Иммуностимулирующий эффект Биферона-С на фоне медикаментозной профилактики болезней свиноматок и поросят в промышленном свиноводстве

Одна из основных причин высокой заболеваемости маточного поголовья свиней и их потомства — иммунодефициты, вызываемые воздействием на организм различных инфекционных и инвазионных патогенов (1, 2), микотоксинов (3, 4), тяжелых металлов (5), широкого применения химиотерапевтических средств и других ксенобиотиков, дефицита питания, отдельных витаминов и микроэлементов (6, 7), стрессов различной этиологии (8). В промышленных свиноводческих хозяйствах часто регистрируют послеродовые патологии (острый послеродовой гнойно-катаральный эндометрит, ММА — мастит-метрит-агалактия) у маточного поголовья, диарейные и респираторные болезни у поросят, вызываемые различными инфекционными агентами на фоне пониженной иммунной реактивности (9-13). Для их профилактики и терапии предложены различные средства и методы (14, 15).

С учетом этиологии и патогенеза послеродовых болезней у свиноматок перспективно применение в комплексе мероприятий по их профилактике иммуностимулирующих препаратов и, в частности, интерферонов, полученных с использованием технологий рекомбинантных белков и об-851

ладающих разносторонним спектром действия, обусловленного активацией иммунной системы. Интерфероны действуют против многих вирусов в процессе их репродукции, обладают выраженной тканевой специфичностью и не чувствительны к антителам против вирусов (16, 17). Кроме того, интерфероны обладают антибактериальными свойствами. Бактериостатический эффект обусловлен значительным нарушением биоэнергетических процессов у микроорганизмов за счет истощения триптофана, а опосредованный бактерицидный — генерацией в макрофагах оксида азота и реактивных видов кислорода (18-21). Защитная роль интерферонов в организме при бактериальных инфекциях связана также с активацией Т-лимфоцитов, макрофагов и естественных киллеров, выполняющих протективную функцию (22). С учетом обнаруженных и изученных свойств интерферонов, указывающих на их участие в сохранении гомеостаза, разработаны препараты с противовирусным и иммуномодулирующим действием (23-26).

Биферон-С — коммерческий препарат, проявляющий антивирусную и иммунностимулирующую активность, который представляет собой смесь свиных рекомбинантных а - и у -интерферонов с видовой специфичностью и суммарной антивирусной активностью не менее 1,0½10⁴ ТЦД₅₀/см³. Согласно фармакологическим свойствам препарата, он влияет на естественную резистентность (индуктор бактерицидной и лизоцимной активности) и иммунный статус (индукция клеточного и гуморального иммунитета, системы эндогенных цитокинов) у свиноматок и поросят. Следует отметить, что в доступной литературе информация о результатах применения Биферона-С крайне ограничена. Нам известна одна работа, в которой представлены данные об изучении влияния рекомбинантных бычьих а - и у -ин-терферонов в составе биопрепарата Биферон-Б на характер завершения стельности и состояние коров и телят после рождения (27).

Накопление сведений о применении и оценке эффективности рекомбинантных белков с видовой специфичностью, безусловно, представляет научный интерес и имеет важное практическое значение. Мы впервые изучили изменение иммунного статуса свиноматок и сохранности поросят-сосунов под влиянием рекомбинантных а - и у -интерферонов — основных действующих веществ препарата Биферон-С (Республика Беларусь) при его применении в сочетании с общепринятыми мерами антибиотико- и химиопрофилактики. При этом было выявлено, что обработка супоросных свиноматок увеличивает сохранность полученных от них поросят в 2 раза, тогда как у потомства необработанных свиноматок Бифе-рон-С повышает сохранность только на 4 %.

Цель исследования — оценить эффект Биферона-С при его применении в дополнение к стандартной схеме медикаментозной профилактики послеродовых патологий у свиноматок и для повышения иммунного статуса поросят-сосунов в условиях промышленного комплекса.

