Использование Immunocomb Biogal для экспресс-диагностики токсоплазмоза кошек

Токсоплазмоз домашних плотоядных (кошек и собак) - широко распространенное инвазионное заболевание. У животных чаще протекает хронически бессимптомно или латентно, реже остро и представляет серьезную угрозу для здоровья человека [1,3,4]. Широкое разнообразие форм клинического проявления токсоплазмоза затрудняет его дифференцировку от других заболеваний. Постановка окончательного диагноза требует обязательного использования лабораторных методов [4].

Кошке среди других представителей семейства кошачьих принадлежит основная роль в распространении этой инвазии [2,4,5]. Серологический скрининг поголовья домашних кошек и собак в Казани выявил 15,8% серопозитивных, Равилов Р.Х. [4] указывает, что положительно реагируют 34,9% кошек. По данным сероэпизоотологического исследования в Перми установлено 35,1% положительно реагирующих на токсоплазмоз собак (Н.Н.Катаева, 2008). В Вологде - 32%, в Москве по результатам РФА-33,8% и РСК-23,4%, при копрологической проверке выявлено 7,3% кошек, выделяющих ооцисты токсоплазм (С.Н.Олейников, 2004).

В Воронеже и Воронежской области это заболевание у животных изучено недостаточно. Имеются отдельные публикации в этом направлении. Так С.П.Гапонов, И.С.Меняйлова (2011) указывают на высокую зараженность кошек токсоплазмозом в осенне-зимний период (67,88%). Аналогичные данные получила И.С.Волгина [2], которая методом ИФА установила 67,5% больных животных [2].

Рассматривая симптоматику токсоплазмоза у кошек необходимо отметить её разнообразие: общее истощение, истечения из носа и глаз, слабость, депрессия, лихорадка, диарея, различные нервные расстройства, нарушение репродуктивной функции, патологию органов зрения [1,3].

Для быстрой постановки диагноза, формирования стратегии этиотропной терапии, оценки эффективности лечения, а также профилактики заболевания применяют разные лабораторные методы. В настоящее время не существует лабораторного метода, позволяющего избежать как ложноположительных, так и ложноотрицательных результатов, кроме того постановка целого ряда методов требует продолжительного времени. При диагностике токсоплазмоза необходима быстрая комплексная лабораторная диагностика (РНИФ, ПЦР, ИХА, выявление титров антител к антигенам возбудителя в ИФА и РСК), позволяющая выявить возбудителя и определить стадию заболевания, а также обосновать необходимость назначения специфических средств.[1,3,5]

Материалы и методы исследований. Исследование на токсоплазмоз кошек разных пород, пола и возраста, содержащихся как в домашних условиях, так и бездомных проводили на базе ветеринарных клиник разных административных районов Воронежа, куда поступали также животные из сельских населенных пунктов, прилегающих к городу районов Воронежской области. Работа ведется с сентября 2013г совместно с ГУ Воронежская областная ветеринарная лаборатория. Для исследований у кошек брали кровь из вены передней конечности по 1,5-2 мл в вакуумные пробирки, полученную сыворотку исследовали параллельно методами ИФА( Immunocomb Biogal) и РСК. Фекалии исследовали методом Дарлинга на наличие ооцист токсоплазм. Всего было обследовано 80 кошек- 60 самок и 20 самцов в возрасте от 1,5 месяцев до 8 лет.

Иммуноферментный анализ выполняли с помощью бесприборной тест системы Immunocomb Biogal- Израиль для определения иммуноглобулинов класса G к Toxoplasma gondii, согласно инструкции. Для оценки количества антител использовали прибор CombScale, имеющийся в наборе. Результат регистрировали визуально по интенсивности окрашивания цветной метки (от S0 до S6). Положительными считали образцы, интенсивность окрашивания которых отличалась от контрольной точки(S3- точка положительного контроля, которая должна дать четко выраженный пурпурно-серый цвет). Это тот же самый тон, что дает положительный результат при титре антител к Toxoplasma Gondii 1:32.

