Изучение патогенеза антенатальной гипотрофии козлят

Развитие животноводства в основном зависит от получения и выращивания здорового молодняка. Это одна из важнейших и сложных задач. Из всех видов потерь в животноводстве наибольший удельный вес – у незаразных болезней молодняка. Наиболее массово и тяжело молодые животные болеют после рождения.

Одна из причин, препятствующих полному сохранению молодняка, – гипотрофия новорожденных животных. Патология широко распространена в хозяйствах, где не уделяют должного внимания правильному кормлению и содержанию беременных животных [1].

Гипотрофия козлят – общесистемное заболевание новорожденных, распространенная патология, наносящая значительный экономический ущерб. У гипотрофиков сниженная жизнеспособность, плохое развитие, низкий прирост массы тела. После гастроэнтеральных и респираторных заболеваний – высокая летальность.

Возникновение антенатальной гипотрофии плода обусловлено нарушением функционирования фетоплацентарного комплекса [2–3]. Фетоплацентарная недостаточность – одна из ведущих причин патологии беременности и родов, значительного уровня перинатальных потерь, выраженных отклонений в развитии новорожденных [8–9].

Несмотря на значительные успехи современной перинатологии, при антенатальной гипотрофии высоки показатели перинатальной заболеваемости и смертности.

В связи с этим цель нашей работы состояла в изучении механизмов развития антенатальной гипотрофии козлят.

Объекты и методы

Исследования проведены на кафедре акушерства, гинекологии и биотехнологии размножения животных Харьковской государственной зооветеринарной академии и ее клинической базы – региональной лаборатории ветеринарной медицины согласно «Методическим указаниям по использованию биохимических исследований биологического материала в государственных лабораториях ветеринарной медицины при диагностике заболеваний инфекционной патологии».

Для эксперимента были сформированы две группы коз (по 5 – в каждой). Животных отбирали по принципу аналогов: порода – аборигенная, возраст 3–5 лет, масса 39–47 кг. Содержание – в приспособленном помещении. Для осеменения обеих групп животных использовали одного самца. Рацион в контрольной группе был полноценным по питательным веществам, витаминам, макро- и микроэлементам, в опытной группе – неполноценным по каротину.

Объекты исследований – плацента и плоды, подлежащие морфометрии.

При исследовании плаценты определяли массу последа, количество котиледонов, площадь каждого из них и общую площадь ворсинчатого хориона. Площадь котиледона определяли по формуле S = π r2. Суммировали общую площадь ворсинчатого хориона.

Показатели гомеостаза определяли в количественном и сравнительном процентном соотношении с учетом достоверности цифровых результатов.

Содержание общего белка установлено рефрактометрическим методом (РФУ № 61-197), общего кальция – титрометрическим методом с индикатором мурексидом; неорганического фосфора – по Пулсу в модификации В.Ф. Коромыслова и Л.А. Кудрявцевой, витамина А – по модифицированному методу Ф.А. Рачевского, микроэлементов – с помощью атомно-абсорбционного спектрофотометра С-115 М; резервной щелочности – диффузионным методом с помощью спаренных колб по И.П. Кондрахину, гемоглобина – гемоглобинцианидным методом, количество эритроцитов – путем подсчета в камере Горяева.

Пробы сыворотки крови отбирали на третьем месяце беременности. Концентрацию гормонов определяли в условиях лаборатории репродуктивной эндокринологии государственного учреждения «Институт проблем эндокринной патологии им. В.Я. Данилевского» (г. Харьков) на иммуноферментном анализаторе RT 2100C (Китай) при длине волны 450 нм согласно прилагаемым к тест-системе «Estriol» (Human, Германия).

После исследования клинического и морфологического состояния, а также промеров плодов отбирали их органы. Размеры плодов, их органов и плаценты определяли с помощью сантиметра, массу – с использованием электронных весов Aurora – Electronic kitchen scale AU 313.

Опытные образцы органов (или целые органы) для гистологического исследования фиксировали в 10%-ном растворе формалина при температуре +4ºС в течение 3–4 сут, в жидкости Карнуа, обезвоживали в спиртах возрастающей крепости (50º, 60º, 70º, 80º, 90º, 95º-ном, I и II абсолютном), выдерживая их по 24 ч в каждом растворе указанного разведения. Просветляли образцы органов в смеси абсолютного спирта и ксилола, а далее – в I и II чистом ксилоле и заливали в парафиновые блоки. Срезы с парафиновых блоков толщиной 5–7 мкм готовили на роторном и санном микротомах.

