Изучение реактогенности, безопасности инактивированной вакцины «ОспаВир» и специфической эффективности двухэтапного метода вакцинации против натуральной оспы с применением на втором этапе живой оспенной вакцины

В связи с успешной ликвидацией натуральной оспы с 80-х годов вакцинация против данного заболевания прекращена. В настоящее время лица в возрасте до 23 лет не имеют иммунитета против натуральной оспы, а среди других возрастных групп населения только 10-15% имеют остаточный иммунитет. В связи с этим доля восприимчивого населения к вирусу оспы сегодня очень высока. Быстро эволюционирующий природный резервуар ортопоксвирусов с вовлечением человеческой популяции и опасность использования возбудителей в качестве поражающего агента при биотерроризме обосновывают необходимость поддержания запаса эффективных средств массовой вакцинопрофилактики для противоэпидемических мероприятий и иммунизации лиц повышенного риска.

С учетом современных требований к производству вакцин в НПО «Вирион» усовершенствована имеющаяся технология производства инактивированной оспенной вакцины и разработана вакцина «Ос-паВир», изготовленная из высокоиммуногенного штамма Л-ИВП. При доклиническом исследовании были доказаны безвредность и высокая иммунологическая эффективность созданного препарата.

В соответствии с программой, согласованной с ГИСК им. Л.А. Тарасевича и утвержденной Комитетом медицинских иммунобиологических препаратов (МИБП) и Минздравом России, на базе СибГМУ были проведены клинические исследования инактивированной вакцины «ОспаВир» с применением на II этапе живой оспенной вакцины.

Цель и задачи исследовании – изучение реакто-генности, безопасности и иммуногенности инактивированной вакцины «ОспаВир» при двухэтапном методе вакцинации против натуральной оспы.

МАТЕРИАЛ И МЕТОДЫ

В клиническом исследовании принимали участие 204 человека обоего пола в возрасте от 18 до 23 лет, ранее не привитые против натуральной оспы, соответствующие критериям включения. Исследование относилось к двойному слепому, рандомизированному, контролированному. Методом рандоменации добровольцы были распределены на 2 группы. По рекомендации ГИСК им. Л.А. Тарасевича с целью изучения реактогенности и токсичности инактивированной вакцины и анализа отдаленных постпрививочных проявлений в условиях эпидемиологической ситуации по вирусным заболеваниям была сформирована контрольная группа из 100 человек, основная – из 104 волонтеров.

Изучение реактогенности инактивированной вакцины проводилось в два этапа.

На первом этапе вакцинации инактивированную вакцину «ОспаВир» вводили подкожно в область левого плеча. С целью изучения ее реактогенности путем регистрации общих и местных постпрививочных реакций и осложнений за привитыми было установлено медицинское наблюдение с обязательной ежедневной регистрацией постпрививочных проявлений в течение 5 дней. Лица контрольной группы на первом этапе получили референс-препарат (раствор для инъекций изотонический-0,9%), во втором этапе они участие не принимали.

На втором этапе вакцинации волонтерам, получившим вакцину «ОспаВир», ввели живую оспенную вакцину методом скарификации уменьшенной дозой (1 надрез) в область правого плеча. Учитывая, что в ответ на введение живой оспенной вакцины у привитых развивается допустимый вакцинальный процесс, был проведен учет общих и специфических местных реакций на живую вакцину, введенную на фоне вакцинации «ОспаВир».

После проведения второго этапа вакцинации медицинское наблюдение осуществлялось до полного исчезновения всех общих и местных проявлений, до образования корочки на месте вакцинации.

Оценка степени проявления реакций проводилась с учетом допустимых реакций (повышение температуры тела, увеличение регионарных лимфатических узлов и последовательное развитие вакцинального процесса) и разработанных нами критериев.

Безопасность оценивали на основании показателей общего и биохимического анализа крови, общего анализа мочи.

Иммуногенность препарата при двухэтапном методе вакцинации оценивали по данным исследования сывороток крови (процент сероконверсии, серо-протекции) в реакции биологической нейтрализации

(РБН) и реакции торможения гемагглютинации (РТГА). Концентрацию специфических вируснейт-рализующих антител (титр) в сыворотке крови иммунизированных людей определяли в РБН на хорионаллантоисной оболочке (ХАО) развивающегося куриного эмбриона, используя в качестве тест-штамма вирус вакцины ОСО серия 5 производства «НПО «Вирион» (г. Томск) и в РТГА, используя диаг-ностикум оспенный серия 3 и контрольную сыворотку, не содержащую антител к ортопоксвирусам серия 2, производства «НПО «Вирион» (г. Томск).

