Изучение антимикробной активности препаратов на основе доксициклина и флорфеникола

Известно, что с ростом количества антибактериальных препаратов одновременно увеличивается количество возбудителей, устойчивых к антибиотикам. Наиболее приемлемый и целесообразный метод, повышающий эффективность химиотерапии при бактериальных инфекциях и позволяющий замедлить развитие резистентности у микроорганизмов, — рациональное применение сочетаний антимикробных средств.

При использовании антибиотиков и других химиотерапевтических лекарственных средств на практике важно определять чувствительность к ним клинически значимых микроорганизмов и устанавливать возможность синергетического действия для комплексных антибактериальных препаратов.

Материалы и методы. Целью проведенных исследований было установление минимальной подавляющей концентрации (МПК) инъекционных антибиотических препаратов разных классов, произведенных ЗАО «Нита-Фарм» и применяемых для лечения заболеваний ЖКТ и дыхательной системы сельскохозяйственных животных.

Были изучены три препарата, представляющие 2 основных класса антибиотиков – тетрациклины и амфиниколы:

• •     «Доксилокс», содержащий 200 мг/мл доксициклина (класс

тетрациклинов) в качестве действующего вещества;

• •     «Флорокс», содержащий 300 мг/мл флорфеникола (класс

амфиниколов) в качестве действующего вещества;

• •     «Флоридокс» - комплексный препарат, содержащий 50 мг/мл

доксициклина и 100 мг/мл флорфеникола.

Испытания антимикробной активности препаратов изучали in vitro на 10 штаммах микроорганизмов: Escherichia coli ATCC 25922, Escherichia coli О 151 «Крым» 60888, Klebsiella pneumoniae 8172, Proteus mirabilis Сиднеев 46, Salmonella typhimurium 20, Pseudomonas aeruginosa ATCC 27853, Streptococcus pyogenes 163, Staphylococcus aureus ATCC 25923, Bacillus cereus 687, Clostridium novyi 198.

Работу проводили в ФКУЗ РосНИПЧИ «Микроб» Роспотребнадзора г. Саратова общепринятыми методами [1-3]. Для определения минимальной подавляющей концентрации использовали метод серийных разведений в жидкой питательной среде.

Для приготовления суспензий тест-штаммов использовали чистые суточные культуры микроорганизмов, выросшие на плотных питательных средах. Отбирали несколько однотипных, четко изолированных колоний с неселективных плотных питательных сред. Петлей переносили незначительное количество материала с верхушек колоний в пробирку со стерильным питательным бульоном, доводя плотность суспензии точно до 0,5 по стандарту Мак-Фарланда, что соответствует концентрации 1,5 х 108 КОЕ/мл.

Для приготовления рабочих разведений препаратов из основных растворов использовали стерильную дистиллированную воду.

Для инокуляции использовали суспензию микробных клеток, эквивалентную 0,5 по стандарту Мак-Фарланда, разведенную в 100 раз питательным бульоном - 106 КОЕ/мл.

Результаты учитывали визуально в проходящем свете по определению наличия роста культур тест-штаммов в опытных и контрольных пробирках. МПК определяли по наименьшей концентрации АБП, которая подавляла видимый рост микроорганизма.

Результаты исследований и обсуждение. Сравнительное изучение методом серийных разведений в жидкой питательной среде антимикробной активности монопрепаратов «Доксилокс», «Флорокс» и комплексного препарата «Флоридокс» к 10 штаммам микроорганизмов позволили установить минимальные подавляющие концентрации действующих веществ, входящих в состав исследованных препаратов. Полученные результаты определения МПК представлены в таблице. Значения концентраций действующих веществ в препарате «Флоридокс» обозначены в виде дроби, где числитель - концентрация доксициклина, а знаменатель - концентрация флорфеникола.

В результате изучения чувствительности тест-штаммов микроорганизмов к препарату «Доксилокс» была установлена достаточно высокая эффективность этого препарата как в отношении грамотрицательной, так и в отношении грамположительной микрофлоры.

Наибольшую чувствительность среди грамотрицательных штаммов показали штаммы Escherichia coli, Klebsiella pneumoniae и Salmonella typhimurium, для которых величина МПК составила 6,25 мкг/мл, 6,25 мкг/мл и 12,5 мкг/мл соответственно.

Все исследованные представители грамположительной микрофлоры проявили большую чувствительность к действию препарата «Доксилокс» по сравнению с грамотрицательными штаммами. Так, были получены значения МПК для Streptococcus pyogenes, Staphylococcus aureus, Bacillus cereus и Clostridium novyi 0,195 мкг/мл, 0,39 мкг/мл, 0,049 мкг/мл и 0,097 мкг/мл соответственно.

Изучение чувствительности тест-штаммов микроорганизмов к препарату «Флорокс» показало несколько меньшую эффективность этого препарата по сравнению с «Доксилоксом» как в отношении грамотрицательной, так и в отношении грамположительной микрофлоры. Наибольшую устойчивость к препарату «Флорокс» показал штамм Pseudomonas aeruginosa , МПК - 100,0 мкг/мл.