Окрашивали срезы гематоксилином – эозином.

Исследования срезов проведены при помощи винтового окулярного микрометра (МОВ-1–15 ×) не менее чем в 10 местах.

Микрофотографические снимки сделаны с использованием специальной приставки на микроскоп Xiongfa 203СА-1 и компьютера.

Полученные данные обработаны статистическими методами с помощью непараметрического Х критерия Ван дер Вардена и стандартного пакета статистики в программе ЕХЕL 2000 с использованием персонального компьютера IBM-PC/AT. Определяли среднюю арифметическую (М), статистическую ошибку среднеарифметического (m). Достоверность различий между средним арифметическим двух вариационных рядов установили по критерию достоверности Р.

Результаты исследований

В исследованиях мы отталкивались от факта, что в основе развития антенатальной гипотрофии лежит фетоплацентарная недостаточность [2, 3, 6–9], обусловленная у сельскохозяйственных животных преимущественно дефицитом витамина А [1, 4, 5].

Определяли влияние дефицита витамина А на отдельные показатели гомеостаза, морфофункциональное состояние фетоплацентарного комплекса, весовые и линейные параметры органов плодов, уровень эстрогенов, макро- и микроструктуру плаценты.

По результатам исследований выявлены отклонения от нормы показателей гомеостаза у животных, имевших дефицитный рацион (табл. 1).

Таблица 1

Показатели гомеостаза котных коз в норме и при дефиците витамина А

Показатель	Граничный минимум	Группы животных		%	Р*
		Контроль (n = 5)	Опыт (n = 5)
Эритроциты, Т/л	12,0	13,18 ± 0,62	11,72 ± 0,56	11,1	0,95
Гемоглобин, г/л	100	116,23 ± 6,31	96,83 ± 5,12	16,7	0,95
Общий белок, г/л	61	63,62 ± 1,64	57,21 ± 1,91	10,1	0,99
Основной резерв, %	48	42,80 ± 2,67	50,60 ± 1,86	15,4	0,95
Общий кальций, ммоль/л	2,50	2,67 ± 0,06	2,43 ± 0,06	8,2	0,95
Неорганический фосфор, ммоль/л	1,94	2,21 ± 0,04	1,87 ± 0,07	15,4	0,999
Витамин А, мкмоль/л	0,70	0,86 ± 0,07	0,64 ± 0,06	25,6	0,999
Цинк, мкмоль/л	15,7	15,95 ± 0,35	14,6 ± 0,35	8,5	0,999
Медь, мкмоль/л	9,4	10,51 ± 0,44	9,12 ± 0,30	13,2	0,999
Кобальт, мкмоль/л	0,40	0,44 ± 0,03	0,38 ± 0,02	13,6	0,999

* Р > 0,999 - критерий высокой достоверности; Р > 0,99 - критерий средней достоверности; Р > 0,95 -критерий низкой достоверности.

Отмечено снижение количества эритроцитов (на 1,46 Т/л, или 11,1%), содержания гемоглобина (на 19,4 г/л, или 16,7%), общего белка (на 6,41 г/л, или 10,1%), общего кальция (на 0,24 ммоль/л, или 9,0%), неорганического фосфора (на 0,34 ммоль/л, или 15,4%), витамина А (на 0,22 мкмоль/л, или 25,6%), цинка (на 1,35 мкмоль/л, или 8,5%), меди (на 1,39 мкмоль/л, или 13,2%) и кобальта (на 0,06 мкмоль/л, или 13,6%), увеличение щелочного резерва (на 7,8%, или 18,2%).

Основное внимание при проведении исследования уделяли определению влияния витамина А на массу плодов в целом, абсолютную и относительную массу их органов и морфофункциональные изменения в плаценте (хориальной части).

По результатам работы установлено, что исследуемые последы не имели патологических отклонений (изменений цвета, наслоений и т.п.), были блестящими и хорошо васкуляризованными. Однако в плацентах животных с дефицитом витамина А (опыт) наблюдались морфологические и функциональные изменения, нарушения их структуры, атрофия и разрушение концевых ворсин, дистрофия и десквамация эпителия ворсин. Плаценты контрольных животных (показатели гомеостаза - в пределах нормы) имели четкую структуру, а явления дистрофии и десквамации эпителия ворсинок не выявлены.

Масса плодов, весовые и линейные параметры плаценты животных с нормальными показателями гомеостаза и дефицитом витамина А приведены в табл. 2.

