Изучение клинической и патоморфологической картины при остром токсическом гепатите на фоне применения биодобавки

Оптимизация процессов производства продукции на животноводческих предприятиях нашей страны принесла большое количество новых обменных патологий сельскохозяйственных животных [5]. Печень является одним из центральных органов метаболизма, который, сохраняя динамическое постоянство внутренней среды, принимает самое активное участие в устранении последствий различных заболеваний. Не существует такого звена обмена веществ в организме, которое так или иначе не было бы связано с процессами, протекающими в печени [10, 11]. Нарушение работы печени – одна из наиболее частых патологий, встречающихся на производстве. Гепатопатологии наносят колоссальный экономический ущерб, что связано с падежом животных, снижением их продуктивности, воспроизводительной способности, резистентности, развитием на этом фоне многих инфекционных и незаразных болезней [2, 3, 12].

Основной группой лекарственных препаратов для лечения болезней печени, связанных с патологией обмена веществ, являются гепатопротекторы. Данные препараты препятствуют разрушению мембран клеток и стимулируют регенерацию гепатоцитов [5]. Поэтому разработка новых гепатопротективных средств и биодобавок является перспективной целью для отечественной фармакологии [1, 8, 9, 13].

Доклинические исследования перспективных гепатопротективных лекарственных средств проводятся на классической модели токсического гепатита, вызванного внутрижелудочным или интраперитонеальным введением 50 % масляного раствора тетрахлорметана [7]. Этот гепатотоксин оказывает прямое повреждающее действие на печень посредством образования ковалентных связей с клеточными макромолекулами, что, в свою очередь, приводит к выраженному повреждению мембран гепатоцитов, активации процессов липопероксидации, дисбалансу в работе ферментативного звена антиоксидантной системы организма, нарушению метаболизма липидов, белков, углеводов [4].

Материал и методы исследований. Опытная часть исследований была выполнена на базе отделения токсикологии ФГБНУ «ФЦТРБ-ВНИВИ» (г. Казань). Для моделирования токсического гепатита печени использовали тетрахлорметан в дозе 0,4 мл/кг, вводили внутрибрюшинно. Эксперименты проведены на 24 белых крысах, разделенных по принципу аналогов на 4 группы. Биологическим контролем служили животные первой группы. Белые крысы второй, третьей и четвертой групп получали внутрибрюшинно тетрахлорметан в 50 % растворе на оливковом масле в дозе 0,4 мл/кг однократно. Подопытным животным третьей и четвертой групп на фоне затравки задавали препараты. Животные третьей группы получали коммерческий препарат «Карсил» (100 мг/кг внутрижелудочно один раз в сутки). Четвертая группа получала биодобавку на основе шрота расторопши, янтарной кислоты, бентонита, пробиотического штамма B. subtilis, витаминов А и Е. Лечение препаратами продолжалось в течение 14 суток.

По окончании лечения животные были подвергнуты декапитации под эфирным наркозом. Вскрытие проводилось по общепринятой методике. Была проведена визуальная оценка внутренних органов, а также забор материала на гистологическое исследование печени. Кусочки органов фиксировали в 10 % нейтральном формалине, проводку проводили общепринятыми в патоморфологии методами. Гистопрепараты окрашивали гематоксилин-эозином. Микрофотосъемку гистологических препаратов осуществляли в проходящем свете с помощью микроскопа Leica DM 1000, камера Leica DFC 320 («Leica Microsystems», Япония).

Результат исследований. В группе крыс, получавших тетрахлорметан без лечения, уже на третьи сутки эксперимента наблюдалось угнетение, частичный отказ от приема корма, взъерошенность кожного покрова. К концу эксперимента большая часть животных была сильно истощена, дегидратирована.

У группы, получавшей помимо тетрахлорметана «Карсил», клиническая картина проявилась на седьмые сутки угнетением и снижением тургора кожи.

У животных, получавших на фоне введения тетрахлорметана биодобавку, клиническая картина не проявлялась.

При вскрытии у всех подопытных, получавших тетрахлорметан без лечения, наблюдалась иктеричность слизистых оболочек, гепатомегалия, очаговые кровоизлияния под капсулой печени, сама печень была тестоватой консистенции. Из группы, получавшей «Карсил», только у двух из шести крыс наблюдалась желтушность слизистых оболочек, у одной наблюдались очаговые кровоизлияния под капсулой печени. В остальных группах при осмотре внутренних органов визуальные изменения не обнаружены.

Гистологическая картина печени у животных группы биологического контроля соответствовала картине нормальной печени, сохранена структура печеночных долек без деструкции гепатоцитов (Рисунок 1).

