Ионы меди индуцируют микроядра в эритроцитах карпа

Заг^язнение ок^ужающей с^еды солями тяжёлых металлов является важной п^облемой экологии. Последние 25 лет ха^акте^изуются в экотоксикологии повышенным вниманием к п^облемам, связанным с заг^язнением тяжёлыми металлами водных экосистем. Реки и озё^а стали испытывать сильное заг^яз-нение тяжёлыми металлами из-за воз^астающего поступления п^омышленных, сельскохозяйственных и бытовых стоков. В некото^ых ^егионах из-за заг^яз-нения воды ^езко снижается численность популяций гид^обионтов, сок^ащается их био^азнооб^азие.

Помимо токсических эффектов соли тяжёлых металлов могут оказывать канце^огенное и мутагенное воздействия. Генетические эффекты солей тяжёлых металлов изучены недостаточно. До сих по^ не ^аз^аботана общая тео^ия мутагенности металлов. Не всегда понятны механизмы индукции мутаций и количественные закономе^ности изменения частот му-ти^ования от концент^ации металла в с^еде. Не изучены отдалённые генетические последствия х^ониче-ского воздействия повышенных концент^аций тяжёлых металлов. Поэтому анализ генетических эффектов ост^ого и х^онического их воздействий на живые о^ганизмы является очень актуальным.

Одним из тяжёлых металлов, интенсивно заг^яз-няющих ок^ужающую с^еду, является медь. К настоящему в^емени опубликован ^яд ^абот, ставящих целью анализ генетических эффектов меди, но этих сведений явно недостаточно, а некото^ые ^езультаты достаточно сильно п^отиво^ечат д^уг д^угу. По этой п^ичине необходимо дальнейшее изучение мутагенности ^азличных соединений меди.

Heavy metals are one of the main groups of anthropogenic pollutants of the biosphere. For this reason, the mutagenic properties of heavy metals require careful study for organisms of different taxonomic groups. The author investigated the frequencies of micronuclei and other nuclear anomalies in erythrocytes of carp after 24 hours of exposure to copper ions. The concentration of copper ions in water varied from 0.5 to 8.0 mg/l. It was found that the daily effect of copper ions causes a statistically significant increase in nuclear anomalies in carp erythrocytes.

В настоящей ^аботе п^едставлены ^езультата исследования суточного воздействия ^аство^ённого в воде сульфата меди на частоту индукции мик^ояде^ и некото^ых д^угих яде^ных аномалий в э^ит^оцитах пе^ифе^ической к^ови годовалых ка^пов.

Материалы и методы

Материалом для исследования служили ^ан-домб^едные годовалые ка^пы ( Cyprinus carpio ), массой 20-25 г., п^иоб^етённые в ^ыбхозе О^ловской области.

Годовиков ка^па, п^ивезённых из ^ыбхоза, для адаптации помещали по 50 экз. в 150-лит^овые аква-^иумы. Аква^иумы заполняли чистой водоп^оводной водой после её п^едва^ительного отстаивания в течение 2 суток. Воду в аква^иумах п^инудительно аэ^и-^овали и фильт^овали. Темпе^ату^у на у^овне 22 °С и световой ^ежим (10 часов освещения люминесцентными лампами и 14 часов темноты) подде^живали автоматически. После адаптационного пе^иода, п^о-должительностью не менее 3 суток, ^ыбу использовали для п^оведения экспе^иментов. Во в^емя адаптации и после выполнения экспе^иментального воздействия ^ыб ко^мили 1 ^аз в сутки комме^ческим ком-бико^мом для ка^повых ^ыб.

Методы воздействия сульфатом меди. В воде водоёмов, используемых для ^ыбоводства, п^едельно допустимая концент^ация меди составляет 0,01 мг/л. Гигиенические т^ебования и но^мативы качества питьевой воды [1] ог^аничивают соде^жание меди в концент^ации 1 мг/л. П^едельно допустимая концен-т^ация (ПДК) меди в воде водных объектов хозяй- ственно-питьевого и культу^но-бытового водопользования составляет также 1 мг/л [2]. ПДК меди, утве^-ждённые ВОЗ и ЕС, составляет 2 мг/л.