Методика. Для исследований (ООО «Золотая Нива», Знаменский р-н, Тамбовская обл., 2017 год) сформировали 2 группы (по n = 10) глубокосупоросных помесных свиноматок (породы крупная белая + ландрас + дюрок). На 107-е сут супоросности после санитарной обработки свиней размещали в индивидуальных станках в продезинфицированном изолированном боксе цеха опороса. Микроклиматические показатели содержания соответствовали оптимальным для физиологического состояния животных (средняя температура в боксе — 20-23 ° С, относительная влажность воздуха 6571 %). В период опыта свиноматок кормили комбикормом СК-2 (Россия), сбалансированным, согласно данным производителя, по всем заявленным питательным веществам.

Животных I группы (базовый вариант) после опороса обрабатывали по схеме, принятой в хозяйстве: в первые сутки после опороса и далее на 3-и и 5-е сут вводили внутримышечно один раз в день метрамаг («Мосаг-роген», Россия, содержание окситацина 4 МЕ/мл, ципрофлоксацина — 100 мг/мл) и внутриматочно йодопен (ЗАО «НИТА-ФАРМ», Россия; лекарственное средство в форме суппозиториев с содержанием 1,5 г йодпо-видона в каждом). Для свиноматок из II группы (опыт) принятую базовую схему ветеринарной обработки дополнили внутримышечным введением 10 мл Биферона-С (ООО Научно-Производственный Центр «ПроБиоТех», Республика Беларусь; препарат представляет собой смесь свиных рекомбинантных α - и γ -интерферонов с видовой специфичностью и суммарной антивирусной активностью не менее 1,0 x 10 4 ТЦД₅₀/см 3 ) за 24 ч до и через 2 сут после опороса. Клиническое наблюдение (процент заболеваемости, термометрия в первые 4 сут после опороса) за подопытными свиноматками проводили до отъема поросят (в течение 24-26 сут). До применения препаратов и в конце периода наблюдения (24-26 сут) у животных брали кровь в вакуумные пробирки Green Vac-Tube («Green Cross», Южная Корея) для изучения морфологических и иммунологических показателей (цельная кровь и клиническое исследование сыворотки крови).

Из новорожденных поросят от необработанных свиноматок также сформировали 2 группы — I базовую ( n = 332) и II опытную ( n = 333). У животных из базовой группы в 1-е сут после рождения удаляли клыки, купировали хвосты, на 3-и сут вводили Урсоферан-200 («ВИК-здоровье животных», Республика Беларусь) с содержанием в 1 мл 200 мг железа в форме железа (III)-декстран-гептоновой кислоты и кастрировали хрячков. В опытной группе поросятам дополнительно в 1-е и 2-е сут внутримышечно вводили Биферон-С в дозе 0,1 мл/кг живой массы. За подопытными поросятами до отъема от свиноматок (24-26 сут) вели клинические наблюдения: выборочное измерение температуры тела, учет процента заболевших и павших животных, а также динамики роста (групповым взвешиванием).

Морфологию крови изучали на гематологическом анализаторе АВХ Micros 60 («ABX Diagnostics», Франция) с определением лейкоцитарной формулы согласно рекомендациям (М.И. Рецкий, А.Г. Шахов, В.И. Шуш-лебин и др. «Методические указания». Воронеж, 2005).

Иммунологические показатели, включая комплементарную (КАСК) и лизоцимную (ЛАСК) активность, общие иммуноглобулины (Ig), циркулирующие иммунные комплексы (ЦИК) в сыворотке крови (гуморальные сывороточные факторы естественной неспецифической резистентности) и фагоцитарную активность лейкоцитов (ФАЛ), фагоцитарное число (ФЧ), фагоцитарный индекс (ФИ), количество Т- и В-лимфоцитов (клеточный иммунитет), определяли с использованием стандартных и унифицированных методов в соответствии с рекомендациями (А.Г. Шахов, Ю.В. Масья-нов, М.И. Рецкий и др. «Методические рекомендации по оценке и коррекции иммунного статуса животных». Воронеж, 2005). Резервную функцию кислородзависимых бактерицидных систем фагоцитов (спонтанный и стимулированный тест с нитросиним тетразолием — спНСТ и стНСТ), показатель резерва (ПР) и индекс активации нейтрофилов (ИАН) оценивали по цитохимической реакции с учетом внутриклеточных отложений дифор-мазана, нерастворимой формы восстановленного тетразолия нитросинего в соответствии с методическими рекомендациями («Способ оценки функциональной активности нейтрофилов человека по реакции восстановления нитросинего тетразолия». Казань, 1979) и описанием (28).

