Исследование по разработке лекарственного средства с антиоксидантным действием

Куркин Владимир Александрович, доктор фармацевтических наук, профессор, заведующий кафедрой фармакогнозии с ботаникой и основами фитотерапии.

Мизина Прасковья Георгиевна, доктор фармацевтических наук, заведующая научно-организационным отделом и ученый секретарь ГНУ ВИЛАР Россельхозакадемии Климова Любовь Дмитриевна, кандидат фармацевтических наук, доцент кафедры фармацевтической технологии

Бер Ольга Владимировна, кандидат фармацевтических наук, старший преподаватель кафедры фармацевтической технологии.

Желонкин Николай Николаевич, кандидат фармацевтических наук, доцент кафедры фармацевтической технологии

Сохина Анна Аркадьевна, кандидат фармацевтических наук, старший преподаватель кафедры фармацевтической технологии myrtillus L., антоцианы, таблетка, сок, микрокри- антиоксидантными свойствами обладают лекарственные препараты, получаемые из растительного сырья, содержащего различные биофлавоноиды, в том числе антоцианозиды [3, 5, 9]. Доказано, что антиоксидантная активность антоцианов более выражена, чем у альфа-токо-феролов, аскорбиновой кислоты, β-каротина, и сравнима с синтетическими антиоксидантами – бутилгидроксианизолом и бутилгидрокситолуолом [6, 9]. Одним из ценных источников антоцианов являются плоды черники обыкновенной (Vaccinium myrtillus L.). В настоящее время на фармацевтическом рынке присутствует значительное количество биологически активных добавок на основе плодов черники, которые пользуются большой популярностью (более 50 наименований, лидеры продаж «Черника форте с витаминами и цинком», «Черника форте с лютеином» (ЗАО «Эвалар»)) [2, 4]. Однако ассортимент лекарственных средств, содержащих антоцианы плодов черники, представлен в основном импортными препаратами («Стрикс» (Дания, Ферросан, стоимость 350-450 руб.), «Вит-рум вижн форте» (США, Unipharm Inc., стоимость №30 – 350-500 руб., №60 – 550-700 руб.), «Миртилене форте» (Италия, S.I.F.I., стоимость 1100-1200 руб.)), хотя ареал черники в РФ достаточно обширен; из отечественных представлен только гомеопатический сироп «Миртикам» (ООО «Камелия НПП», стоимость 200-250 руб.) [4]. Следует отметить, что в настоящее время фармакопейным сырьем являются воздушносухие плоды черники обыкновенной [1], в то время как антоцианы являются очень лабильными соединениями и легко разрушаются под воздействием высоких температур, света и т.п. [7]. В Европейской Фармакопее имеются отдельные монографии на свежие плоды черники (источник антоцианов) и воздушно-сухие (источник дубильных веществ) [8]. В связи с этим более целесообразно использовать в качестве источника лекарственных средств свежие плоды черники.

Цель исследования: разработка лекарственного средства из свежих плодов черники обыкновенной в форме таблеток.

Объекты и методы исследования. В качестве объекта исследования использовали плоды черники обыкновенной, заготовленные на территории Пензенской области, Республики Марий Эл в 2012-2013 гг., свежезамороженные плоды черники (ЗАО «Хладокомбинат западный», Московская область, г. Одинцово, ТУ 9165-002-47569210-00). При получении таблеток в качестве первичной субстанции использовали сок плодов черники обыкновенной в связи с их высокой влажностью и водорастворимостью антоцианов. Выход сока составляет 80-85% от исходной массы плодов. Стабилизацию сока проводили путем добавления к 85 частям сока по массе 15 частей 95% спирта, в котором предварительно растворяли сорбиновую кислоту в количестве 0,1% от общей массы жидкости. Полученный сок упаривали в роторно-вакуумном испарителе при 60±2°С на водяной бане до 1/5-1/6 от первоначального объема, а затем продолжали упаривать на водяной бане до остаточной влажности 18-22%. В качестве вспомогательных веществ (ВВ) исследовали микрокристаллическую целлюлозу (МКЦ), лактозы моногидрат, аэросил.

В исследовании были рассмотрены следующие варианты технологии таблеток:

• -ичерез стадию влажного гранулирования продавливанием;

• -ичерез стадию гранулирования размолом увлажненной и высушенной массы.

Прессование проводили на кривошипной таблеточной машине (КТМ) салазочного типа.