В ходе исследования все количественные показатели обрабатывались методом вариационной статистики. Статистическую значимость различий определяли по Т-критерию Стъюдента, при этом статистически значимыми считали различия при Р<0,05.

С целью выявления отдаленных постпрививочных проявлений и возможного нарушения иммунной защиты организма вакцинированные находились под медицинским наблюдением в течение 3 месяцев после проведенной вакцинации.

ПОЛУЧЕННЫЕ РЕЗУЛЬТАТЫ

После проведения первого этапа вакцинации в 100% случаев не было зарегистрировано повышение температуры тела выше 37,5°С. Слабые температурные реакции (37,1-37,5°С) регистрировались в единичных случаях – у 6 (5,7%) человек.

Повышение температуры отмечалось кратковременно, ее нормализация происходила самостоятельно без медицинского вмешательства.

Симптомы общих реакций, такие как слабость, головная боль, регистрировались в единичных случаях в первый день наблюдения у 10 (9,6%) человек, во второй день – у 2 (1,9%) привитых. Недомогание отмечалось только в первый день наблюдения и регистрировалось у 8 (7,6%) волонтеров. Все симптомы общих реакций проходили самостоятельно к концу вторых суток. Местные реакции в виде слабой болезненности наблюдались у 10 (9,6%) вакцинированных, исчезли самостоятельно в течение 24 часов у 8 привитых и через 2 суток после введения вакцины у 2 привитых. В трех (2,8%) случаях местные реакции сопровождались небольшим кратковременным увеличением подмышечных лимфатических узлов (от 0,5 до 0,8 см), которые на третий день наблюдения сократились, стали мягкими, эластичными, безболезненными.

Гиперемии, припухлости в месте введения и других проявлений местных реакций не наблюдалось ни у одного из привитых за весь период наблюдения. В контрольной группе добровольцев были зафиксированы как местные, так и общие реакции. Местные проявления были расценены как «уколочные». Повышение температуры тела до 37,5°С у пяти человек, недомогание и головная боль в трех случаях яви-

Таблица 1

Частота основных симптомов у добровольцев, вакцинированных инактивированной вакциной «ОспаВир», и добровольцев, получивших плацебо

Симптомы		Основная группа («ОспаВир») (n=104)		Контрольная группа (натрия хлорид 0,9%) (n=100)
I.	Общие реакции	абс	%±m	абс	%±m
1.	Температурная реакция
	Нормальная (36,0-37,0)ºС	98	94,3±2,2	95	95±2,1
	Легкая степень (37,1-37,5)ºС	6	5,7±2,2	5	5,0±2,1
	Слабая степень (37,6-38,5)ºС	0	0	0	0
	Сильная степень (от 38,6ºС и выше)	0	0	0	0
	Всего лиц с повышенной температурой тела	6	5,7±2,2	5	5,0±2,1
2.	Нарушение общего самочувствия
	Недомогание	8	7,6±2,6	7	7,0±2,5
	Головная боль	10	9,6±2,8	3	3,0±1,7
	Всего лиц с нарушением общего самочувствия	18	17,2±3,7	10	10±3,0
II.	Местные реакции
	Боль в месте инъекции	10	9,6±2,8	9	9,0±2,9
	Гиперемия	0	0	0	0
	Припухлость	0	0	0	0
	Увеличение лимфатических узлов (шейные, подмышечные)	3	2,8±1,6	0	0
	Всего лиц с местными реакциями	13	12,5±3,2	9	9,0±2,9

Плацебо – раствор натрия хлорида для инъекций изотонический 0,9%

Статистически значимых различий изучаемых величин в сравниваемых группах не выявлено.

Таблица 2

Картина периферической крови у добровольцев, принимающих участие в клинических исследованиях инактивированной вакцины «ОспаВир» при двухэтапном методе вакцинации против натуральной оспы (n=104)

Период наблюдения	Изучаемые показатели
	Статистические показатели	Нb г/л	Эритроциты х 1о12/л	Лейкоциты х 109/л	Сегментоядерные, %	Эозинофилы, %	Лимфоциты, %	Моноциты, %	СОЭ мм/ч
Норма	Х	125	4,05	5,4	64	2,0	21,0	7,0	10,0
	m	5,3	0,25	1,6	4,0	1,7	7,0	0,1	5,0
До проведения	Х	129	4,19	5,47	67,98	2,05	21,0	7,86	14,2
вакцинации	m	1,44	0,03	0,15	0,49	0,17	0,39	0,25	0,75
На 7-е сутки после	Х	125,4	4,05	6,11	64,96	3,1	23,24	6,81	13,46
вакцинации	m	1,42	0,03	0,18	0,3	0,29	0,57	0,27	0,78

Колебания показателей периферической крови не выходят за пределы физиологической нормы.

