции содержание ЕМ-РОК в крови телочек I, II и III опытных групп увеличилось на 32,3; 46,4 (p ≤ 0,05) и 23,9 % (p ≤ 0,05) в сравнении с контролем. В сравнении с началом опыта количество ЕМ-РОК в крови животных опытных групп возросло на 11,3– 40,2 % (p ≤ 0,05). В контроле рассматриваемый показатель стал ниже на 27,6 % (p ≤ 0,05).

Коэффициент абсолютного соотношения «индукторов-хелперов» и «киллеров-супрессоров» представлен на рисунке.

Анализируя данные, представленные на рисунке, можно заключить, что перед началом опыта значимых достоверных различий по коэффициенту соотношения «индукторов-хелперов» и «киллеров-супрессоров» между телочками контрольной и опытных групп выявлено не было.

1,3±0,07*

1,2±0,06*

1,1±0,53     1,1±0,17                              1,1±0,01*

1,0±0,04            1,0±0,19      1,0±0,09

■ До введения препарата

■ На 14 день после введения препарата

Контрольная     I опытная      II опытная      III опытная

Соотношение абсолютного количества «индукторов-хелперов» и «киллеров-супрессоров» в крови ремонтного молодняка, ед.

После инъекции тканевого биостимулятора рассматриваемый показатель в крови ремонтного молодняка I, II и III опытных групп увеличился на 20,0 (p ≤ 0,05); 30,0 (p ≤ 0,05) и 10,0 % (p ≤ 0,05) соответственно в сравнении с контролем, что указывает на повышение функциональной активности иммунной системы телочек опытных групп в сравнении с контролем. Повышение естественной резистентности организма ремонтного молодняка способствует снижению числа случаев заболеваемости инфекционными заболеваниями, увеличению сохранности и повышению интенсивности роста [8].

Имеются две основные гипотезы, объясняющие влияние тканевых препаратов на иммунную систему животных. Обе гипотезы не противоречивы между собой и взаимно дополняют друг друга. Первая свидетельствует о том, что в тканях животных, сохраняемых в условиях, неблагополучных для их существования, накапливаются особые вещества, называемые «биогенными стимуляторами». Биогенные вещества, вступая во взаимосвязь с ферментными системами центральной нервной системы, стимулируют регуляторную функцию гипоталамуса головного мозга, в отношении иммунного статуса организма животных повышая его уровень. Вторая гипотеза, что иммунная система организма животных дает реакцию на внедрения чужеродного белка, мобилизуя защитные силы организма с выработкой специфических антител, более консервативна [9].

Выводы. Тканевой биостимулятор, вводимый ремонтному молодняку крупного рогатого скота в разных дозах, оказывал стимулирующее влияние на Т- и В-системы иммунитета животных. Оптимальной дозой применения изучаемого препарата следует считать 3 мл/гол., что способствует наибольшему увеличению относительного количества: бЕ-РОК – на 1,5 %

(p ≤ 0,05); рЕ-РОК – на 1,8 (p ≤ 0,05); ЕМ-РОК – на 1,7 (p ≤ 0,05); абсолютного количества бЕ-РОК – на 48,1 (p ≤ 0,05) и ЕМ-РОК на 46,4 % (p ≤ 0,05).