Рисунок 1 – Печень белой крысы группы биологического контроля, окраска гематоксилином

Эрлиха и эозином водным, объектив Х20

У животных четвертой группы были выявлены общие изменения в виде неравномерного кровенаполнения сосудов. Стенки венозных сосудов были тонкие.

При этом толщина стенок, как на поперечном срезе, так и на продольном срезе могла различаться, имелись еще более истонченные участки. Сами стенки были окрашены в мутноватый эозинофильный цвет. Артерии во всех препаратах имели утолщенные стенки, ядра эндотелия не на всем протяжении среза. Однако ядра, которые были видны, различались формой и цветом, некоторые были гиперхромные, округлые, другие – «сплюснутые» бледные. В перипортальных трактах определялась инфильтрация лимфоцитами, гистиоцитами. Во всех препаратах синусоиды были заполнены гомогенными эозинофильными массами неравномерно с участками скоплений, местами выглядели как сдавленные. Здесь же определялись единичные лимфоциты и деформированные, вытянутые Купферовские клетки. Гепатоциты были более крупные, чем в контроле, а некоторые почти в два раза. Цитоплазма гепатоцитов имела неравномерную эозинофильную «мутную» окраску. В некоторых клетках определялись участки пустот и фрагменты цитоплазмы в виде зерен. В других гепатоцитах определялись круглые, мелкие оптические пустотки. Также обращало на себя внимание строение ядер клеток. В некоторых они были увеличены, неравномерно окрашены, зернистые, базофильные. В отдельных гепатоцитах не определялись ядра. Наиболее выраженные изменения гепатоцитов наблюдались вокруг центральной вены. Строение балок в дольках было нарушено (Рисунок 2).

Рисунок 2 – Печень белой крысы группы токсического контроля, окраска гематоксилином Эрлиха и эозином водным, объектив Х20

В ходе гистологического исследования крыс, получавших «Карсил», наблюдались выраженные изменения структуры. Вены и артерии были расширены, заполнены эритромассами с признаками агрегации эритроцитов. Стенки артерий были неравномерно утолщены, вены тонкие. Гепатоциты неравномерно увеличенные, некоторые набухшие. В цитоплазме многих гепатоцитов определялись мелкие круглые пустоты. В других имелись просветления цитоплазмы и зернистые массы. Ядра гепатоцитов были разного размера, некоторые увеличенные, другие мельче, чем в контроле. Имелось неравномерное окрашивание ядер с гиперхромным глыбчатым хроматином. Синусоиды были сдавлены, неравномерно заполнены эозинофильными гомогенными массами. Встречались единичные лимфоциты и Купферовские клетки, которые были деформированными. Единичные гепатоциты были без ядер, располагались они преимущественно вокруг центролобулярных вен. Балочные структуры были плохо различимы (Рисунок 3).

У крыс, которые получали тетрахлорметан и БАД, также были выявлены расширенные сосуды, заполненные эритромассами. Стенки артерий были несколько утолщены, эндотелий преимущественно с круглыми ядрами. Строение долек было сходно с группой биологического контроля. В цитоплазме гепатоцитов определялись оптические пустоты и зернистые эозинофильные массы. У всех крыс определялись единичные безъядерные гепатоциты (Рисунок 4).

Рисунок 3 – Печень белой крысы третьей группы, окраска гематоксилином Эрлиха и эозином водным, объектив Х20

Рисунок 4 – Печень белой крысы четвертой группы, окраска гематоксилином Эрлиха и эозином водным, объектив Х20

Заключение. При гистологическом исследовании препаратов печени крыс группы токсического контроля выявлены признаки нарушения сосудистого тонуса, отек стенок сосудов, деформация эндотелия артерий и вен, слабо выраженная мелкокапельная жировая дистрофия и зернистая дистрофия с некробиозами, некрозами, сдавление синусоидов, деформация Купферовских клеток.

У крыс, получавших тетрахлорметан и «Карсил», в печени выявлены признаки очаговой жировой дистрофии гепатоцитов, зернистой дистрофии с некробиозами, некрозами вокруг центролобулярных вен, паретическое полнокровие, эритростазы, отек стенок сосудов.

У крыс, которые получали тетрахлорметан и БАД, изменения структуры печени были наименее выраженными. Наблюдались признаки очаговой зернистой дистрофии, некробиозы и некрозы единичных гепатоцитов.

Печень белых крыс из группы, получавших БАД, имела наименее значимые изменения. Это свидетельствует о достаточно высокой эффективности биодобавки.

В ходе гистологического исследования крыс, получавших тетрахлорметан и «Карсил», выявлены признаки очаговой жировой дистрофии гепатоцитов, зернистой дистрофии с некробиозами, некрозами вокруг центролобулярных вен, паретическое полнокровие, эритростазы, отек стенок сосудов. У крыс, которые получали тетрахлорметан и БАД, изменения структуры были наименее выраженными.