Изучение острой токсичности комплексного средства "З - 88" на белых мышах

Роль лекарственных веществ в оздоровлении животных и повышении их продуктивности всё время возрастает. В общем комплексе этих средств важное значение имеют химиотерапевтические средства, количество которых неуклонно увеличивается. В то же время, до сих пор остается актуальным изыскание таких препаратов, которые бы обладали повышенным этиотропным действием, влияли губительно на устойчивые формы микроорганизмов, не оказывали побочного действия на животных, активизировали защитные механизмы организма.

В справочнике приведено описание 230 препаратов, производимых 36 компаниями из 18 стран, включенных в «Реестр лекарственных средств для ветеринарного применения», зарегистрированных в РФ по состоянию на 14 сентября 2016 года, среди которых имеются ряд новинок [1]. В этом направлении ведутся работы и отечественными учеными, предлагающими свои разработки практикующим врачам и специалистам в области ветеринарии и зоотехнии [2, 3, 4, 5, 7]. Все это свидетельствует о том, что изыскание эффективных средств и путей воздействия на организм животных с целью повышения их продуктивности и качества продукции остается одной из важнейших задач современной фармакологии.

Материал и методы исследований. Экспериментальная часть работы выполнена в виварии ФГБОУ ВО КГАВМ имени Н.Э. Баумана. Теоретическая и аналитическая часть работы выполнена в условиях кафедры фармакологии, токси- кологии и радиобиологии Казанской ГАВМ.

Объектом исследования являлось органическое средство природного происхождения под лабораторным шифром «З-88», полученное по методике М.П. Тушнова, в нашей модификации.

Общетоксическое действие средства «З-88» определяли на лабораторных мышах с исходной массой 17-20 граммов. В эксперименте использовали здоровых животных с хорошими показателями экстерьера, выдержанных в условиях карантина в течение 14 суток. Кормление мышей осуществляли в утренние и вечерние часы, для чего использовали кормовую смесь из зерна, в состав которой входит: пшеница 15 %, овес 50 %, просо 20 %, ячмень 10 % и семена подсолнуха 5%. Кроме того, они получали рыбий жир и мел через день. За сутки до включения в опыт их подвергали пищевой депривации со свободным доступом к воде. Кормушки устанавливали обратно сразу же после затравки животных тестируемыми средствами. Всего использовано 44 самки и 44 самца белых мышей, распределенные в 9 групп, по принципу пар-аналогов. В первую группу были включены 4 самки и 4 самца и им ничего не вводили (интактная). В каждую последующую группу вошли по 5 самок и 5 самцов, где во второй опытной группе мышам, принудительно, с помощью специального атравматического зонда интрагастрально, вводили средство под лабораторным шифром «З – 88», из расчета 0,5 мл на одно животное. Затравку мышей третьей опытной группы осуществля- ли путем инокуляции средства внутримышечно в дозе 0,5 мл, в четвертой группе – путем подкожного введения его в объеме 1,0 мл, а животные 5-й группы получали средство внутривенно в дозе 0,5 мл в боковую вену хвоста. Шестая, седьмая, восьмая и девятая группы подопытных мышей были контрольными, которым в соответствии с указанными выше путями введения использовали стерильный физиологический раствор в аналогичных дозах (Таблица 1).

Самок содержали отдельно от самцов. Использованные дозы являются максимально допустимыми для данного вида лабораторных животных, в зависимости от массы тела и пути введения [8]. За животными вели наблюдения в течение 14 суток с момента введения препарата, причем, в течение первых суток за мышами осуществляли наблюдение: в течение первых шести часов постоянно, а спустя указанное время, один раз через каждые 2 часа. Начиная со вторых суток осмотр животных проводили 2 раза в сутки, до завершения опыта.

Для оценки картины интоксикации принимали во внимание общее состояние животных, с учетом таких поведенческих реакций, как двигательная активность, положение тела в пространстве, отношение их к корму, груминг, состояние волосяного покрова, нервно-мышечное возбуждение, показатели массы тела в динамике, характер и степень интоксикации, цвет видимых слизистых оболочек, сроки гибели животных. Контроль массы тела у подопытных мышей осуществляли непосредственно перед началом опыта и по его завершении. В конце эксперимента отдельных животных подвергали эвтаназии под эфирным наркозом для оценки состояния внутренних органов.