За основу для п^иготовления экспе^иментальных ^аство^ов была п^инята ПДК меди для водных объектов хозяйственно-питьевого и культу^но-бытового водопользования – 1 мг/л. В экспе^иментах был использован сульфат меди (CuSO4·5H2O) квалификации «^ДА». Исследовали влияние суточного воздействия ионов меди в концент^ациях 0,5, 1, 2, 4, 5 и 8 ПДК или, соответственно, 0,5, 1, 2, 4, 5, 8 мг Cu+2 в лит^е воды.

Для п^оведения генотоксических экспе^иментов использовали 10-лит^овые пластмассовые сосуды. Для п^иготовления опытных ^аство^ов соли металла пе^воначально готовили маточные ^аство^ы, концен-т^ации и объёмы кото^ых позволяли обеспечить последующее п^иготовление опытных ^аство^ов в нужных количествах. В экспе^иментальные ^аство^ы помещали ^ыб на 24 часа. По истечении 24-часового воздействия ^ыбу пе^есаживали в аква^иумы с чистой водой ещё на 24 часа (для ^еализации в клетках возможных на^ушений, индуци^ованных исследуемым факто^ом). По истечении этого пе^иода в^емени готовили мазки к^ови ^ыб. Возействие каждой кон-цент^ации п^оводили в двух независимых повто^но-стях (в двух экспе^иментальных ёмкостях) по 4 ^ыбы в каждой.

Методы приготовления препаратов. К^овь от-би^али из хвостовой вены ^ыб с помощью одно^азо-вого шп^ица с небольшим количеством (≈0,03 мл) гепа^ина в физиологическом ^аство^е. Каплю взятой к^ови выдавливали из шп^ица на чистое п^едметное стекло и делали мазок в соответствии с методическими ^екомендациями [3, 4]. Мазок высушивали на воздухе в течение 18-36 часов и затем фикси^овали в 96%-ном этаноле в течение 25-30 минут.

П^епа^аты ок^ашивали 5%-ным ^аство^ом азу^-эозина Гимза по Романовскому на фосфатном буфе^е в сосудах Коплина (BioVitrum), помещённых в те^мо-стат с темпе^ату^ой 37 °С. Интенсивность ок^аски

а

б

в

пе^иодически конт^оли^овали визуально п^и малом увеличении мик^оскопа. П^и достижении оптимальной интенсивности ок^аски клеточных яде^ к^аситель сливали, п^епа^аты п^омывали ст^уёй водоп^овод-ной воды, затем ополаскивали т^емя сменами дистил-ли^ованной воды и высушивали.

П^епа^аты п^осмат^ивали под мик^оскопом ма^ки "AxioImager A1" (Karl Zeiss) с циф^овой цветной фотокаме^ой "ProgRes CFscan" в составе комплекса аппа^атно-п^ог^аммной визуализации мо^фо-логических п^епа^атов для анализа и ^егист^ации показателей «ВидеоТесТ-Мо^фология» (Санкт-Пете^бу^г, «ВидеоТесТ»).

Метод анализа микроядер и ядерных аномалий .

Мик^оскопический анализ клеток выполняли в соответствии со следующими п^инципами. Для анализа выби^али такие участки мазка, на кото^ых э^ит-^оциты ^асполагались без наложения д^уг на д^уга.

Мик^ояд^ами считали х^оматиновые об^азова-ния, удовлетво^яющие следующим условиям:

– ^азме^ мик^ояд^а не должен п^евышать 1/5 ^азме^а яд^а этого э^ит^оцита;

– мик^ояд^а должны быть чётко отделены от основного яд^а;

– мик^ояд^о должно находиться в той же плоскости, что и основное яд^о, и его оптическая плотность не должны существенно отличаться от оптической плотности основного яде^ного мате^иала. Мик-^ояд^а, ^азме^ кото^ых п^иближался бы к 1/5 ^азме^а яд^а, п^актически не вст^ечались. Обычно ^азме^ обна^уживаемых мик^ояде^ не п^евышал 1/10 ^азме-

^а клеточного яд^а.

Помимо мик^ояде^ п^и анализе фикси^овали клетки с на^ушенной мо^фологией яде^. С^еди аномалий клеточных яде^ выделяли следующие (^ис):

– пузы^ящиеся (ЛӏеЛЛеd) яд^а (BL)

– лопастные (ӏоЛеd) яд^а (LB)

– зазуб^енные (notched) яд^а (NT)

– двуяде^ные клетки (Лinuclei) (BN)

– яд^а в стадии амитотического деления (АМ)

г д

Рис. Эритроциты карпов с различными аномалиями ядер: а — нормальное ядро; б — микроядро; в — двуядерный эритроцит; г — амитоз; д — blebbed (пузырящееся) ядро; е - lobed (лопастное) ядро; ж - notched (зазубренное) ядро.

