Использование цитохимических показателей в оценке эффективности криопротекторов

Материалы и методы . Для исследований использовали пробы венозной крови, полученной от 12 доноров компонентов крови. Медиана возраста составила 37 лет (от 33 до 47). В экспериментах применяли 5 криопротекторов: 15 % раствор гексаметиленбистетраоксиэтил-мочевины (ГМБТОЭМ), 3,3 % раствор глицерина тромбокриодмац (5 % диметилацетамид — ДМАЦ + 5 % глюкоза), 10 % раствор диметилсульфоксида (ДМСО), комбинированный раствор — (6 % диметилацетамид — ДМАЦ + 6 % гидроксиэтилкрахмал — ГЭК). Кровь донора разделили на 6 частей. В 5 пробирках опытные пробы с различными криопротекторами, 6 пробирка — аутоконтроль. Кровь в количестве 4 мл смешивали в пробирке с 0,25мл криоконсерванта. Выдерживали 5 минут, делали по 3

мазка, высушивали на воздухе при комнатной температуре. Выявление щелочной фосфатазы проводили методом азосочетания с помощью набора для цитохимического исследования производства НПФ «Абрис+». Активность фермента выражали в виде СЦК по Kaplow. Морфометрическую оценку количества клеток со специфической реакцией на ЩФ выполняли с помощью светового микроскопа Olympus System Microcope CX41 с окуляром х10, при объективе х100, используя принцип Астальди, основанный на определении различной степени интенсивности специфической окраски. В зависимости от нее выделяли пробы с отрицательной реакцией (–), слабо положительной (+), положительной (++) и резко положительной (+++). СЦК выражали в условных единицах.

Результаты. Индивидуальный подбор криопротектора проводили путем сравнительных определений СЦК исследуемых и контрольных проб. При этом о возможности применения криоконсерванта и его пригодности к использованию судили в случаях схожих значений СЦК опытной и контрольной проб. При значении исследуемой пробы с гемоконсервантом, отличающемся от контрольной, судили о возможном негативном действии криоконсерванта на клетку и о его непригодности. Для иллюстрации результатов индивидуального подбора криоконсерванта приводим 2 примера. При выявлении у донора СЦК ЛЩФ в пробах с 15 % ГМБТОЭМ равен 1,6, с 3,3 % глицерином — 1,5 с тромбокриодмац — 1,5, с ДМСО — 1,7, с комбинированным препаратом — 1,5, СЦК контрольной пробы составил 1,5. Можно предположить что оптимальными криопротекторами могут быть: 3,3 % глицерин, тромбокриодмац и комбинированный препарат. СЦК ЛЩФ донора в пробах с 15 % ГМБТОЭМ равен 1,6, с 3,3 % глицерином — 1,5, с тромбокриодмац — 1,3 с ДМСО — 1,5, с комбинированнмм препаратом — 1,3. СЦК контрольной пробы составил 1,3. Анализируя полученные данные, наиболее пригодными для использования у этого донора можно считать тромбокриодмац и комбинированный препарат. На данный способ

ВЕСТНИК ГЕМАТОЛОГИИ, том XV, № 3, 2019

получен патент на изобретение № 2676674 от 23.01.2018 г.

Выводы. Определение СЦК ЩФ при индивидуальном подборе криоконсерванта может позволить снизить негативное воздействие хладоограждающего препарата на клетки.