Все исследования проведены с учетом требований Директивы 2010/63/EU Европейского парламента и Совета Европейского Союза от 22.09.2010 по охране животных, используемых в научных целях [9] и Европейской конвенции по защите позвоночных животных, используемых в экспериментальных и других научных целях [10].

Результаты исследования обработаны статистически с применением стандартного пакета программ Microsoft Office Excel 2007.

Таблица 1 – Схема использования средства «З – 88» белым мышам, при определении острой токсичности

Результаты исследований. Острая токсичность – вредное действие лекарственного средства, проявляющееся после его однократного применения или повторного введения через короткие интервалы времени в течение суток, для определения переносимых, токсических и летальных доз вещества и причин наступления гибели животных [6].

Исследованиями установлено, что введение средства «З-88» внутрь белым мышам сопровождалось их адинамией. Сразу после введения тестируемого средства отмечали болевую реакцию в виде су- дорожных стягиваний мышц, продолжительность которых составила 20-30 минут. Животные выгибали спину, прижимали брюшину к основанию клетки, забивались в угол, дыхание преимущественно грудного типа, уреженное, вплоть до полного прекращения его в течение нескольких секунд. Вслед за этим мыши совершали одиночные, глубокие вдохи с признаками инспираторной одышки. Данное явление связывают с биологически активными веществами, входящими в состав средства и введением максимального объёма жидкости интрагастрально, что создавало препятствие для нормального участия диафрагмы в акте дыхания.

В 6-й группе животных, при аналогичном способе введения физиологического раствора признаков болевых реакций не отмечали, в то же время наблюдали критическое урежение дыхательных движений, грудной тип дыхания, скученность, отказ от корма, в течение первых 2-3 часов. Признаки интоксикации в виде судорожных стягиваний мышц, явлений апноэ и ограничение поведенческой активности у мышей 2-й подопытной группы проходили постепенно спустя 30-40 минут после затравки их средством «З-88», однако число дыхательных движений продолжало оставаться уменьшенным, чем у аналогов интактной и 6-й контрольной группы. Спустя указанное время животные постепенно восстанавливали двигательную активность, дыхание становилось умеренным и на 5-6 час после начала опыта поведенческая активность была близка к показателям мышей интактной и 6-й контрольной группы. Мыши подходили к поилкам, принимали воду, совершали груминг, но корм не принимали. Полное восстановление клинических признаков интоксикации до физиологических показателей происходило спустя 12-24 часа после затравки.

В третьей и четвертой опытной группах, где испытуемое средство вводили грызунам внутримышечно и подкожно отмечали беспокойство их, болезненность при инокуляции средства, учащение дыхания. Мыши двигались по клетке, затем прижимались друг к другу, сбиваясь в кучу.

Длительность указанных поведенческих реакций составила 10-15 минут, после чего животные осторожно двигались по клетке, совершали груминг, но случаев подхода к поилкам отмечено не было. Мыши начинали принимать воду спустя 40 - 60 минут после использования средства, а прием корма через 1,5-2 часа после начала опыта. Аналогичные реакции отмечены и у контрольных особей 7-й и 8-й групп.

У грызунов 5-й опытной группы после внутривенного введения средства «З – 88» отмечали резкую двигательную активность, мыши начинали хаотично двигаться по клетке, дыхание становилось учащённым, спустя 3-5 минут они забивались в угол, прижимались друг к другу. У контрольных аналогов 9 группы наблюдали аналогичную реакцию на внутривенное введение стерильного раствора натрия хлорида. В последующие 30-40 минут подопытные животные успокаивались, начинали подходить к поилке, а прием корма спустя 1,5-2 часа.

При всех указанных методах введения средства «З-88», визуализируемых изменений со стороны слизистых оболочек мышей не отмечено ни в одном случае. Явлений тремора мышц, парезов, параличей и гибели животных не наблюдали. При взвешивании грызунов в конце опыта, разницы по массе тела между группами не установлено. При патологоанатомической оценке картины интоксикации у мышей после эвтаназии, в макроструктуре органов изменения не выявлены.

Резюме

В статье представлены результаты экспериментальных исследований, целью которых было изучение параметров острой токсичности комплексного средства «З – 88». Исследованиями установлено отсутствие токсического влияния испытуемого средства на организм белых мышей при различных способах затравки их, в максимально допустимых дозах. По степени воздействия на теплокровных животных средство классифицируется как малотоксичное и может быть отнесено к 4-му классу опасности (малоопасные вещества).