Таблица 2

Масса плодов, весовые и линейные параметры плаценты коз с нормальными показателями гомеостаза и дефицитом витамина А

Показатель	Группы животных		±	%	Р*
	с нормальными показателями гомеостаза (n = 5)	с А-витаминным дефицитом (n = 5)
Масса плодов, г	3704,8 ± 59,91	3160,2 ± 86,22	+544,6	+17,2	< 0,95
Масса последов, г	304,8 ± 5,59	250,2 ± 4,93	+54,6	+21,8	< 0,95
Площадь плаценты, см2	407,6 ± 7,67	363,4 ± 8,22	+44,2	+12,2	< 0,95
Количество котиледонов	82,6 ± 3,88	80,4 ± 2,87	+2,2	+2,7	< 0,95

* Р > 0,95 - критерий низкой достоверности.

Масса последов у животных контрольной группы составляла 304,8 г, опытной группы – 250,2 г, т.е. выше на 54,6 г (21,8%).

Таблица 3

Масса плодов и их органов у коз с показателями гомеостаза в норме и с дефицитом витамина А

Группа животных	Масса, г
	cd о о	X S X О	cd X cd S X щ Ч у >> О S s S	S О О К	Почек		S 0J 0J О	2 s	X g ^ cd К	Ж S со m ң g	* 1 о ti н и
					Ж м О	м к
С нормальными показателями гомеостаза (n = 5)	46,50	92,10	235,82	94,62	28,56	28,14	6,44	63,77	1,85	0,81	2,35
М ± m	3,68	3,71	9,21	5,20	2,97	2,08	0,43	2,73	0,06	0,05	0,06
С дефицитом витамина А (n = 5)	44,80	86,86	203,26	74,88	26,02	25,24	4,69	58,78	1,54	0,64	2,20
М ± m	2,13	3,09	5,10	2,35	1,35	1,23	0,26	4,99	0,05	0,07	0,05
±	–1,7	–5,24	–32,56	–19,74	–2,54	–2,90	–1,75	–7,39	–0,31	–0,17	–0,15
%	–3,6	–5,7	–13,8	–20,9	–8,9	–10,3	–27,1	–7,8	–16,7	–21,0	–6,4
Р	> 0,95	> 0,95	> 0,99	> 0,99	> 0,95	> 0,95	> 0,99	> 0,95	> 0,99	> 0,99	> 0,99

Р > 0,95 – критерий низкой достоверности; Р > 0,99 – критерий средней достоверности.

При выяснении влияния А-витаминной недостаточности на структуру плаценты установлено следующее. Количество котиледонов у животных сравниваемых групп не отличалось – 80,4 и 82,6 соответственно (+2,2 или +2,7%), тогда как другие показатели имели различия. Так, масса плодов животных опытной группы ниже на 544,6 г (17,2%), составив соответственно 3160,2 г и 3704,8 г.

Площадь ворсинчатого хориона у контрольных животных равнялась 363,4 см2, тогда как у животных опытной группы – 407,6 см2, т.е. больше на 44,2 см2 (12,2%).

На микроморфологическом уровне в плаценте обнаружены дистрофия ворсин, явления дезинтеграции и аутолиза клеток, уменьшенная васкуляризация сосудов (рисунок).

Гистопрепарат фетальной плаценты козы: а – с нормальными показателями гомеостаза; б – с А-витаминной недостаточностью (гематоксилин и эозин × 400)

Установлено снижение (на 4,47 пг/мл, или 57,4%) концентрации эстриола у животных с дефицитом витамина А по сравнению с имевшими показатели гомеостаза в пределах нормы (табл. 4).

Концентрация эстриола у коз, имеющих показатели гомеостаза в пределах нормы и при дефиците витамина А

Таблица 4

Группа животных	Концентрация эстриола, пг/мл	%	Р*
С нормальными показателями гомеостаза (n = 5)	7,78 ± 0,58	57,4	0,999
С дефицитом витамина А (n = 5)	3,31 ± 0,38

* Р > 0,95 – критерий низкой достоверности.

Установлено, что снижение уровня эстрогенов ведет к нарушению антенатального развития плода: уменьшению длины туловища на 13,4–22,3% и массы – на 19,7–35,8%.

Выводы

Таким образом, проведенными исследованиями определено: в основе патогенеза антенатальной гипотрофии козлят лежит дефицит витамина А, это негативно влияет на морфофункциональное состояние органов фетоплацентарного комплекса, обусловливая патологию развития плода.