Статистическую обработку полученных данных проводили с помощью пакета программ Statistica 6.1 («StatSoft, Inc.», США). Результаты исследований представлены в виде средней арифметической ( M ) и ошибки средней арифметической (±SEM). Достоверность различий между опытом и контролем оценивали по t -критерию Стьюдента. Различия считали статистически значимыми при р < 0,05.

Результаты. Фоновые иммунологические исследования крови свиноматок в обеих группах показали, что большинство тестируемых показателей соответствовало оптимальным для окончания срока супоросности, существенных различий по группам мы не зарегистрировали.

У свиноматок, обработанных Бифероном-С, в конце опыта (2426 сут) относительное и абсолютное количество моноцитов, вызывающих интенсификацию фагоцитоза, было выше, чем в базовом варианте, соответственно на 54,8 % (р < 0,001) и 51,9 % (р < 0,01). Подобные изменения под влиянием интерферонов произошли и в содержании лимфоцитов, хотя и в меньшей степени. У животных во II группе отмечали тенденцию к повышению относительного и абсолютного числа лимфоцитов в сравнении с аналогичными показателями в I группе соответственно на 6,9 и 6,7 %, в то время как повышение количества Т- и В-лимфоцитов было достоверным — на 57,5 % (р < 0,0001) и 34,6 % (р <  0,01 ) и в 2 раза (р < 0,001) и на 58,1 % (р < 0,01), что свидетельствует о положительном влиянии Биферона-С на клетки, отвечающие за все специфические иммунные реакции (см. табл. 1).

1. Морфологические показатели крови и лимфоцитарный профиль у помесных свиноматок под влиянием Биферона-С на 24-26-е сут ( M± SEM, ООО «Золотая Нива», Тамбовская обл., 2017 год)

Показатель		I группа (базовый вариант, п = 10)	II группа (опыт, п = 10)
Эритроциты, ½1012/л		4,82±0,30	5,17±0,08
Лейкоциты, ½109/л		12,70±0,66	12,70±0,56
Гемоглобин, г/л		122,20±2,17	125,20±3,54
Гематокрит, %		31,70±1,61	32,80±0,48
Лейкоцитарная формула:
палочкоядерные нейтрофилы	%	4,10±0,16	2,20±0,31***
	всего	0,53±0,05	0,28±0,05***
сегментоядерные нейтрофилы	%	45,3±1,63	47,50±2,79
	всего	5,97±0,49	6,00±0,42
эозинофилы	%	4,70±0,52	3,07±0,31*
	всего	0,60±0,07	0,39±0,06*
моноциты	%	2,10±0,17	3,25±0,09**
	всего	0,27±0,04	0,41±0,03*
лимфоциты	%	42,0±2,13	44,90±1,77
	всего	5,34±0,36	5,70±0,10
Т-лимфоциты	%	29,2±1,86	46,00±2,71***
	всего	1,82±0,17	2,45±0,19*
В-лимфоциты	%	12,0±1,34	24,00±2,70**
	всего	0,74±0,09	1,17±0,11*

П р и м еч а ни е. Описание групп см. в разделе «Методика».

*, ** и *** Различия с базовым вариантом статистически значимы соответственно при р < 0,01; р < 0,001

и р < 0,0001.

Применение Биферона-С способствовало повышению естественной неспецифической резистентности, направленной против любых инфекционных и неинфекционных агентов. Так, у животных в опытной группе отмечали устойчивую тенденцию к повышению активности (на 8,1 % в сравнении с базовым вариантом) системы комплемента (табл. 2), компоненты которого связываются с бактериями, играя важную роль при воспалении и в развитии устойчивости организма к инфекционным агентам (29). Содержание лизоцима — фактора противомикробной защиты (см. табл. 2) в сыворотке крови у свиноматок во II группе по сравнению с I возросло на

8,5 % (р < 0,05), что указывало на более высокую пролиферативную активность синтезирующих его гранулоцитов, моноцитов и макрофагов под влиянием интерферонов, входящих в состав Биферона-С.