е

Рис. 1. - Эритроциты карпов с различными аномалиями ядер.

К пузы^ящимся (ЛӏеЛЛеd, BL) яд^ам относили яд^а, имеющие одно или, чаще, несколько небольших выпячиваний яде^ной оболочки, соде^жащих х^ома-тин.

К лопастным (ӏоЛеd, LB) были отнесены яд^а с выпячиваниями большого ^азме^а, кото^ые, в свою оче^едь, могли нести одно или несколько выпячиваний («лепестков») меньшего ^азме^а.

К зазуб^енным (nоtchеd, NT) яд^ам относили такие яд^а, у кото^ых яде^ная оболочка имела ост^око-нечную «вмятину»,

Двуяде^ными (Лinucӏеatеs, BN) клетками считали клетки, имеющие два яд^а, имеющие п^иблизительно ^авные ^азме^ы и интенсивности ок^ашивания, находящиеся в п^еделах цитоплазмы одной клетки, ^аспо-ложенной обособленно от д^угих э^ит^оцитов.

К амитотически делящимся клеткам относили э^ит^оциты, мо^фология яд^а кото^ых чётко указывала на п^отекающий п^оцесс амитотического деления. Такие яд^а обычно сильно вытянуты и имеют гантелеоб^азную фо^му .

В нескольких ва^иантах опыта после воздействия на ^ыб ионов меди в максимальных концент^а-циях обна^ужили по одной погибшей ^ыбе. ^тобы у^авнять количество п^оанализи^ованных ^ыб в каждой из двух повто^ностей экспе^имента анализи^ова-ли по т^и ^ыбы из четы^ёх. В мазке каждой из них п^осмат^ивали не менее 3000 э^ит^оцитов. Таким об^азом, частоту аномалий в каждом ва^ианте опыта ^ассчитывали после анализа не менее 18000 клеток.

^астоты обна^уженных яде^ных аномалий вы-^ажали в долях единицы. Достове^ность ^азличий в частотах на^ушений между конт^олем и ^азличными ва^иантами опыта оп^еделяли п^и у^овне значимости Р≤0,05 после φ-п^еоб^азования частот аномалий [5, с. 166-169]. Все ^асчёты были ^еализованы с использованием элект^онных таблиц MS Excel.

Результаты и обсуждение

В настоящее в^емя мик^ояде^ный тест с успехом используется для тести^ования мутагенов с использованием ^ыб [6-11]. Методические ^екомендации этих авто^ов использованы п^и выполнении данного исследования.

Результаты мик^оскопического анализа мазков к^ови ка^пов после суточного воздействия ^азличных концент^аций меди п^иведены в таблицах 1-8.

Таблица 1. - Абсолютные количества нормальных эритроцитов и эритроцитов с ядерными аномалиями у карпов после 24-часового воздействия ионов меди в различной концентрации

Концент^ация Cu+2, мг/л	Всего изучено клеток	В том числе клеток
		но^маль-ных	с мик^о-яд^ами	двуяде^-ных	в стадии амитоза	с яд^ами blebbed	с яд^ами lobed	с яд^ами notched
0, Конт^.	19813	19664	94	16	12	1	4	22
0,5	19542	19350	98	23	32	7	6	26
1,0	22924	22713	119	27	21	6	11	27
2,0	19804	19566	131	33	26	9	8	31
4,0	19937	19704	134	32	23	12	6	26
5,0	22600	22311	146	36	44	20	14	29
8,0	19071	18810	146	31	30	16	12	26

Частота микроядер, индуцируемых медью. Статистический анализ полученных ^езультатов (табл. 1) показал, что п^и п^ебывании ^ыб в воде с концент^ацией меди 0,5 мг/л, частота клеток с мик^о-яд^ами статистически достове^но не отличается от конт^оля. П^и повышении концент^ации до 1 мг/л. количество мик^ояде^ воз^астает до величины 0,66%. Эта частота уже статистически достове^но отличается от конт^ольной величины 0,47%. П^и дальнейшем увеличении концент^ации меди в воде до 4 мг/л частота индуци^ованных мик^ояде^ постепенно ^астёт до значения 0,93%. П^и более высоких концент^аци-ях меди (5 и 8 мг/л) наблюдается снижение частот индуци^уемых мик^ояде^. Уменьшение частоты мик-^ояде^, ве^оятно, п^оисходит в ^езультате интоксикации клеток и п^ек^ащения их деления, в п^оцессе кото^ого и п^оисходит об^азование мик^ояде^.

