Изучение антисвободно-радикальной активности прополиса, родиолы розовой и хрена

Введение. В формировании адаптивного ответа на воздействие различных экстремальных факторов на биологический организм одну из важных ролей играет антиоксидантная система, поддерживающая свободно-радикальное окисление на оптимальном уровне и не позволяющая развиться окислительному стрессу.

Свободно-радикальное окисление в определённых пределах является нормальным физиологическим процессом, участвующим в коррекции биомембран, обновляя мембранные фосфолипиды.

При патологически высоком свободнорадикальном окислении нарушаются метаболические процессы, сопровождающиеся подавлением гликолиза и окислительного фосфорилирования, угнетением синтеза белка и нуклеиновых кислот.

В настоящее время в качестве средств адапто-генного действия преимущество отдаётся антисво-бодно-радикальным средствам природного происхождения.

В качестве таковых мы предлагаем использование прополиса, родиолы розовой и хрена обыкновенного.

Цель работы. Целью работы было изучение антисвободнорадикальной активности средств, получаемых на основе прополиса, родиолы розовой и хрена обыкновенного в модельной системе перекисного окисления липидов (ПОЛ).

Материалы и методы исследования

Распространёнными природными источниками для получения средств антиоксидантного действия являются прополис, родиола розовая и хрен обыкновенный.

В прополисе были выделены и идентифицированы различные фитохимические вещества, включая флавоноиды, терпеноиды, органические кислоты и сложные эфиры, лигнаны и ацилфлороглюцинол [1, 5].

Прополис является продуктом пчеловодства и обладает разнообразным биологическим действием, обусловленным его богатым химическим составом, который в свою очередь зависит от биоразнообразия региона, посещаемого пчелами. Следовательно, присутствующие вещества напрямую связаны с химическим составом смолы растительного происхождения [2].

Родиолу розовую считают ценным лекарственным растением [3]. В результате химических исследований различными учеными установлено, что в растениях содержатся антрогликозиды, дубильные вещества, органические кислоты, эфирные масла, углеводы, а также воска и стерины, а при исследования учеными цветков родиолы розовой было обнаружено большое количество флавоноидов (до 162 мг/г) [4].

Эффективность антиоксидантного действия прополиса, родиолы розовой и хрена определяли в модельных системах ПОЛ в липосомах. Липосомы готовили по следующей схеме: с целью получения раствора лецитина (10%-ого) приливали 0,5 г соевого лецитина к 5 мл 96%-го спирта, далее полученную смесь грели до 30-40оС, при этом интенсивно перемешивая до получения однородной консистенции. Изготовление липосом проводили инжекционным способом, при котором к 5 мл дистиллированной воды быстро впрыскивали 0,25 мл 10%-го раствора лецитина, используя шприц с тонкой иглой, постоянно и интенсивно перемешивая.

С учетом данных о возможности взаимодействия ТБК с образованием окрашенных хромогенов, что влияет на конечный результат определения уровня МДА, использование спонтанного (температурного) окисления липосом является наиболее целесообразным.

С целью окисления липосом готовили суспензии липосом для модельных систем (контрольной и опытной), далее впрыскивали 0,125 мл 3 Мм перекиси водорода и грели при температуре 37оС на протяжении 6 часов. Затем двое суток оставляли при комнатной температуре. Следующим этапом было определение концентрации малоновго диальдегида в модельной системе.

Контрольная модельная система готовилась следующим образом: к 0,5 мл суспензии липосом приливали раствор трихлоруксусной кислоты (0,5 мл 0,92 М) и тиобарбитуровую кислоту (1 мл 49 мМ), после чего грели в кипящей водяной бане в течение 15 минут. Исследование полученных растворов проводили на фотоэлектроколориметре (при длине волны 532 нм) относительно дистиллированной воды.

Предварительно подготавливали водные вытяжки из изучаемых средств. Для приготовления водной вытяжки брали 20 г прополиса и нагревали со 100 г дистиллированной воды 6 часов при температуре 60°С. После охлаждения жидкость пропускали через бумажный фильтр и разбавляли дистиллированной водой из расчета 1:1. Экстракты из родиолы розовой, болюсов № 1 и № 2 получали аналогично (Рис. 1).

