Испытание иммунологической эффективности серий вакцины против инфекционного кератоконъюнктивита крупного рогатого скота, изготовленных с использованием биомасс, полученных на различных питательных средах

Массовое поражение глаз крупного рогатого скота наносит огромный экономический ущерб развитию животноводства, вызывая значительные потери как в молочной, так и в мясной промышленности вследствие снижения удоев, уменьшения прироста массы тела животных, высокой стоимости лечения заболевания (1,2). Для борьбы с этой инфекцией широкое применение получила «Ассоциированная вакцина против ИКК крупного рогатого скота на основе антигенов бактерий Moraxella bovis и герпесвируса типа 1 инактивированная гидроокисьалюминиевая», разработанная в ФГБУ «ФЦТРБ-ВНИВИ» (ТУ 9384-00500492374-2007).

При существующей технологии изготовления биопрепарата культивирование вакцинного штамма бактерий Moraxella bovis проводится поверхностным методом на плотной питательной среде. Однако выращивание микроорганизмов на плотных средах по сравнению с культивированием в жидкой среде имеет определенные недостатки. В настоящее время для выращивания микроорганизмов наиболее часто применяется глубинное выращивание в жидких питательных средах с использованием биореакторов. В предыдущих исследованиях провели сравнительную оценку антигенной активности вакцин, изготовленных на плотной и жидкой питательных средах в лабораторных условиях [3].

Целью дальнейшей работы явилось изучение иммунологической эффективности серий вакцин, изготовленных с использованием биомасс, полученных на различных питательных средах.

Материал и методы. Работа выполнялась в лаборатории по изучению болезней молодняка ФГБУ «ФЦТРБ-ВНИВИ».

Технология изготовления ассоциированных инактивированных вакцин включает получение и инактивацию биомассы с максимально возможным сохранением антигенных и иммуногенных свойств отобранных штаммов[4]. Для изготовления вакцины против инфекционного кератоконъюнктивита крупного рогатого скота использовали запатентованный штамм «Г97-ВНИВИ» бактерий Moraxella bovis (Патент РФ на изобретение №2415353 с приоритетом от 15.09.1998г) и штамм бактерий Moraxella bovis – «ШЗ-01».

Для изучения эффективности вакцины в производственных условиях изготовили серии «Ассоциированной вакцины против инфекционного кератоконъюнктивита крупного рогатого скота на основе антигенов и герпесвируса типа I», используя биомассу бактерий, полученную на плотной и жидкой питательных средах. Жидкую питательную среду для культивирования бактерий Moraxella bovis глубинно-суспензионным способом готовили согласно разработанной рецептуре питательной среды с использованием в качестве основы ферментативного гидролизата маточно-плацентарно-эмбриональной массы коров (ФГМПЭМ)[5,6].

Первоначально изучение иммуногенной активности изготовленных серий вакцин проводили на белых мышах. В опыте были сформированы 3 группы мышей: две опытные и одна контрольная. Мышей I группы иммунизировали вакциной, изготовленной из биомассы бактерий, полученной на плотной питательной среде, II группы – вакциной, изготовленной из бакмассы, полученной в питательной среде на основе ФГМПЭМ. Третья группа животных служила контролем. Двукратную подкожную вакцинацию белых мышей проводили в дозе 0,5 см³ с интервалом 14 суток. Заражение лабораторных животных осуществляли внутрибрюшинно живыми культурами бактерий Moraxella bovis (через 14 дней после каждой вакцинации) в дозе 500 млн. м.к. на одно животное.