Таблица 2. - Частота эритроцитов с микроядрами (%) у карпов после суточного воздействия ионов меди шести различных концентраций

Концент^ация Cu+2, мг/л	^астота, p,	Ва^ианса, O p	Довер. инт. р при Р=0,05, ± O p * 1,96	Величина Ф	К^ите^ий u	У^овень значим., Р
Конт^оль	0,47	0,05	0,10	0,1379	–
0,5	0,50	0,05	0,10	0,1418	0,1418	>0,05
1,0	0,66	0,06	0,11	0,1628	0,1628	<0,05
2,0	0,67	0,06	0,11	0,1642	0,1642	<0,01
4,0	0,93	0,08	0,16	0,1929	0,1929	<0,001
5,0	0,65	0,05	0,10	0,1609	0,1609	<0,05
8,0	0,77	0,06	0,12	0,1752	0,1752	<0,001

Таким об^азом, повышение концент^ации ионов меди в воде до величины, ^авной (1,0 мг/л) вызывает статистически достове^ное увеличение частоты инду-ци^ованных мик^ояде^ в клетках пе^ифе^ической к^ови ка^пов. Концент^ации меди, ^авные 5 и 8 пить- евым ПДК (4 и 8 мг/л), возможно, ингиби^уют митотическую активность к^оветво^ных клеток, за счёт чего и п^оисходит некото^ое снижение частоты возникновения мик^ояде^.

Частота двуядерных клеток. П^и воз^астании концент^ации ионов меди от 0 (конт^оль) до 1,0 мг/л частота двуяде^ных клеток статистически достове^но не отличалась от конт^оля. Статистически достове^-ное увеличение частоты двуяде^ных клеток обна^у-живалось п^и концент^ациях ионов меди 2 и 4 мг/л. Этот факт может быть косвенным подтве^ждением на^ушения ионами меди в высоких концент^ациях п^оцессов митотического деления клеток. П^и кон-цент^ация 5 и 8 м/л частота двуяде^ных клеток несколько снижается, оставаясь п^и этом статистически достове^но отличающейся от конт^оля п^и Р<0,05. Это снижение частот, по-видимому, является ^езуль-татом сильной интоксикации клеток.

Таблица 3. – Частота двуядерных клеток (%) у карпов после суточного воздействия ионов меди шести различных концентраций

Концент^ация Cu+2, мг/л	^астота, p,	Ва^ианса, O p	Довер. инт. р при Р=0,05, ± o d4,96	Величина Ф	К^ите^ий u	У^овень значим., Р
0, Конт^оль	0,08	0,02	0,04	0,0568	–
0,5	0,12	0,02	0,05	0,0686	1,17	>0,05
1,0	0,14	0,03	0,05	0,0739	1,70	>0,05
2,0	0,17	0,03	0,06	0,0814	2,45	<0,05
4,0	0,22	0,04	0,08	0,0942	3,41	<0,001
5,0	0,16	0,03	0,05	0,0798	2,36	<0,05
8,0	0,16	0,03	0,06	0,0807	2,35	<0,05

Частота клеток с амитозами. Из п^иведённых в таблице 11 данных следует, что п^исутствие меди в с^еде обитания увеличивает частоту амитозов до значений, статистически достове^но отличающихся от конт^оля. Низкую частоту амитозов п^и концент^а- ции 1 мг/л объяснить в настоящее в^емя не п^едо-ставляется возможным. П^ичиной могут быть либо физиологические особенности ^ыб, попавших в эту экспе^иментальную г^уппу, либо действие каких-либо неконт^оли^уемых в экспе^именте факто^ов.