Другой способ чтения результатов - с помощью прибора CombScan с использованием компьютера и TWAIN совместимого сканера, имеющегося в комплекте. Гребень помещается в сканер, программа считывает цветовой результат и переводит в числовое значение. CombScan позволяет также сохранять полученные данные.

Параллельно эти же пробы сывороток исследовали в реакции связывания комплимента с помощью набора диагностикумов (НПФ «Биоцентр», Омск). Результаты реакции считывали визуально, оценивали в крестах или по степени задержки гемолиза эритроцитов. Согласно «Методическим указаниям по лабораторной диагностике токсоплазмоза животных» степень задержки гемолиза, выраженная крестами, соответствует следующим процентам гемолиза эритроцитов: от 0 до 10% (++++), от 10 до 40% (+++), от 40 до 70% (++), от 70 до 90% (+), от 90 до 100% (-). Результат считали положительными при задержке гемолиза эритроцитов от (+++) в разведении 1:5.

Результаты исследований и их обсуждение. В результате диагностики методом ИФА с помощью иммуноферментной тест системы Immunocomb Biogal нами было установлено, что 20 из 80 обследованных кошек (25,0%) имели значительный уровень специфических антител. Эту группу составляли животные с различными клиническими признаками (коньюнктивиты, энтериты, риниты, уретриты, маститы, нарушение репродуктивной функции) (рис.1,2,3,4). У четырнадцати кошек (17,5%) антитела были в диагностических титрах, 37,5% кошек, исследованных с помощью Immunocomb

Biogal имели положительную реакцию. При использовании метода РСК с помощью набора диагностикумов (НПФ «Биоцентр») в РСК реагировало девять из обследованных кошек (11,25%). При копрологическом исследовании ни в одном случае ооцист токсоплазм обнаружено не было.

Рис.1 - Врожденное уродство плода от кошки, больной токсоплазмозом.

Рис.2 - Экзофтальм и частичное отсутствие черепной коробки в лобной части плода от кошки, больной токсоплазмозом.

Рис.3 - Патология задних конечностей у кошки при токсоплазмозе.

Заключение. Наши исследования показали, что тест-система Immunocomb Biogal (ИФА) позволяет поставить диагноз в течение 20 минут, является доступной,

ЛИТЕРАТУРА: 1. Вершинин, И.И. Токсоплазмоз кошек и собак / И.И. Вершинин, Н.В. Телятникова, В.И. Петренко // Ветеринарная клиника. 2003.- № 11.- С.12. 2 . Волгина, И.С.

компактной, высокочувствительной, специфичной, не требующей специального оборудования, высокой трудоемкости и специальных навыков лаборанта.

Проблема токсоплазмоза в Воронеже / И.С.Волгина//Вестник Мордовского университета. 2009.-№1.- 79-80с. 3 . Лобзин, Ю.В. Хронический токсоплазмоз: рациональная терапия / Ю.В. Лобзин // Российские медицинские вести. Научно-практический журнал для клиницистов. 1997. - N 2.- т. 2. - 67-69с. 4. Равилов Р.Х. Токсоплазмоз домашних плотоядных / Р.Х. Равилов, В.В.Герасимов, М.Н.Воробьева.- Казань: ФГОУ «КГАВМ им. Н.Э.Баумана», 2008.- 98с.      5.

Beazley, D.M. Toxoplasmosis / D.M.Beazley, R.S. Egerman // Semin. Perinatol. 1998. -Vol. 22, № 4. -P. 332-338.

ИСПОЛЬЗОВАНИЕ IMMUNOCOMB BIOGAL ДЛЯ ЭКСПРЕСС-ДИАГНОСТИКИ ТОКСОПЛАЗМОЗА КОШЕК

Беспалова Н.С., Катков С.С.

Резюме

В сравнительном аспекте определена диагностическая ценность новой иммуноферментной тест системы Imunocomb Biogal для диагностики токсоплазмоза кошек. Изучен уровень зараженности, степень распространения и клиническое проявление заболевания в Воронеже и на сопредельных территориях Воронежской области.

USE OF IMMUNOCOMB BIOGAL SYSTEM FOR RESEARCH HOUSE CARNIVOROUS ON TOXOPLASMOSIS

Bespalova N.S., Katkov S.S.