Изучение острой токсичности высококалорийной жидкой кормовой добавки Active Mix VMG - 600 на крысах

Витаминно-минеральные кормовые добавки широко применяются в животноводстве для профилактики и лечения гипомикроэлементозов и гиповитаминозов [6, 10]. Все большее распространение получают жидкие кормовые добавки в силу удобства их применения и возможности использования автоматических систем выпаивания.

Часто такие кормовые добавки содержат неорганические соли металлов микроэлементов. Они дешевы, но имеют невысокую усвояемость и значительную токсичность при передозировке [8]. Некоторые кормовые добавки содержат хелатные комплексные соединения металлов микроэлементов, которые обеспечивают более высокую безопасность и эффективность их применения [5].

Соединения разных микроэлементов оказывают взаимное влияние на процессы усвоения и включения в метаболические процессы, которое может сводиться к их подавлению или стимулированию.

Данные явления, называемые, соответственно, физиологическим антагонизмом или синергизмом микроэлементов давно известны и описаны в литературе [3, 9, 11].

Использование хелатных комплексных соединений способно снизить проявление антагонизма микроэлементов, по крайней мере, на этапе всасывания в ЖКТ. Однако, по нашему мнению, оно вряд ли способно устранить его полностью на этапе включения микроэлементов в метаболические пути. Проявления антагонизма и синергизма возможны в отношении не только соединений микроэлементов, но и витаминов, также входящих в состав кормовых добавок [1].

Однако при составлении рецептур кормовых добавок проявление физиологического (биохимического) антагонизма или синергизма компонентов не учитывается разработчиками. Вместе с тем, сведя к минимуму проявления антагонизма и совместно используя вещества, усиливающие действие друг друга (т.е. проявляющие синергизм), можно было бы значительно повысить эффективность применения кормовых добавок.

Данная задача была решена нами при разработке рецептуры высококалорийной жидкой кормовой добавки Active Mix VMG-500/600. Она содержит хелатные комплексные соединения Co, Fe, Cu, Mn умеренной стабильности, водорастворимые витамины (витамин С, витамины группы В), витаминоподобные вещества (холин, L-карнитин), микроэмульсию жирорастворимых витаминов (A, D3, E) и диацетофенонилселенида (ДАФС), глицерин (необходимый для повышения калорийности) и вспомогательные вещества.

Для того, чтобы повысить эффективность применения кормовой добавки был использован новый подход, заключающийся в раздельном использовании ее компонентов. Кормовая добавка Active Mix VMG состоит из двух различающихся по своему составу частей (жидкостей) Active Mix VMG-500 и Active Mix VMG-600. Они хранятся в разных емкостях и даются животным по-отдельности (через день). При этом входящие в состав каждой из них вещества сгруппированы таким образом, что не проявляют в отношении друг друга антагонизм, либо, напротив, являются синергистами. Разделение кормовой добавки на две разные части также позволило избежать нежелательных химических реакций между входящими в их состав веществами.

Жидкая кормовая добавка Active Mix VMG-600 содержит воду (24,1%), глицерин (до 75%), хелатные комплексные соединения железа (150 мг/кг железа по элементу) и меди (7,424 мг/кг меди по элементу), йодистый калий (7,65 мг/кг йода по элементу) и вспомогательные вещества. Добавка Active Mix VMG-500 содержит остальные компоненты, перечисленные выше. Обе части добавки Active Mix VMG-500/600 также содержат воду и вспомогательные вещества.

Чтобы подтвердить безопасность применения разработанной кормовой добавки Active Mix VMG-500/600 необходимо оценить острую токсичность каждой из ее частей в экспериментах на лабораторных животных. В данной работе представлены результаты оценки острой токсичности Active Mix VMG-600 в экспериментах на крысах.

Материал и методы исследований. Для эксперимента по изучению острой токсичности жидкой кормовой добавки Active Mix VMG-600 было использовано 40 нелинейных крыс (самок) массой 210±20 г.

Крыс содержали в клетках в условиях вивария в соответствии с общепринятыми нормами [2]. Кормление было одинаковым. Животные были карантинированы в течение 14 дней перед началом исследования.

Все исследования выполнялись в соответствии с правилами, принятыми Европейской Конвенцией по защите позвоночных животных, используемых для исследовательских и иных научных целей (European Convention for the Protection of Vertebrate Animals Used for Experimental and other Scientifi c Purposes (ETS 123). Strasbourg, 1986) [7].

Жидкую кормовую добавку Active Mix VMG-600 вводили крысам внутрижелудочно с помощью зонда. Были сформированы 4 подопытные группы крыс по принципу пар аналогов по 10 голов в каждой.

Животным первой группы однократно вводили по 5 мл Active Mix VMG-600. Крысам второй группы вводили по 5 мл Active Mix VMG-600 двукратно с интервалом в 6 часов (всего каждое животное получило 10 мл раствора). Крысам третьей группы вводили по 5 мл раствора Active Mix VMG-600 четырехкратно с интервалом в 6 часов (всего каждое животное получило 20 мл раствора). Крысам четвёртой (контрольной) группы однократно вводили по 5 мл стерильного 0,9 % раствора NaCl.

Наблюдение за животными выполняли в течение 14 суток. При этом оценивали их поведение и общее состояние, потребление воды и корма, проводили термометрию. Крыс выводили из эксперимента на 15 день в соответствии с общепринятыми требованиями. Отбор крови осуществлялся в момент вывода животных из опыта.