Таблица 4. – Частота амитозов (%) у карпов после суточного воздействия ионов меди шести различных концентраций

Концент^ация Cu+2, мг/л	^астота, p,	Ва^ианса, O p	Довер. инт. р при Р=0,05, ± о„4,96	Величина Ф	К^ите^ий u	У^овень значим., Р
Конт^оль	0,06	0,02	0,03	0,0492	–
0,5	0,16	0,03	0,06	0,0810	3,15	<0,01
1,0	0,11	0,02	0,05	0,0651	1,58	>0,05
2,0	0,13	0,03	0,05	0,0722	2,29	<0,05
4,0	0,16	0,03	0,07	0,0798	2,8	<0,01
5,0	0,20	0,03	0,06	0,0883	4,01	<0,001
8,0	0,16	0,03	0,06	0,0793	2,97	<0,01

Таким об^азом, п^и концент^ациях ионов меди 2,0 мг/л и выше частота митотически делящихся клеток в пе^ифе^ической к^ови ка^па статистически до-стове^но увеличивается.

Частота клеток с blebbed ядрами. «Пузы^ящи-еся яд^а» (ЛӏеЛЛеd nucӏеi) п^едставляют собой мо^фо-логическую аномалию инте^фазного яд^а, п^оявля-ющуюся в об^азовании на яде^ной оболочке ст^ук-ту^, напоминающих пузы^и, заполненные х^оматино- вым мате^иалом. Результаты статистического анализа полученных данных свидетельствуют о высокой чувствительности этого показателя к воздействию меди: частота подобных клеток ^езко воз^астает с 0,01% в конт^оле до 0,08-0,09% п^и увеличении концент^а-ции меди до 4-8 мг/л. Во всех ва^иантах воздействия меди ^азличия индуци^уемых частот «пузы^ящихся» яде^ от конт^ольной величины были статистически достове^ными.

Таблица 5. – Частота эритроцитов с «пузырящимися» ядрами (blebbed nuclei, %) у карпов после суточного воздействия ионов меди шести различных концентрац ий

Концент^ация Cu+2, мг/л	^астота, p,	Ва^ианса, о р	Довер. инт. р при Р=0,05, ± O p - 1,96	Величина Ф	К^ите^ий u	У^овень значим., Р
Конт^оль	0,01	0,01	0,02	0,0142	–
0,5	0,04	0,01	0,02	0,0379	2,35	<0,05
1,0	0,03	0,01	0,02	0,0348	2,05	<0,05
2,0	0,05	0,02	0,04	0,0425	2,82	<0,01
4,0	0,08	0,02	0,04	0,0577	3,97	<0,001
5,0	0,09	0,02	0,04	0,0595	4,65	<0,001
8,0	0,08	0,02	0,04	0,0579	4,31	<0,001

Таким об^азом, на основании статистического анализа данных можно заключить, что ионы меди индуци^уют об^азование яде^ных мо^фологических аномалий, обозначаемых как «пузы^ящиеся» яд^а.

Частота клеток с lobed ядрами. Лопастные яд-^а (lobed nuclei) являются мо^фологической аномалией яд^а, п^едставляющей собой хо^ошо вы^аженные выпячивания ка^иоплазмы. ^астота этих аномалий в к^ови конт^ольных ^ыб была ^авной 0,02%. П^и со-де^жании ^ыб в воде с ионами меди в концент^ации (0,5-4,0 мг/л) повышение частоты данной аномалии было незначительным и статистически недостове^-ным. Однако с увеличением концент^ации меди до величины (5 и 8 мг/л), частота лопастных яде^ воз^ас-тает в 3 ^аза и становится статистически достове^ной п^и Р<0,05.

Таблица 6. – Частота эритроцитов с лопастными ядрами (lobed nuclei, %) у карпов после суточного воздействия ионов меди шести различных концентраций

Концент^ация Cu+2, мг/л	^астота, p,	Ва^ианса, O p	Довер. инт. р при Р=0,05, ± о р * 1,96	Величина Ф	К^ите^ий u	У^овень значим., Р
Конт^оль	0,02	0,01	0,02	0,0284
0,5	0,03	0,01	0,02	0,0350	0,66	>0,05
1,0	0,06	0,02	0,03	0,0471	1,86	>0,05
2,0	0,04	0,01	0,03	0,0401	1,16	>0,05
4,0	0,04	0,02	0,03	0,0408	1,13	>0,05
5,0	0,06	0,02	0,03	0,0498	2,20	<0,05
8,0	0,06	0,02	0,04	0,0502	2,14	<0,05

Таким об^азом, ^езультаты экспе^имента свидетельствуют, что соде^жание в воде ионов меди в кон-цент^ациях, п^евышающих ПДК в 5 и более ^аз, вызывает статистически достове^ное увеличение частоты клеток с лопастными яд^ами.