В опытных модельных системах к 0,5 мл суспензии липосом добавляли 0,5 мл водного экстракта прополиса (1:1), затем 0,5 мл 0,92 М раствора трихлоруксусной кислоты и 1 мл 49 мМ 2-тиобарбитуровой кислоты. По такой схеме изучали экстракты из родиолы розовой, болюсов составов № 1 и № 2.

Дозировку используемых адаптогенно-антиоксидантных болюсов брали, опираясь на имеющиеся в литературе данные и учитывая действующие вещества в составе болюсной формы прополиса, приходящиеся на 1 кг живой массы тела животного.

Рис. 1 – Схема определения антиоксидантной активности по уровню МДА в предлагаемых природных адаптогенах на основе прополиса

Результаты исследований и их обсуждение

По результатам исследования МДА в модельных системах установлено, что в системе с добавлением экстракта прополиса и прополиса с родиолой розовой значения МДА были ниже, чем в контрольной системе на 25,00% и 27,00%. А при изучении экстрактов из болюсов №1 и №2, малоновый диальдегид снизился по сравнению с контрольной системой на 30,00% и 33,00% соответственно (риc. 2).

Рис. 2 – Содержание малонового диальдегида в модельных системах при использовании прополиса и родиолы розовой

Риc. 3 – Влияние процесса сушки листьев хрена на антисвободно-радикальную активность их настоев и отваров

Одним из источников соединений антиоксидантного действия является выжимка из листьев хрена, получаемая в качестве отхода производства. Жмых содержит биологически активные вещества, такие как фенолы и флавоноиды, обладающие ан-тисвободнорадикальной активностью. Небольшой срок годности жмыха определяется его высокой влажностью.

Для увеличения срока его годности используется сушка, при которой ингибируется активность ферментов и микроорганизмов. По данным разных авторов [6], при переработке хрена возможно образование новых соединений с изменённым биологическим действием. В связи с этим в каждом конкретном случае следует изучать антисвободно-радикальную активность предлагаемых средств, получаемых из хрена после сушки в виде настоя и отвара [7].

К соединениям, содержащимся в хрене и обладающим антиоксидантным действием относят флавоноиды. Их биологическая роль не ограничивается антисвободно-радикальным действием. С их участи- ем ингибируется окисление липопротеидов низкой плотности (ЛПНП), уменьшается агрегация тромбоцитов, возникает меньше ишемических повреждений. Учитывая способность флавоноидов изменять ответную реакцию биологического организма на воздействие патогенных факторов, их рассматривают в качестве «природных модификаторов биологических реакций».

Антиоксидантную активность настоев и отваров листьев хрена определяли в модельной системе перекисного окисления липидов по методике, описанной выше.

В отдельной пробирке вводили разные фармакопейные формы хрена. Уровень перекисного окисления определяли по результатам реакции с тиобар-битуровой кислотой, показывающей содержание малонового диальдегида в испытуемом средстве. Анализ полученных результатов показал, что содержание малонового диальдегида было ниже в образцах №1 и №2, чем в образцах №3 и №4, сырьё для которых использовалось после сушки.

Это говорит о том, что наибольшими антисво-боднорадикальными свойствами обладают препара- ты на основе листьев хрена без сушки (№1 и №2), хотя и препараты на основе высушенных листьев показывают достаточную антисвободно-радикальную активность. Так установлено снижение антисвободнорадикальной активности у препаратов на основе высушенных листьев без настаивания на 7,7% (отвар) и 10% (настой); в первые сутки настаивания на 5,4% (отвар) и 10,4% (настой); во вторые сутки настаивания на 2,9% (отвар) и 7,1% (настой); на третьи сутки настаивания на 5% (отвар) и 12,5% (настой). Анализируя полученные лабораторные данные по изучению влияния сушки сырья из хрена, можно сделать вывод, что сушка незначительно снижает антисвободно-радикальные свойства.

Вывод. Результаты проведённых исследований по изучению антиоксидантных свойств у средств на основе прополиса, родиолы розовой и хрена в модельной системе перекисного окисления липидов подтвердили наличие у них искомых свойств, что позволяет рекомендовать животноводческому производству данные растения для использования в качестве источника антиоксидантных средств.