лись, по-видимому, следствием респираторно-вирусных заболеваний.

При сравнительном анализе количества и степени проявления общих и местных реакций как в основной, так и в контрольной группах статистически значимых отличий отмечено не было.

Результаты гематологических и биохимических анализов крови после вакцинации статистически значимо не изменялись по отношению к фоновым величинам и не выходили за пределы физиологической нормы. Было установлено, что вакцинация оказывает слабое воздействие на уровень гемоглобина в крови вакцинированных. Среднее значение концентрации гемоглобина до вакцинации составляло (129,0±1,44) г/л, на 7-е сутки после вакцинации содержание гемоглобина незначительно уменьшилось до (125,4±1,42) г/л. Со стороны красной крови наблюдалось небольшое снижение количества эритроцитов на 7-е сутки после вакцинации относительно фоновых значений с (4,19±0,03) х 10 12 /л до (4,05± 0,03) х 10¹²/л. На 7-е сутки после вакцинации отмечалось повышение лейкоцитов с (5,47±0,15) х 10⁹/л до (6,11±0,03) х 10⁹/л. Наблюдались изменения со стороны сегментоядерных лейкоцитов спустя 7 дней после вакцинации. Процентное содержание сег-

(23,24±0,57)%. Количество моноцитов имело тенденцию к снижению с (7,86±0,25)% до (6,81±0,27)%. Изменений со стороны СОЭ отмечено не было, до вакцинации СОЭ соответствовала (14,2±0,75) мм/ч, после – (13,2±0,75) мм/ч. Незначительные изменения в периферической крови привитых свидетельствуют об активации системы неспецифической резистентности организма.

С целью изучения действия инактивированной вакцины «ОспаВир» на функцию печени, миокарда и почек было проведено исследование биохимических показателей крови привитых.

При изучении сывороточных трансаминаз – аспартатаминотрансферазы (АСТ) и аланинаминотрансферазы (АЛТ) – на 7-е сутки после вакцинации наблюдалось умеренное изменение уровня трансаминаз. Отмечалось незначительное увеличение активности АЛТ с (7,3±0,48) млмоль/л до (8,8± 0,43) млмоль/л (при норме до 11,3 млмоль/л), показатели активности АСТ на 7-е сутки фактически оставались стабильными. До вакцинации активность фермента АСТ составляла (6,6±0,39) млмоль/л, на 7-е сутки после прививки (6,2±0,41) млмоль/л (при норме до 7,5 млмоль/л) (рис. 1).

Изменения (сывороточных трансаминаз), воз-

-

- к незначительному увели чению на 7-е сутки наблю

Рис. 1. Изучение уровня АЛТ и АСТ в сыворотке крови привитых на 7-е сутки после введения инактивированной вакцины «ОспаВир».

– Показатели АЛТ и АСТ не выходят за пределы физиологической нормы

дения – с (21,0±0,39)% до

никшие в ответ на введение вакцины, не превышали физиологических норм, не приводили к нарушениям метаболизма гепатоцитов, не вызывали субклинических реакций со стороны основных, функциональных систем организма.

В ходе исследования три добровольца самостоя- тельно отказались от дальнейшего участия в качестве волонтеров, поэтому во втором этапе вакцинации принял участие 101 человек.

На 8-й день после первого этапа был проведен второй этап вакцинации – живой оспенной вакциной методом скарификации в область наружной поверхности верхней трети правого плеча (1 надрез). В ходе наблюдения у 98 (97%) привитых постпрививочная реакция протекала по типу первичной вакцинальной реакции, с ускоренным формированием и развитием кожных элементов. У трех (2,9%) вакцинированных развитие постпрививочной реакции произошло по ускоренному типу. Вакцинация двухэтапным методом с применением на втором этапе живой оспенной вакциной сопровождалась последовательным развитием клинических и местных проявлений.

Периоды течения вакцинального процесса:

• 1)    скрытый;

• 2)    последовательное развитие вакцинального процесса (папула, везикула, пустула, образование ореолы) с 2-го по 8-й день;

• 3)    подсыхание и обратное развитие с 8-го по 12-й день;

• 4)    образование рубцов на 8-й–13-й дни.

В каждом из этих периодов наблюдались характерные для них местные, общие и температурные реакции. Максимально выраженные местные и об- щие проявления постпрививочных реакций приходились в период развития оспин – с 5-го по 8-й день после вакцинации, период пустулообразования. С 9-го дня после вакцинации отмечалась регрессия всех клинических проявлений (рис. 2).

