Изучение частоты встречаемости генотипов полиморфного маркера Leu28Pro гена APOE при диабетической нефропатии у больных СД 2 типа

Введение. Диабетическая нефропатия (ДН) — микрососудистое осложнение сахарного диабета (СД), развитие которого значительно ухудшает течение и дальнейший прогноз заболевания. При ДН наблюдается поражение мелких кровеносных сосудов фильтрирующего аппарата почек, приводящее в дальнейшем к увеличению количества белка, выделяющегося с мочой (протеинурии) [3, 7]. ДН развивается у 13-15% лиц в общей популяции и гораздо чаще - до 40-50% - в группах риска, к которым относятся пациенты с СД2-типа [2,4]. По прогнозам Международной диабетической федерации, количество больных СД в мире к 2035 г. увеличится до 587 млн человек, из них 95% - пациенты с СД2 [1].

В последние годы, риск развития нефропатии определенно детерминирован генетическими факторами. Только приблизительно у 4050% пациентов как с СД 1 типа, так и СД 2 типа в последующем развивается ДН [8]. Генетические факторы могут непосредственно влиять на развитие ДН и/или действовать совместно с генами, влияющими на кардиоваскулярные заболевания. Поиск генетических маркеров предрасположенности или, напротив, устойчивости к заболеваниям одна из наиболее актуальных задач медицинской науки. [5,9]

Ранее проведенные исследования ассоциации большой группы генов-кандидатов показали, что только полиморфные маркеры гена фермента, превращающего ангиотензин I (АСЕ), и гена NO-синтетазы клеток эндотелия сосудов (NOS3) ассоциированы с ДН у больных СД типа 2 [6]. Ассоциацию генов, кодирующих липопротеины, ранее не изучали среди узбекской нации, хотя и считается, что одним из факторов риска ДН при СД типа 2 является повышенная концентрация липидов в плазме, поскольку определенные группы липопротеинов обладают сильным сродством к сосудистой стенке и могут способствовать ее повреждению. По некоторым данным, измененный липидный профиль на ранних стадиях может быть причиной развития нефропатии нормоальбуминурического типа у пациентов с СД типа 2. Поэтому гены, кодирующие аполипопротеины В и Е, индивидуальные концентрации и свойства которых в значительной мере определяют липидный обмен у конкретного больного, представляют несомненный интерес для исследования в качестве генов-кандидатов, определяющих предрасположенность к развитию сосудистых осложнений при СД типа 2.

Цель: Изучить распределение частот аллелей и генотипов и выявить ассоциацию полиморфных маркеров Leu/Pro гена АРОЕ с развитием ДН у больных СД 2-типа у лиц узбекской националности.

Материал и методы. В Республиканском научно-практическом центре нефрологии на базе III клиники ТМА были обследованы основную группу 129 больных СД 2-го типа и контрольную группу составили 110 здоровых лиц узбекской нации, включенных по принципу «случай-контроль». Пациенты в основной группе были распределены следующим образом: 65 пациентов с длительностью заболевания до 10 лет, без диабетической нефропатии (33 пациента) и с диабетической нефропатией (32 пациента), 64 пациентами - с диабетом, продолжающимся более 10-20 лет, с без диабетической нефропатии (31 пациента) и диабетической нефропатии (33 пациента). Изучались такие показатели как результатов общих анализов крови и мочи, липидного спектра, гликемического профиля, гликозилированного гемоглобина, микроальбуминурии, скорость клубочковой фильтрации (СКФ) по формуле CKD-EPI, уровень эндотелина-1 в плазме крови, ЭхоКГ, СМАД и допплерографическое исследование сосудов почек. Тестирование полиморфизма Leu/Pro гена АРОЕ проводилось на программируемом термоциклере фирмы «Applied Biosystems» 2720 (США), с использованием тест-систем компании «Литех» (Россия), согласно инструкции производителя.

Для статистической обработки материала использовалась программа STATISTICA 6. Данные представлены в виде средних значений со стандартным отклонением (М±SD). Нормальность распределения проверялась крийтерием Колмогорова-Смирнова. Относительный риск заболевания у носителей определенного аллейля и генотипа вычислялся как показатель отношения шансов (OR - oddsratio). Распределение генотипов проверяли на отклонение от равновесия Харди-Вайнберга. Коэффициент корреляции r рассчитывали методом Спирмена. Статистически значимыми считали различия при р<0,05.