2. Показатели иммунного статуса у помесных свиноматок на 24-26-е сут под влиянием Биферона-С ( M± SEM, ООО «Золотая Нива», Тамбовская обл., 2017 год)

Показатель	I группа (базовый вариант, п = 10)	II группа (опыт, п = 10)
КАСК, % гемолиза	30,70±0,65	33,20±1,83
ЛАСК, мкг/мл	3,53±0,08	3,83±0,10*
ФАЛ, %	83,80±1,91	85,40±1,29
ФЧ	3,58±0,21	4,61±0,36*
ФИ	7,34±0,54	7,51±0,48
Ig, г/л	25,10±0,83	25,20±1,08
ЦИК, г/л	0,26±0,01	0,17±0,01***
спНСТ, %	33,20±2,08	43,20±1,93**
стНСТ, %	47,60±3,04	67,80±2,96**
ПР, ед.	1,43±0,03	1,57±0,05*
ИАН, ед.	0,30±0,01	0,36±0,01**

П р и м е ч а н и е. Описание групп см. в разделе «Методи- ка». КАСК — комплементарная активность сыворотки крови, ЛАСК — лизоцимная активность сыворотки крови, ФАЛ — фагоцитарная активность лейкоцитов, ФЧ — фагоцитарное число, ФИ — фагоцитарный индекс, ЦИК — циркулирующие иммунные комплексы, спНСТ — спонтанный НСТ-тест, стНСТ — стимулированный НСТ-тест, ПР — показатель резерва; ИАН — индекс активации нейтрофилов.

*, ** и *** Различия с базовым вариантом статистически значимы соответственно при р < 0,05; р < 0,01 и р < 0,0005.

У животных в опытной группе регистрировали более выраженную по сравнению с базовым вариантом поглотительную способность нейтрофилов — фагоцитарное число было выше на 18,8 % (р < 0,05) (см. табл. 2). О положительном влиянии интерферонов на систему фагоцитоза свидетельствуют показатели, характеризующие переваривающую функцию клеток. СпНСТ-тест, позволяющий оценить состояние кислородозависимой бактери-цидности фагоцитов крови in vitro (30), у свиноматок во II группе был на 30,1 % (р < 0,01) выше, чем в базовом варианте, что свидетельствует об усилении у них цитотоксичности фагоцитов под влиянием инъецированных интерферонов (см. табл. 2). Под влиянием Биферона-С показатели в стНСТ-тесте, характеризующие активность фагоцитирующих клеток в присутствии антигена и рассматриваемые как признак их готовности к завершенному фагоцитозу (30), оказались у свиноматок выше на 42,4 % (р < 0,01). Функциональный резерв клеток (разница между числом активированных и спонтанных диформазан-позитивных фагоцитов клеток) у животных из опытной группы был больше на 9,8 %, а ИАН — на 20,0 % (р < 0,01). Полученные результаты позволяют говорить об увеличении метаболического резерва фагоцитов и их переваривающей функции под воздействием интерферонов Биферона-С.

ЦИК (продукты реакции антиген-антитело, которые участвуют в поддержании гомеостаза) у свиноматок обеих групп соответствовал физиологическому показателю (меньше 0,5 г/л). Однако у животных в опытной группе количество ЦИК было на 34,6 % (р < 0,0005) меньше, чем в I группе, что, по-видимому, связано со снижением воздействия технологических иммуносупрессивных факторов и антигенной нагрузки на организм под влиянием интерферонов (см. табл. 2).

Положительное влияние Биферона-С на иммунный статус свиноматок обусловлено наличием в его составе рекомбинантных белков (23). α-Интерферон, которому, главным образом, присущи антивирусный и ан-типролиферативный эффекты, повышает активность естественных киллеров, Т-хелперов, фагоцитоза, интенсивность дифференцировки В-лимфо- цитов, а также ускоряют элиминацию циркулирующих иммунных комплексов (31-33). у-Интерферон, синтезируемый активированными Т-лимфоцитами и NK-клетками, — один из звеньев, связывающих факторы врожденного и приобретенного иммунитета (34, 35). Стимулирующее действие у-интерферона связано с активацией фагоцитарной функции макро- фагов, продукцией активных форм кислорода и азота, простагландинов. Также он способен активировать Т-хелперы и Т-цитотоксические лимфоциты, стимулировать дифференцировку В-клеток для выработки иммуноглобулина G и миграцию лимфоцитов в ткани за счет адгезии на эндотелии, тем самым усиливая иммунную клеточную реакцию, повышать функциональную активность антиген-презентирующих клеток (36-38).