Показатели МПК исследуемых антибактериальных препаратов к тест-штаммам

№ п/п	Род, вид микроорганизма	Номер штамма	Показатели МПК (мкг/мл)
			Доксициклин («Доксилокс»)	Флорфеникол («Флорокс»)	Доксициклин/ Флорфеникол («Флоридокс»)
1	Escherichia coli	АТСС 25922	6,25	6,25	3,125/6,25
2	Escherichia coli 0 151 «Крым»	60888	50,0	12,5	25,5/50,0
3	Klebsiella pneumoniae	8172	6,25	6,25	3,125/6,25
4	Proteus mirabilis Сиднеев	46	50,0	25,0	12,5/25,0
5	Salmonella typhimurium	20	12,5	25,0	12,5/25,0
6	Pseudomonas aeruginosa	АТСС 27853	50,0	100,0	50,0/100,0
7	Streptococcus pyogenes	163	0,195	1,56	0,097/0,195
8	Staphylococcus aureus	АТСС 25923	0,39	6,25	0,39/0,78
9	Bacillus cereus	687	0,049	6,25	0,097/0,195
10	Clostridium novyi	198	0,097	12,5	0,012/0,024

Наиболее чувствительным к монопрепарату на основе флорфеникола показал себя штамм Streptococcus pyogenes. Рост культуры отмечался только в концентрации препарата 0,78 мкг/мл и ниже. МПК Флорокса для Streptococcus pyogenes составила 1,5 мкг/мл.

Действие комплексного препарата «Флоридокс» в отношении таких тест-штаммов грамотрицательных микроорганизмов как Escherichia coli, Klebsiella pneumoniae более эффективно по сравнению с монопрепаратом «Доксилокс», что подтверждается снижением МПК доксициклина в 2 раза. Еще более высокая эффективность препарата «Флоридокс» отмечалась в отношении Proteus mirabilis (снижение МПК доксициклина в 4 раза). Полученные данные показывают потенцирование доксициклина в комплексном препарате.

При сравнении показателей МПК монопрепарата «Флорокс» и комплексного препарата «Флоридокс» в отношении грамположительной микрофлоры установили, что величина МПК флорфеникола в комплексном препарате для штамма Staphylococcus aureus была ниже в восемь раз (0,78 мкг/мл) МПК флорфеникола в монопрепарате, что свидетельствует о потенцировании флорфеникола в комплексном препарате.

В процессе исследования выявлено синергетическое действие досициклина и флорфеникола в комплексном препарате «Флоридокс» в отношении двух штаммов - Streptococcus pyogenes и Clostridium novyi. Значения МПК комплексного препарата было ниже значений МПК монопрепаратов «Доксилокс» и «Флорокс» и составило 0,097/0,195 и 0,012/0,024 мкг/мл соответственно.

Выводы. 1. Установлено, что грамположительные микроорганизмы Streptococcus pyogenes, Staphylococcus aureus, Bacillus cereus , Clostridium novyi отличаются более высокой чувствительностью к препаратам «Доксилокс», «Флорокс» и «Флоридокс» по сравнению с изученными грамотрицательными штаммами. 2. Отмечено потенцирование доксициклина в отношении тест-штаммов Escherichia coli, Klebsiella pneumoniae и Proteus mirabilis и потенцирование флорфеникола к штамму Staphylococcus aureus в комплексном препарате «Флоридокс». 3. Выявлено синергетическое действие досициклина и флорфеникола в комплексном препарате «Флоридокс» в отношении штаммов Streptococcus pyogenes и Clostridium novyi .

ЛИТЕРАТУРА:  1. Меньшиков В.В. Методики клинических лабораторных исследований. З.М.: Лабора, 2009. Т. 3, С. 879. 2. Определение чувствительности микроорганизмов к антибактериальным препаратам. МУК 4.2.1890-04. М.: Федеральный центр гигиены и эпидемиологии Роспотребнадзора; 2004, С. 53. 3. Методы контроля бактериологических питательных сред. МУК 4.2.2316-08.М.: Федеральный центр гигиены и эпидемиологии Роспотребнадзора; 2008, С. 51.

ИЗУЧЕНИЕ АНТИМИКРОБНОЙ АКТИВНОСТИ ПРЕПАРАТОВ НА ОСНОВЕ ДОКСИЦИКЛИНА И ФЛОРФЕНИКОЛА

Панфилова М.Н., Жукова Н.Н., Сазонов А.А., Казакова Е.С., Касьян И.А., Портенко С.А.

Резюме

В статье представлены результаты сравнительного изучения антимикробной активности и синергетического действия препаратов на основе доксициклина и флорфеникола по отношению к 10 штаммам микроорганизмов.

ANTIMICROBIAL PREPARATION ACTIVITY INVESTIGATION ON THE BASIS OF DOXYCYCLENE AND PHLORPHENICOLE

Panfilova M.N., Zhukova N.N., Sazonov A.A., Kazakova Ye.S., Kasyan I.A., Portenko S.A.