Технология получения таблеток из упаренного сока черники (прессованием через стадию гранулирования продавливанием).

• 1.    Смешивание упаренного сока с лактозой в соотношении 1:5.

• 2.    Первичное гранулирование через перфорированную поверхность с диаметром отверстий 3 мм.

• 3.    Сушка гранул в сушильном шкафу при 40±2 °С в течение 24 ч до остаточной влажности 4-5%.

• 4.    Вторичное гранулирование через перфорированную поверхность с диаметром отверстий 1 мм.

• 5.    Прессование на КТМ по 0,5 г.

При смешении и высушивании упаренного сока и МКЦ в том же соотношении смесь получается неоднородной, несыпучей.

Технология получения таблеток из не-упаренного сока черники (прессованием через стадию гранулирования продавливанием).

• 1.    Смешивание сока с лактозой в соотношении 1:4.

• 2.    Добавление аэросила в количестве 1% от общей массы таблеточной смеси.

• 3. Первичное гранулирование через перфорированную поверхность с диаметром отверстий 3 мм.

• 4.    Сушка гранул в сушильном шкафу при 40±2 °С в течение 1,5 ч до остаточной влажности 4-5%.

• 5.    Вторичное гранулирование через перфорированную поверхность с диаметром отверстий 1 мм.

• 6.    Прессование на КТМ по 0,5 г.

Содержание антоцианов в таблетках из исходного сока - 0,32 мг в 1,0 г таблеточной массы (0,16 мг в одной таблетке). В таблетках из упаренного сока - 2,6 мг в 1,0 г таблеточной массы (1,3 мг в одной таблетке).

Технология таблеток из неупаренного сока черники (прессование через стадию гранулирования размолом увлажненной и высушенной массы).

• 1.    Смешивание сока с МКЦ в соотношении 4:1.

• 2.    Сушка в вакуум-сушильном шкафу при 40±1°С до остаточной влажности 4-5%.

• 3.    Добавление к полученной смеси 2% (от массы смеси) аэросила, измельчение и смешивание.

• 4.    Прессование на КТМ по 0,5 г.

Содержание антоцианов составляет

• 4,1 ±0,2 мг в одной таблетке. При использовании вместо МКЦ лактозы и последующем высушивании полученная смесь приобретает стекловидную форму. В связи с меньшими временными затратами, более экономным расходом электроэнергии по сравнению с первой схемой и достаточно высоким содержанием антоцианов нами была выбрана третья технологическая схема производства таблеток из сока плодов черники.

На следующем этапе с целью увеличения содержания антоцианов в таблетках изучали влияние степени предварительного сгущения сока на показатели качества таблеток. Для этого сок из плодов черники упаривали в роторно-вакуумном испарителе до 1/2 и 1/3 от первоначального объема и смешивали с микрокристаллической целлюлозой в соотношении 4:1. Полученные суспензии упаривали в вакуум-сушильном шкафу при остаточном давлении не более 4,9 кПа и температуре 40±2 °С в течение 24 ч. Полученную массу измельчали, добавляли 4% аэросила, перемешивали и подвергали прессованию на КТМ. У полученных таблеток определяли количественное содержание антоцианов, распадаемость, прочность на истирание (табл. 1). Контроль качества готовых таблеток проводили в соответствии с требованиями общей фармакопейной статьи «Таблетки» (ГФ СССР XI изд., вып. 2, с. 155-159) и ОФС 42-0003-04 «Растворение».

Для определения количественного содержания антоцианов в таблетках 0,1 г (точная навеска) растертых таблеток (не менее 20 штук) помещали в коническую колбу вместимостью 100 мл, добавляли 20 мл 95% спирта, содержащего 1% хлористоводородной кислоты, перемешивали при комнатной температуре 20-25 мин, фильтровали через бумажный фильтр марки «красная лента» в мерную колбу емкостью 100 мл. Операцию повторяли трижды, последний раз нагревали на водяной бане 15 мин. Объем раствора доводили до метки 95% спиртом, содержащим 1% НСl. Полученный раствор спектро-фотометрировали при длине волны 546 нм в кюветах с толщиной слоя 10 мм.