Применение Биферона-С, повышающего иммунный статус, положительно сказалось на клиническом состоянии свиноматок и полученных от них поросят (табл. 3), способствуя профилактике послеродовых заболеваний у маточного поголовья и повышению сохранности приплода. У свиноматок обеих групп не регистрировали клинические признаки послеродовой патологии, лишь у некоторых отмечали повышение температуры на 0,1-0,3 ° С в первые дни после опороса, при этом в опытной группе таких животных было меньше на 10 %. Прирост живой массы и сохранность поросят, полученных от свиноматок из опытной группы, также превышали таковые в случае с базовым вариантом соответственно на 4,5 % и практически в 2 раза (см. табл. 3).

3. Показатели сохранности приплода, полученного от помесных свиноматок, обработанных Бифероном-С ( M± SEM, ООО «Золотая Нива», Тамбовская обл., 2017 год)

Показатель	I группа (базовый вариант)	II группа (опыт)
Число свиноматок, n	10	10
Получено поросят на 1 свиноматку	13,50±0,67	13,90±0,78
Масса поросят при рождении, кг	1,26±0,03	1,24±0,04
Масса поросят при отъеме, кг	7,68±0,56	7,95±0,49
Среднесуточный прирост массы, г	247,00±7,54	258,00±7,33
Падеж поросят, %	4,20	2,15
П р и м еч а ни е. Описание групп см.	в разделе «Методика».

Применение Биферона-С на поросятах-сосунах, чьи матери не получали этот препарат, в целом положительно повлияло на состояние животных: при использовании препарата их сохранность составила 95,2 %, без применения (контроль) — 93,1 %. При этом заболеваемость желудочно-кишечными инфекциями в опытной группе снизилась на 4,0 %, а падеж — в 1,4 раза (табл. 4).

4. Профилактическая эффективность Биферона-С на поросятах, полученных от помесных свиноматок, не обработанных препаратом ( M± SEM, ООО «Золотая Нива», Тамбовская обл., 2017 год)

Показатель                      I группа (контроль) II группа (опыт)

Число поросят	332	333
Масса поросят при рождении, кг	1,38±0,98	1,28±0,64
Масса поросят при отъеме, кг	7,46±0,48	7,39±0,52
Среднесуточный прирост массы, г	243,30±8,19	244,50±9,32
Заболевших желудочно-кишечными инфекциями, всего/%	48/14,5	35/10,5
Падеж поросят, всего/%	23/6,9	16/4,8
П р и м еч а ни е. Описание групп см. в разделе «Методика».

Таким образом, представленные результаты исследования в основном подтверждают характеристики Биферона-С, заявленные разработчиками. В то же время нами впервые изучен эффект этого препарата в производственных условиях в сочетании с традиционными схемами медикаментозной профилактики. Показано, что введение Биферона-С свиноматкам за 24 ч до опороса и через 2 сут после него (на фоне внутримышечного введения метрамага и внутриматочного — йодопена) достоверно изменило количественные соотношения в некоторых популяциях клеток крови (содержание палочкоядерных нейтрофилов, эозинофилов и моноцитов) и 856

статистически значимо повысило показатели иммунного статуса: лизоцим-ную активность сыворотки крови, интенсивность фагоцитоза, абсолютное и относительное содержание Т- и В-лимфоцитов с отмеченной тенденцией повышения активности системы комплемента. При этом в 2 раза сократился падеж полученного от таких свиноматок приплода при практически одинаковых других показателях его выхода и развития поросят (их число на свиноматку, масса при рождении и отъеме, среднесуточный прирост живой массы). При применении препарата на поросятах-сосунах от матерей, не обработанных Бифероном-С, тоже наблюдали тенденцию к снижению заболеваемости желудочно-кишечными инфекциями и падежа (на 4 %) при несущественных различиях в характеристиках роста и развития.