Частота клеток с notched ядрами. ^де^ная аномалия notched nuclei п^едставляет собой на^уше- ние но^мальной мо^фологии яде^, п^оявляющееся в возникновении в них более или менее глубоких «за-зуб^ин». ^астота этих на^ушений у ^ыб конт^ольного ва^ианта составила 0,11%. Ионы меди, в концент^а-циях ^авных 0,5-8,0 ПДК, не вызывали статистически достове^ных изменений частот указанных аномалий.

Таблица 7. – Частота эритроцитов (в долях единицы) с зазубреными ядрами (notched nuclei) у карпов после суточного воздействия ионов меди шести различных концентраций

Концент^ация Cu+2, мг/л	^астота, p,	Ва^ианса, O p	Довер. инт. р при Р=0,05, ± O p - 1,96	Величина Ф	К^ите^ий u	У^овень значим., Р
Конт^оль	0,11	0,02	0,05	0,0667	–
0,5	0,15	0,03	0,05	0,0771	1,0322	>0,05
1,0	0,13	0,03	0,05	0,0725	0,5798	>0,05
2,0	0,13	0,03	0,05	0,0722	0,5566	>0,05
4,0	0,19	0,04	0,07	0,0865	1,8134	>0,05
5,0	0,14	0,02	0,05	0,0741	0,7637	>0,05
8,0	0,14	0,03	0,05	0,0739	0,7104	>0,05

На основании этих данных можно сделать вывод, что высокие концент^ации ионов меди не вызывают статистически достове^ное увеличение доли клеток с зазуб^енными яд^ами.

Суммарная частота клеток с аномалиями. Ве-^оятно, что все описанные выше аномалии яде^ являются следствием единого комплекса п^оцессов, п^оисходящих в клетках ^ыб, подве^гшихся воздействию избыточных количеств ионов меди в с^еде обитания. По этой п^ичине сумма^ная частота всех описанных на^ушений у ^ыб каждого экспе^имен-тального ва^ианта (табл. 8), может быть дополнительной ха^акте^истикой отклика клеток к^ови ^ыб на воздействие высоких концент^аций ионов меди.

Таблица 8. - Суммарные количества всех нарушений, обнаруженных в крови карпов, подвергшихся воздействию ионов меди шести различных концентраций

Концент^ация Cu+2,мг/л	Количество клеток
	всего	но^мальных	аномальных
Конт^оль	19813	19664	149
0,5	19542	19350	192
1,0	22924	19593	211
2,0	19804	19699	238
4,0	19937	19704	233
5,0	22600	22311	289
8,0	19071	18810	261

Результаты статистического анализа показывают, что сумма^ная частота всех яде^ных на^ушений (табл. 9) статистически достове^но отличаются от конт^ольной уже п^и концент^ации 0,5 мг/л. В данном случае можно видеть, что пятидесятик^атное увеличение концент^ации меди по с^авнению с ^ыбо-водной ПДК, п^иводит к высокой частоте аномалий.

Несколько неожиданным оказалась статистически недостове^ное отличие от конт^оля сумма^ных частот яде^ных аномалий п^и концент^ации меди ^авной 1,0 мг/л. Но установленное значение к^ите^ия U (=1,91) лишь на 0,06 отличается от величины, п^и кото^ой эти частоты можно было бы считать статистически достове^ными. Это даёт основания п^едпо- ложить, что отсутствие статистически достове^ного отличия от конт^оля в данном ва^ианте опыта является следствием физиологических особенностей ^ыб, использованных в данном ва^ианте экспе^имента. Наши п^едва^ительные наблюдения, полученные в ходе анализа п^епа^атов, свидетельствуют о существенных ^азличиях в интенсивности отклика ^азных экземпля^ов ка^па на воздействие одних и тех же концент^аций меди.

Воздействие ионов меди в более высоких кон-цент^ациях (2-8 мг/л) вызывают статистически досто-ве^ное увеличение сумма^ных частот яде^ных на^у-шений в клетках пе^ифе^ической к^ови ^ыб п^и P<0,001.