Все пациенты подписывали информированное согласие перед проведением обследования.

Результаты и их обсуждение. Частота аллелей и генотипов полиморфизма Leu28Pro гена APOE у всех пациентов (основная группа) и контрольной выборке показана на рисунке 1.

Частота распределения генотипов полиморфизма Leu28Pro АРОЕ в группах пациентов СД и контроля

Рис.1

В нашем исследовании было исследовано распределение генотипов и аллелей полиморфного маркера Leu28Pro гена APOE у основных и контрольных пациентов.

Распространенность аллеля Leu в основной и контрольной группах составила 89,5% и 95,95% соответственно. Частота распространения функционального неблагоприятного аллеля Pro составила 10,4% и 4,1% соответственно. Статистический отчет показывает, что у носителей аллеля Pro вероятность развития заболевания в 2,7 раза выше, чем у носителей аллеля Leu, и разница между ними является достоверной статистической величиной (χ2 = 6,9; P = 0,008; OR = 2,7; 95% CI 1,2597-5,9608) ). Аллель Leu указывает на то, что он обладает защитным действием против прогрессирования заболевания. (χ2 = 6,9; P = 0,008; OR = 0,4; 95% CI 0,1678-0,7938) (Таб.1.)

Таблица 1 Частота распределения аллелей и генотипов полиморфизма Leu28Pro гена APOE в основной и контрольной группах пациентов СД 2-типа.

По результатам основных и контрольных групп, распространения генотипов Leu/Leu, Leu/Pro составила 79,0%, 20,9% и 91,8%, 8,2%, но генотип Pro/Pro в нашем анализе мутационного генотипа. Согласно статистическому расчету, вероятность заболевания у носителей генотипа Leu/Pro в 2,9 раза выше, чем у носителей генотипа Leu/Leu, и разница между ними статистически значима. (χ 2 = 7,5; P = 0,006; OR = 2,9; 95% CI 1,3308-6,6311).

Генотип Leu/Leu был значительно ниже в основной группе, чем в контрольной группе, на 79,0%, 91,8% и показал защитную функцию против прогрессирования заболевания (χ2 = 7,5; P = 0,006; OR = 0,3; 95% CI 0,1508-0,7515). (Таб.1.)

В нашем исследование продемонстрировало ассоциацию между носительством Pro-аллеля (генотип Leu/Pro) гена APOE и диабетической нефропатией у больных СД 2-го типа. Полученные результаты согласуются с данными отечественных и зарубежных авторов, показавших, что носительство Pro-аллеля является независимым фактором риска ДН у пациентов с СД 2-го типа в различных этнических группах [6].

Анализ данных зарубежных исследований указывает также на связь полиморфного маркера е2/еЗ/е4 гена АРОЕ с развитием ДН как при СД 2, так и СД 1, что может указывать на то, что нарушения липидного метаболизма могут играть значительную роль в патогенезе ДН. В проведенном ранее исследовании была выявлена ассоциация полиморфного маркера e2/e3/e4 гена APOE с развитием ДН при СД 2, что носительство аллеля еЗ и генотипа еЗ/еЗ маркера е2/еЗ/е4 гена аполипопротеина Е (АРОЕ) является фактором повышенного риска ДН при СД 1 [1]. У японских авторов описана ассоциация данного маркера с прогрессированием поражения почек при СД 2 от МАУ к протеинурии, где аллель е2 рассматривается как независимый фактор риска прогрессирования ДН [3].

Эти данные и результаты нашего исследования позволяют сделать вывод, что ген APOE играет важную роль в развитии ДН у больных сахарным диабетом 2-го типа в исследуемой узбекской нации. Однако следует отметить, что достаточно важную роль в патогенезе ранних стадий ДН играют также гены, продукты которых связаны с регуляцией сосудистого тонуса в микроциркуляторном русле, такие как АСЕ и ENOS3.

Заключение. Таким образом, oбобщая полученные данные, можно сделать вывод о несомненной вовлеченности ряда генов липидного обмена в развитие ДН при СД типа 2 у лиц узбекской национальности. Результаты настоящего исследования указывают на важность дальнейшего изучения молекулярных основ развития и прогрессирования ДН приведут к разработке новых перспективных направлений в профилактике этой патологии.