Исследование антигенотоксического действия криофракций селезенки и плаценты крупного рогатого скота в условиях действия циклофосфамида
Автор: Востроилова Г.А., Шабанов Д.И., Корчагина А.А., Хохлова Н.А., Некрасов А.В.
Журнал: Сельскохозяйственная биология @agrobiology
Рубрика: Тканевые препараты
Статья в выпуске: 2 т.61, 2026 года.
Бесплатный доступ
Сохранение стабильности генома сельскохозяйственных животных связано с целостностью ДНК их клеток в условиях экологического неблагополучия. В настоящей работе было впервые установлено антигенотоксическое влияние гидрофильной криофракции селезенки крупного рогатого скота (ГКСК) в печени и костном мозге, а также антиапоптотическое действие ГКСК, липофильной криофракции селезенки крупного рогатого скота (ЛКСК) и равной смеси липофильной криофракции селезенки и плаценты крупного рогатого скота (ЛКСПК) в костном мозге мышей в условиях индуцированной циклофосфамидом (ЦФ) генотоксичности. Целью работы было определение влияния гидрофильной криофракции селезенки, липофильной криофракций селезенки и смеси липофильной криофракции селезенки и плаценты крупного рогатого скота на генотоксическое действие циклофосфамида у мышей. Исследование проводили во Всероссийском научно-исследовательском ветеринарном институте патологии, фармакологии и терапии (ФГБНУ ВНИВИПФиТ) в 2025 году. Использовали фармацевтические субстанции, содержащие ГКСК, ЛКСК и ЛКСПК (ФГБНУ ВНИВИПФиТ). Экспериментальным генотоксикантом служил Эндоксан® («Baxter Oncology GmbH», Германия), содержащий в качестве действующего вещества циклофосфамид моногидрат (ЦФ). Были сформированы 11 групп лабораторных беспородных мышей-самцов (Mus albus officinarum, n = 126) с массой тела 26,0±2,0 г. В I группе (негативный контроль) животные получали однократную внутримышечную и внутрибрюшинную инъекцию изотонического раствора хлорида натрия в объеме соответственно 0,1 и 0,5 мл (n = 6). Мыши во II, III и IV группах получали однократную внутримышечную инъекцию соответственно ГКСК, ЛКСК и ЛКСПК в дозе 0,5 мл/кг и объеме 0,1 мл (n = 12 в каждой группе). Животные в V группе выступали в качестве позитивного контроля, им однократно внутрибрюшинно вводили ЦФ в дозе 40 мг/кг и объеме 0,5 мл (n = 12). Животным в VI группе однократно внутримышечно вводили ГКСК в дозе 0,5 мл/кг и объеме 0,1 мл перед внутрибрюшинной инъекцией ЦФ в дозе 40 мг/кг и объеме 0,5 мл (n = 12). Мышам из VII и VIII групп однократно вводили соответственно ЛКСК и ЛКСПК перед введением ЦФ в дозах, аналогичных таковым в VI группе (n = 12). Животным из IX, X и XI групп трехкратно с интервалом 24 ч вводили соответственно ГКСК, ЛКСК и ЛКСПК в дозе 0,5 мл/кг и объеме 0,1 мл (n = 12 в каждой группе). Совместно с последней инъекцией исследуемой субстанции мыши однократно внутрибрюшинно получали ЦФ в дозе 40 мг/кг и объеме 0,5 мл. Животных выводили из эксперимента посредством передозировки углекислого газа в специальной камере через 6 и 24 ч после введения ЦФ. Из бедренных костей получали образцы костного мозга, также отбирали образцы печени. Ткани гомогенизировали и использовали для проведения щелочного электрофореза единичных клеток (метод ДНК-комет). Определяли содержание ДНК в «хвосте кометы» (TDNA, %) через 6 и 24 ч после инъекции ЦФ. С помощью коммерческого набора Annexin V-IF488/PI Cell Apoptosis Detection Kit («Servicebio», Китай) методом флуоресцентной микроскопии определяли долю апоптотических клеток в костном мозге через 24 ч после инъекции ЦФ. Результаты представляли в виде медианы и межквартильного интервала — Me (IQR). Однократное введение ГКСК снижало TDNA на 30,3 % до 18,7 (9,92) % (p < 0,05) и на 27,9 % до 28,5 (19,48) % (p < 0,05) в костном мозге через 6 и 24 ч после введения ЦФ относительно группы позитивного контроля — 26,8 (5,39) и 39,5 (7,11) %. Трехкратная инъекция ГКСК приводила к уменьшению TDNA на 57,3 % до 15,8 (20,29) % (p < 0,05) и 35,5 % до 35,4 (1,57) % (p < 0,05) в печени через 6 и 24 ч относительно группы позитивного контроля — соответственно 37,0 (5,28) и 55,0 (4,69) %. Курсовое введение ГКСК, ЛКСК, ЛКСПК перед ЦФ вызывало значимое снижение доли апоптотических клеток соответственно на 34,3; 45,7; 34,3 % (p < 0,05) относительно группы позитивного контроля — 17,5 (4,00) %. Полученные данные свидетельствуют об антигенотоксическом действии ГКСК и антиапоптотическом влиянии исследуемых субстанций в условиях индуцированной ЦФ цитотоксичности, которые, вероятно, проявляются благодаря антиоксидантному и иммуномодулирующему действию.