Таблица 1. Сравнительная характеристика свойств таблеток в зависимости от состава

Состав	Состав, г			Количественное содержание антоцианов, мг в одной таб. 0,3	Распадае-мость, мин	Прочность на истирание, %
	сок	МК Ц	аэросил
№ 1	20,0	5,0	0,05 (2%)	4,1±0,2	2,0±0,5	98,0±0,5
№ 2	20,0 (до ½V)	5,0	0,34 (4%)	18,0±0,2	1,5±0,3	99,5±0,4
№ 3	20,0 (до 1/3V)	5,0	0,60 (4%)	22,0±0,3	41,0±2,0	99,9±0,3

Таким образом, наиболее оптимальным вариантом оказалось предварительное упаривание сока под вакуумом до 1/2 от первоначального объема. Таблетки, полученные из предварительно упаренного до 1/3 от первоначального объема сока, из-за повышения концентрации связующих веществ не распадаются с течение установленного времени для таблеток, не покрытых оболочкой (15 мин). Средняя масса таблеток, полученных по оптимальной схеме, составила 0,32 г ± 4,0%, что находится в пределах установленных значений (±5% для таблеток массой 0,3 г и более). Только две таблетки имели отклонение свыше 5%, но не более 10%, что также допускается установленными требованиями.

Тест «Растворение» проводили на 6 таблетках оказавшегося наиболее оптимальным состава на аппарате «Вращающаяся корзинка». Количество вещества, перешедшего в раствор, определяли как среднее для 6 таблеток.

Испытуемый образец помещали в сетчатую корзинку с диаметром отверстий 0,25 мм. В качестве среды растворения использовали воду очищенную (500 мл). Скорость вращения корзинки – 100 об/мин. В процессе определения температуру поддерживали с помощью термостата в пределах 37±1ºС. Через 45 мин раствор фильтровали через фильтровальную бумагу марки «Синяя лента». К 5 мл полученного фильтрата добавляли 2 мл 95% спирта этилового, содержащего 1% кислоты хлористоводородной, и измеряли оптическую плотность раствора при длине волны 527 нм в кювете с толщиной слоя 10 мм. Раствор сравнения готовили путем добавления к 5 мл воды 2 мл спирта этилового, содержащего 1% кислоты хлористоводородной. Все исследуемые таблетки оптимального состава соответствовали требованиям. За 45 минут в раствор переходило более 75% содержащихся в них действующих веществ (табл. 2).

Таблица 2. Результаты анализа таблеток по показателю «Растворение»

№ п/п	1	2	3	4	5	6	Среднее значение, %
выход антоцианов за 45 минут, %	97,6	99,6	102,9	95,5	99,2	99,0	99,0±2,5

Результаты и их обсуждение. Нами была предложена схема технологического процесса производства таблеток на основе сока из плодов черники, которая предусматривает использование в качестве вспомогательных веществ МКЦ и аэросила и включает в себя предварительное упаривание полученного сока до 1/2 от первоначального объема. Согласно схеме предварительно готовят помещение и персонал. Помещение должно соответствовать классу чистоты С или D (подготовка первичной упаковки, проведение операций смешивания, участок таблетирования и др.). Для создания условий необходима предварительная очистка воздуха, помещений, технологического оборудования, одежды и т.д.

Для получения 30 таблеток осуществляют следующие операции. Стадия ТП-3 включает в себя получение упаренного сока в качестве промежуточного продукта. Упаривание производят в роторно-вакуумном испарителе при температуре 60±1 ºС до половины от исходного объема, т.е. 50,0 мл сока упаривают до 25,0 мл. Упаренный сок на стадии ТП-4 смешивают с 6,25 г микрокристаллической целлюлозы; высушивают суспензию в вакуум-сушильном шкафу при температуре 40±1ºС и остаточном давлении не более 4,9 кПа до остаточной влажности не более 5%.

Рис. 1. Технологическая схема получения таблеток

Полученную массу измельчают, добавля-   4.

ют 4% аэросила, перемешивают до однородности и подвергают прессованию по 0,3 г на кривошипной таблеточной машине (ТП-5). Качество таблеток контролируют по технологическим показателям (внешний вид, отклонение от средней массы, распадаемость, прочность на истирание, 5. тест «Растворение»), подвергают качественному и количественному анализу на содержание антоцианов (ТП-6).

Выводы:  разработана технологическая схема таблеток из сока плодов черники обыкно-   .

венной с использованием в качестве наполнителя микрокристаллической целлюлозы массой 0,32±4,0% г. и содержанием антоцианов 18,0±0,2 мг в одной таблетке.                                ^7.