Эффективность применения препарата в хозяйстве определяли на основании показателей заболеваемости до и после применения вакцины, а также по уровню специфических антител в сыворотке крови вакцинированных животных через 7 и 14 суток после первой и второй вакцинаций. С этой целью в хозяйстве были отобраны 3 группы телят по 60 голов в каждой. Все телята были одной породы, клинически здоровые. Животные находились в одном помещении при одинаковых условиях содержания и кормления. Животных первой группы иммунизировали ассоциированной вакциной против инфекционного кератоконъюнктивита крупного рогатого скота, изготовленной из биомассы бактерий Moraxella bovis, полученной на плотной питательной среде; животных второй группы иммунизировали вакциной, изготовленной на основе биомассы бактерий Moraxella bovis, полученной в жидкой питательной среде. Третья группа животных служила контролем. В обеих сериях вакцины концентрация бактерий Moraxella bovis составляла 10 млрд. м.к. в 1 см3. От животных через 7, 14 суток после первой иммунизации и в те же сроки после второй иммунизации отбирали кровь для определения титров специфических антител к бактериям Moraxella bovis и герпесвирусу типа I. Определение титров антител к антигенам Moraxella bovis в пробах сыворотки проводили в лаборатории, используя «Набор препаратов для выявления антител к бактериям Moraxella bovis методом иммуноферментного анализа» согласно инструкции по его применению, к герпесвирусу типа I в реакции нейтрализации.

Результаты исследований.

Результаты исследований приведены в таблице 1.

Результаты исследования свидетельствуют о том, что вакцинированные мыши обеих групп оказались устойчивыми к контрольному заражению. Защитный эффект вакцины, изготовленной различными способами не различался и составил 80%.

Положительные результаты изучения иммунологической активности серий вакцины против ИКК на лабораторных животных явились основанием для испытания и на крупном рогатом скоте

Таблица 1 - Иммунологическая активность вакцин на белых мышах

Группа мышей

Результаты заражения на 14 сутки после первой вакцинации

Результаты заражения на 14 сутки после второй вакцинации

	Заражено, гол.	Пало, гол.	Смертность, %	Заражено, гол.	Пало, гол.	Смертность, %
I группа	20	4	20	10	2	20
II группа	20	4	20	10	2	20
контрольная	10	8	80	10	8	80

Изучение иммуногенной активности серий ассоциированной вакцины против инфекционного кератоконъюнктивита крупного рогатого скота проводили в ООО «Среднее Девятово» Лаишевского района РТ, стационарно неблагополучном по инфекционному кератоконъюнктивиту крупного рогатого скота. Анализ эпизоотической ситуации по ИКК КРС показал, что в ООО «Среднеедевятово» заболеваемость телят варьировала в пределах 25-30% из общего поголовья.

Результаты исследований сывороток

Анализ полученных результатов исследований позволяет констатировать, что изготовленные серии вакцины обладают достаточно высокой антигенной активностью: титры специфических антител через 2 недели после второй вакцинации в сыворотке крови животных составляли в ИФА к бактериям Moraxella bovis в I группе животных – 13,02±0,23 log 2 , во II группе – 13,12 ±0,14 log 2 ; в РН к герпесвирусу типа I в I группе животных – 7,80±0,31 log 2 , во II группе – 7,70±0,32 log 2 .

крови вакцинированных телят представлены в таблице 2.

Таблица 2– Уровень специфических антител в сыворотке крови вакцинированных телят к антигенам бактерий Moraxella bovis и герпесвируса типа I (М±m, n=10)

Сроки исследования	Титры антител к Moraxella bovis в ИФА,log 2 log 2		Титры антител к герпесвирусу в РН, log 2
	I группа животных	II группа животных	I группа животных	II группа животных
Через 7 суток после первой вакцинации	7,42±0,46	8,02±0,39	2,70±0,16	2,50±0,22
Через 14 суток после первой вакцинации	10,52±0,38	11,02±0,52	3,60±0,23	3,70±0,27
Через 7 суток после второй вакцинации	10,62±0,42	12,62±0,35	7,10±0,33	7,30±0,27
Через 14 суток после второй вакцинации	13,02±0,23	13,12±0,14	7,80±0,31	7,70±0,32

Клинико-эпизоотологическим исследованием вакцинированных животных установлено, что телята обеих вакцинированных групп оказались устойчивыми к естественному заражению возбудителем ИКК крупного рогатого скота. В то же время в контрольной (не вакцинированной) группе заболело 8 телят.