Для статистического анализа полученных результатов пользовались общепринятыми методами. Рассчитывали среднее значение показателей по выборкам и среднее квадратическое отклонение (σ). Оценку достоверности различий двух совокупностей выполняли с использованием непараметрического критерия Вилкоксона-Манна-Уитни.

Результат исследований. После каждого внутрижелудочного введения кормовой добавки у крыс во всех подопытных группах наблюдали кратковременное угнетение, вызванное чрезмерным наполнением желудка. Аналогичную картину наблюдали и при применении физиологического раствора в контрольной группе крыс.

У крыс 1-ой группы после внутрижелудочного введения 5 мл жидкой кормовой добавки угнетение определялось до 10 минут. Через 2 часа двигательная активность восстанавливалась, а на 2-е сутки общее состояние было таким же, как до начала исследования.

Угнетение крыс 2-й группы длилось также до 10 минут после первого введения 5 мл жидкой кормовой добавки. Через 2 часа аппетит полностью нормализовался. После повторного введения 5 мл данной жидкости угнетённое состояние наблюдали в течение суток.

Крысы 3-й группы после первого введения 5 мл жидкой кормовой добавки также были угнетены в течение 10 минут. После последующих введений препарата (по 5 мл) угнетённое состояние длилось в течение 2-х суток. Животные отказывались от корма, потребляли мало воды, большую часть времени сидели по углам клетки. Аппетит и двигательная активность крыс полностью нормализовались на 3 сутки.

Крысы 4-ой (контрольной) группы после внутрижелудочного введения 5 мл физиологического раствора были угнетены в течение 10 минут. Двигательная активность и аппетит полностью нормализовались через 2 часа.

Таким образом при передозировке Active Mix VMG-600 было отмечено ухудшение общего состояния крыс, снижение двигательной активности и аппетита, уменьшение потребления жидкости.

Очевидно, имело место угнетение центральной нервной системы, которое было тем сильнее, чем большее количество препарата вводилось. Безусловно могли присутствовать нарушения и со стороны других органов и систем. Однако все животные выжили, а их общее состояние нормализовалось. Таким образом, установить величину летальной дозы не удалось.

Гематологические исследования, проведенные на 15 день, дали следующие результаты (Таблица 1).

Таблица 1 – Гематологические показатели крыс (М± σ, n=10)

№ группы	1	2	3	4 (контрольная)
Эритроциты, *1012/л	7,176±0,4*	7,046±0,7*	6,828±0,6**	7,847±0,7
Лейкоциты, *109/л	7,67±1,3	7,42±3,7	8,26±3,1	7,65±1,1
Гемоглобин, г/л	126,8±6,1**	121,3±13,1**	107,7±5,2**	137±9,6
Гематокрит, %	37,9±0,8**	37,96±1,9**	35,59±2,6**	44,76±2
Средний объем эритроцита, фл	52,36±1,2	54,06±1,4*	52,49±0,7	52,74±0,9
Среднее содержание гемоглобина в эритроците, пг	17,19±0,6	17,43±1,5	16,14±0,9	16,92±0,1
Моноциты *10^9/л	0,41±0,2	0,28±0,1	0,47±0,3	0,49±0,2
Лимфоциты *10^9/л	3,92±1,2	5,49±1,9	4,91±2,1	4,35±0,8
Гранулоциты, *10^9/л	3,95±2,2	4,54±2,4	4,63±2,1	4,83±2

Примечание: вероятность ошибки достоверности различий по сравнению с контролем *

(Р<0,05); **(Р<0,01)

Достоверного изменения показателей белой крови в опытных группах по сравнению с контролем не отмечалось.

У животных 1-й, 2-й, 3-й групп (на 15 день) было выявлено достоверное уменьшение содержания эритроцитов, гемоглобина, а также снижение гематокрита по сравнению с контролем (4й группой). При этом содержание гемоглобина и гематокрит были ниже нормы, а содержание эритроцитов не выходило за ее пределы.

Соединения железа и меди, необходимы для эритропоэза [4, 11]. Но их заведомо избыточное введение, напротив, вызвало некоторое его торможение. При этом можно отметить зависимость выраженности данных изменений от дозы.

Впрочем, указанные изменения были достаточно невелики. Таким образом, можно утверждать, что при передозировке кормовой добавки Active Mix VMG-600 (содержащей хелатные комплексные соединения данных микроэлементов) не отмечалось опасных нарушений кроветворения.

Заключение. При внутрижелудочном введении лабораторным крысам жидкой кормовой добавки Active Mix VMG-600 в объёмах 5 мл, 10 мл и 20 мл значения LD 50 установить не удалось, поскольку все животные выжили. Для лабораторных крыс массой 210±20 г максимально возможный разовый объём введения составляет 5 мл и дальнейшее повышение вводимой дозы не только нецелесообразно, но и невозможно. Максимальный объём, вводимый за сутки (4 введения), составил 20 мл. Величина LD 50 для подопытных крыс превысила 5000 мг/кг, что позволяет отнести жидкую кормовую добавку Active Mix VMG-600 к 4-му классу опасности (малоопасным веществам) в соответствии с ГОСТом 12.1.007-76.

Международной (заочной) научнопрактической конференции. Нефтекамск – 2021. – С. – 19-22.

Резюме

В статье представлены результаты изучения острой токсичности жидкой высококалорийной кормовой добавки Active Mix VMG- 600 при внутрижелудочном введении лабораторным крысам. Значения LD 50 установить не представилось возможным, поскольку все животные выжили. Величина LD 50 для крыс превысила 5000 мг/кг. Это даёт основание отнести данную кормовую добавку к малоопасным веществам (4-й класс опасности в соответствии с ГОСТом 12.1.007-76).