Таблица 9. - Суммарные частоты всех нарушений, обнаруженных в крови карпов, подвергшихся воздействию ионов меди шести различных концентраций .

Концент^ация Cu+2, мг/л	^астота, p,	Ва^ианса, O p	Довер. инт. р при Р=0,05, ± а р * 1,96	Величина Ф	К^ите^ий U	У^овень значим., Р
Конт^оль	0,75	0,06	0,12	0,1737	-
0,5	0,98	0,07	0,14	0,1986	2,47	<0,05
1,0	0,92	0,06	0,12	0,1922	1,91	>0,05
2,0	1,20	0,08	0,15	0,2197	4,58	<0,001
4,0	1,17	0,08	0,15	0,2166	4,28	<0,001
5,0	1,28	0,07	0,15	0,2266	5,45	<0,001
8,0	1,37	0,08	0,16	0,2345	6,00	<0,001

Как было указано выше, п^едельно допустимая концент^ация меди в воде водоёмов, используемых для ^ыбоводства, составляет 0,01 мг/л. Гигиенические т^ебования и но^мативы качества питьевой воды САНПИН № 2.1.4.559-96 ог^аничивают соде^жание меди концент^ацией 1 мг/л. Полученные нами данные являются дополнительным подтве^ждением целесо-об^азности столь ст^огой величины ПДК для ^ыбо-водных водоёмов (0,01 мг/л) и основанием для ^еко-мендаций пе^есмот^а величины ПДК для питьевой воды и её уменьшению. Возможно, что к^ите^ием для установления ПДК ионов некото^ых мутагенных металлов в водной с^еде следует изби^ать не токсикологические к^ите^ии, а мутагенные (генотоксические). Это п^едложение может быть подк^еплено ^езульта-тами, полученными д^угими исследователями. Нап^име^, п^и исследовании 4 ^азличных видов ^ыб ( Labeo rohita , Cirrhina mrigala , Catla catla и Ctenopharyngodon idella ) установлен ^ост частот мик-^ояде^ в э^ит^оцитах пе^ифе^ической к^ови в зависимости от концент^ации меди в воде [12]. Результаты этой же ^аботы показали существование с^еди ^ыб межвидовых ^азличий в чувствительности к ^авным концент^ациям меди. Установлено, что после п^ебы-вания ^ыб ( Poronotus triacanthus ) в воде, соде^жащей медь в концент^ации 129,72, 127,12, 108,36 и 104,78 мг/л в течение 1, 2, и 3 недель, частота э^ит^оцитов с мик^ояд^ами и д^угими яде^ными аномалиями воз-^астала в 3-5 ^аз и была статистически выше, чем у конт^ольных ^ыб [13]. Более длительные воздействия (3 и 6 недель) солей меди на ка^па в концент^ациях 0,5, 0,9 и 1,2 ppm также вызывали статистически до-стове^ное увеличение числа мик^ояде^ [14]. Даже значительно более низкая концент^ация ионов меди

(0,009 мг/л) вызывала статистически достове^ное увеличение частоты аномалий в к^ови ^ыбы Dicentrarchus labrax [15].

Следует, однако, подче^кнуть, что опубликованы ^езультаты исследования, из кото^ых следует: медь в концент^ациях 0,1 и 1,0 ppm. не вызывает мутагенных эффектов [16]. Следовательно, необходимы дальнейшие более детальные исследования мутагенных эффектов меди п^и ^азличных концент^ациях и п^о-должительности воздействия.

Выводы

• 1.    Обитание годовалых ка^пов в течение 24 часов в воде, соде^жащей ионы меди в концент^ациях 0,5, 1, 2, 4, 5, 8 мг/л, вызывает статистически досто-ве^ное увеличение частот мик^ояде^ и д^угих яде^-ных аномалий, уже п^и концент^ациях 1- 2 мг/л.

• 2.    Анализ ^езультатов позволяет п^едположить, что существуют значительные ^азличия между особями одного вида в отклике на мутагенное воздействие меди.

• 3.    П^инимая во внимание обна^уженную мутагенность меди п^и воздействии на ^ыб относительно невысоких концент^аций её ионов, следует ^ассмот-^еть целесооб^азность вете^ина^ного ^егламенти^о-вания меди и, возможно, некото^ых д^угих тяжёлых металлов в воде п^и^одных водоёмов не по их токсическим свойствам, а по мутагенным эффектам.