Следовательно, обе серии вакцины (полученные как на плотной питательной среде, так и в жидкой) надежно защищают телят от заражения возбудителем ИКК в условиях стационарного неблагополучия по данной инфекции хозяйства. В обеих группах вакцинированных телят больных инфекционным кератоконъюнктивитом в ходе эксперимента не выявлено, тогда как в контрольной не вакцинированной группе заболели 13,3% телят.

Заключение. Обобщенный анализ клинических, эпизоотологических и серологических исследований показал, что вакцина, изготовленная с использованием биомассы бактерий Moraxella bovis полученной при глубинном культивировании в питательной среде на основе ФГМПЭМ не уступает по эффективности вакцине, полученной из биомассы моракселл, выращенной на плотной питательной среде.

ЛИТЕРАТУРА: 1. Гаффаров, Х.З. Инфекционный кератоконнъюнктивит крупного рогатого скота в регионе Среднего Поволжья и Предуралья / Х.З. Гаффаров, Л.В. Валебная, Г.Н. Спиридонов // Актуальные проблемы болезней молодняка в современных условиях: материалы Междунар. науч.- практ. конференции. – Воронеж, 2002. – С. 188-191. 2 Иванов, A.B. Этиология и патогенез инфекционного кератоконъюнктивита крупного рогатого скота / А.В. Иванов, Х.З. Гаффаров, Г.Н. Спиридонов с соавт. // Ветеринарный врач. – Казань. – 2005. - №4. - С. 22-27. 3. Нургалиева А.Р. Оценка антигенной активности вакцины против инфекционного кератоконъюнктивита крупного рогатого скота, изготовленной с использованием различных питательных сред / А.Р. Нургалиева, Н.В. Саттарова // Ученые записки Казанской государственной академии ветеринарной медицины им. Н.Э. Баумана. – Казань, 2011. – Т.206. – С.165-169. 4. Нургалиев Ф.М. Разработка технологии изготовления ассоциированной вакцины против парвовирусной болезни, стрептококкоза и сальмонеллеза свиней / Нургалиев Ф.М., Гаффаров Х.З., Госманов Р.Г.// Ученые записки КГАВМ. – Казань, 2006. –Т.183. – С.171-176. 5. Нургалиева А.Р. Оптимизация состава питательной среды для культивирования бактерий Moraxella bovis / А.Р. Нургалиева // Ученые записки Казанской государственной академии ветеринарной медицины им. Н.Э. Баумана. – Казань, 2010. –Т.200. – С.123-125. 6. Нургалиева А.Р. Получение биомассы бактерий Moraxella bovis в жидкой питательной среде / А.Р Нургалиева, Г.Н. Спиридонов, Х.Н. Макаев, Л.В. Валебная // Ветеринария и кормление. – 2010. - №6. – С.54.

ИСПЫТАНИЕ ИММУНОЛОГИЧЕСКОЙ ЭФФЕКТИВНОСТИ СЕРИЙ ВАКЦИНЫ ПРОТИВ ИНФЕКЦИОННОГО КЕРАТОКОНЪЮНКТИВИТА КРУПНОГО РОГАТОГО СКОТА, ИЗГОТОВЛЕННЫХ С ИСПОЛЬЗОВАНИЕМ БИОМАСС, ПОЛУЧЕННЫХ НА РАЗЛИЧНЫХ ПИТАТЕЛЬНЫХ СРЕДАХ

Нургалиева А.Р.

Резюме

Проведено испытание иммунологической эффективности серий вакцины против инфекционного кератоконъюнктивита крупного рогатого скота, изготовленных с использованием биомасс, полученных на различных питательных средах. Вакцина, изготовленная с использованием биомассы бактерий Moraxella bovis , полученной при глубинном культивировании в питательной среде на основе ФГМПЭМ не уступает по эффективности вакцине, полученной из биомассы моракселл, выращенной на плотной питательной среде.

A TEST SERIES OF IMMUNOLOGICAL EFFECTIVENESS OF VACCINES AGAINST INFECTIOUS BOVINE KERATOCONJUNCTIVITIS PRODUCED USING BIOMASS FROM VARIOUS NUTRIENT MEDIA

Nurgalieva A.R.