Использование метода мультиплексной ПЦР в реальном времени для выявления и идентификации патогенов в гемокультурах у педиатрических пациентов



Киселева Е. Е.1,Чеботкевич В. Н.1, Мартенс Э. А.2, Бессмельцев С. С. 1

• ¹    Федеральное государственное бюджетное учреждение «Российский научно-исследовательский институт гематологии и трансфузиологии Федерального медико-биологического агентства», г. Санкт-Петербург

• ²    Федеральное государственное бюджетное учреждение «Детский научно-клинический центр инфекционных болезней Федерального медико-биологического агентства», г. Санкт-Петербург

ИСПОЛЬЗОВАНИЕ МЕТОДА МУЛЬТИПЛЕКСНОЙ ПЦР В РЕАЛЬНОМ ВРЕМЕНИ ДЛЯ ВЫЯВЛЕНИЯ И ИДЕНТИФИКАЦИИ ПАТОГЕНОВ В ГЕМОКУЛЬТУРАХ У ПЕДИАТРИЧЕСКИХ ПАЦИЕНТОВ

Введение . Инфекции кровеносного русла являются тяжелыми осложнениями у взрослых пациентов и детей.Они требуют быстрой диагностики и адекватной терапии.Внедрение автоматических культиваторов для исследования гемокультур позволило значительно сократить время получения результатов посева. Однако длительность проведения идентификации выявленных микроорганизмов существенно удлиняет время проведения анализа. Поэтому крайне актуальной является разработка ускоренных методов диагностики инфекций.В последние годы активно идет разработка молекулярных методов ускоренного анализа гемокультур.

Цель. Р азработка ускоренного метода идентификации микроорганизмов в гемокультурах у детей с генерализованными инфекциями с помощью ПЦР в реальном времени (ПЦР-РВ).

Материалы и методы: Всего было исследовано 72 образца крови, полученных от 62 педиатрических пациентов в возрасте от 3 месяцев до 16 лет. Идентификацию выделенных культур проводили с помощью ПЦР-РВ, а также с использованием классических культуральных микробиологических методов.

Результаты. Исходя из частоты выявления и клинической значимости патогенов,выделя-емых от больных,была сформирована панель тест-систем для их идентификации с помощью ПЦР-РВ. Показано, что чувствительность разработанного метода идентификации бактерий и микромицетов с помощью ПЦР-РВ по сравнению с микробиологическим методом составила 86,1 %, специфичность — 100 %. Установлено значительное сокращение времени идентификации возбудителей (с 48 часов до 5–7 часов).

Заключение. Разработанный метод идентификации микроорганизмов в крови с использованием ПЦР-РВ показал свою эффективность, клиническую значимость и возможность использования для педиатрических пациентов. Его применение значительно сокращает сроки получения результатов и, таким образом, позволяет начать своевременную этиотропную терапию.