Крупный рогатый скот, криофракция селезенки, криофракция плаценты, циклофосфамид, метод ДНК-комет, повреждение ДНК, апоптоз, печень, костный мозг, лабораторные мыши
Короткий адрес: https://sciup.org/142247695
IDR: 142247695 | УДК: 619:615.36:575.224.46 | DOI: 10.15389/agrobiology.2026.2.371rus
Study of the antigenotoxic effect of the bovine cryofractions of spleen and placenta under the action of cyclophosphamide
Maintaining the stability of the genome of farm animals is associated with the integrity of their cell DNA under adverse environmental conditions. This work us the first to establish the antigenotoxic effect of hydrophilic cryofraction of bovine spleen (HCBS) in the liver and bone marrow, as well as the antiapoptotic effect of HCBS, lipophilic cryofraction of bovine spleen (LCBS) and an equal mixture of lipophilic cryofraction of bovine spleen and placenta (LCBSP) in the bone marrow of mice under conditions of cyclophosphamide (CP)-induced genotoxicity. The aim of the study was to determine the effect of hydrophilic cryofraction of bovine spleen, lipophilic cryofraction of bovine spleen and a mixture of lipophilic cryofraction of bovine spleen and placenta on the genotoxic effect of cyclophosphamide in mice. The study was conducted at the All-Russian Research Veterinary Institute of Pathology, Pharmacology and Therapy (FSBSI ARVRIPP&T) in 2025. Pharmaceutical substances containing HCBS, LCBS and LCBSP, obtained at FSBSI “ARVRIPP&T”, were used. The experimental genotoxicant was Endoxan® (Baxter Oncology GmbH, Germany), which contains cyclophosphamide monohydrate (CP) as the active ingredient. Eleven experimental groups of laboratory outbred mice — males (Mus albus officinarum, n = 126) with a body weight of 26.0±2.0 g were formed. In group I (negative control), animals received a single intramuscular and intraperitoneal injection of isotonic sodium chloride solution in a volume of 0.1 and 0.5 ml, respectively (n = 6). Mice of groups II, III and IV received HCBS, LCBS and LCBSP, respectively, once intramuscularly at a dose of 0.5 ml/kg. Animals in group V served as a positive control and were given a single intraperitoneal injection of CF at a dose of 40 mg/kg and a volume of 0.5 ml (n = 12). Animals in group VI were given a single intramuscular injection of HCBS at a dose of 0.5 ml/kg and a volume of 0.1 ml before an intraperitoneal injection of CP at a dose of 40 mg/kg and a volume of 0.5 ml (n = 12). Mice from groups VII and VIII were given a single injection of LCBS and LCBSP, respectively, before the administration of CF in doses similar to those in group VI (n = 12 in each group). Animals from groups IX, X, and XI were administered HCBS, LCBS and LCBSP three times at 24-hour intervals, respectively, at a dose of 0.5 ml/kg and a volume of 0.1 ml (n = 12 in each group). Along with the final injection of the test substance, mice received a single intraperitoneal injection of CF at a dose of 40 mg/kg and a volume of 0.5 ml. Animals were sacrificed by carbon dioxide overdose in a special chamber 6 and 24 hours after CF administration. Bone marrow samples were obtained from the femurs, and liver samples were also collected. The tissues were homogenized and used for single-cell alkaline electrophoresis (the comet assay). The DNA content in the comet tail (TDNA, %) was determined 6 and 24 h after CP injection. The proportion of apoptotic cells in the bone marrow was determined 24 h after CP injection using the commercial Annexin V-IF488/PI Cell Apoptosis Detection Kit (Servicebio, China) by fluorescence microscopy. The results of the studies were presented as median and interquartile range (Me(IQR)). A single administration of HCBS reduced TDNA by 30.3 — 18.7 (9.92) % (p < 0.05) and 27.9 % — 28.5 (19.48) %, (p < 0.05) in the bone marrow 6 and 24 hours after CP administration relative to the positive control group — 26.8 (5.39) and 39.5 (7.11) %, respectively. Three-fold injection of HCBS resulted in a decrease in TDNA by 57.3 — 15.8 (20.29) (p < 0.05) and 35.5 % 35.4 (1.57) % (p < 0.05) in the liver in 6 and 24 hours vs the positive control group — 37.0 (5.28) and 55.0 (4.69) %, respectively. A course of administration of HCBS, LCBS and LCBSP before CP caused a significant decrease in the proportion of apoptotic cells by 34.3; 45.7; 34.3 % (p < 0.05), respectively, to the positive control group — 17.5 (4.00) %. The obtained data indicate the antigenotoxic effect of HCBS and the antiapoptotic effect of the studied substances under conditions of CP-induced cytotoxicity, which are probably manifested due to the antioxidant and immunomodulatory effects.