В ходе анализа и оценки реактогенности вакцины при двухэтапном методе вакцинации против натуральной оспы с использованием на первом этапе вакцинации инактивированной вакцины «ОспаВир» были выявлены допустимые реакции.

Течение вакцинального процесса с нормальной температурой (36-37)°С наблюдалось в 55 (54,5%)

Рис. 2. Динамика клинических симптомов, наблюдаемых у волонтеров после введения живой оспенной вакцины при двухэтапном методе вакцинации против натуральной оспы

Таблица 3

Частота основных симптомов у добровольцев основной группы после проведения второго этапа вакцинации против натуральной оспы

Симптомы Абс. %±m I. Общие реакции 1. Температурная реакция Нормальная (36-37)ºС 55 54,5%±4,9 Легкая степень (37,1-37,5)ºС 22 21,8%±4,1 Средняя степень (37,6-38,5)ºС 19 18,8%±3,9 Сильная степень (от 38,6ºС и выше) 5 4,9%±2,1 Всего с повышенной температурой 46 45,5%±4,9 2. Нарушение общего самочувствия Недомогание 57 56,4±4,9 Головная боль 58 57,4%±4,9 II. Местные реакции Боль в месте инъекции 72 71,2%±4,5 Гиперемия 100 99%±0,9 Припухлость 96 95,0%±2,1 Папула 100 99%±0,9 Везикула 100 99%±0,9 Пустула 98 97,0%±1,6 Увеличение лимфатических узлов 99 98,0%±1,4 случаях, температурные реакции легкой степени выраженности (37,1-37,3°С) были зарегистрированы у 22 (21,8%) человек. У 19 (18,8%) добровольцев регистрировалось кратковременное повышение температуры тела до 38°С и лишь в 5 (4,9%) случаях температура тела превышала 38°С, регистрировалась в период пустулообразования – на 5–8-й дни после проведения вакцинации и была кратковременной (1-2 дня). Нормализация температурной реакции происходила самостоятельно без медицинского вмешательства (табл. 3).

Из местных реакций чаще других регистрировалась болезненность в месте введения вакцины, которая отмечалась у 72 (71,2%) человек. Гиперемия и припухлость в месте скарификации наблюдались у 100 (99%) и 96 (95%) привитых соответственно. Все местные реакции были расценены как легкой и средней степеней проявления и не всегда сопровождались нарушением общего состояния. Течение вакцинального процесса сопровождалось умеренным увеличением подмышечной группы лимфатических узлов справа. Наибольшее количество случаев увеличения лимфатических узлов подмышечной группы справа регистрировалось в период с 6-го по 10-й день со дня вакцинации. Реакция лимфоидной ткани была умеренно выраженной: в 98 (97%) случаях размеры лимфатических узлов не превышали 2 мм, увеличение лимфатических узлов от 2,1 и более мм отмечалось у 1 (0,9%) привитого. В ходе наблюдения каких-либо осложнений и атипичных прививочных реакций не отмечалось.

Постпрививочные реакции имели только легкую и среднюю степени выраженности. Специфическую активность препарата, обусловленную активным компонентом – антигеном вируса вакцины, оценивали по способности вызывать у вакцинированных образование вирус-нейтрализующих антител к вирусу вакцины. При исследовании сывороток крови привитых двухэтапным методом вакцинации против натуральной оспы установлено, что процент лиц, ответивших выработкой специфических антител в РБН и РТГА, составил 100, процент серопротективных волонтеров в РБН и РТГА – 98.

Так как в качестве защитного титра вируснейтра-лизующих антител в РБН был принят титр 1:40, при анализе результатов уровень образования специфических антител к ортопоксвирусам в РБН распределился следующим образом (рис. 3): только один (0,9%) вакцинированный имел уровень антител менее защитного – 1:10; в сыворотке крови еще у одного (0,9%) добровольца обнаружены антитела в титре 1:80; 10 добровольцев (9,9%) имели уровень антител в титре 1:160; 24 (23,8%) – 1:320.

Наибольшее количество – 32 (31,8%) привитых – имели титр антител 1:640, а у 25 (24,8%) добровольцев антитела определялись в разведении 1:1280. Семь человек (6,9%) в ответ на вакцинацию выработали антитела в титре 1:2560 и один (0,9%) – 1:5120. Средний геометрический титр специфических антител в РБН составил (2,804139±0,04) lg, то есть 636,99 (580,95–698,46).

При анализе результатов образования специфиче-

1:10       1:80       1:160     1:320      1:640     1:1280     1:2560     1:5120

Рис. 3. Анализ уровня специфических антител к ортопоксивирусам в сыворотке крови в реакции биологической нейтрализации на ХАО

Рис. 4. Анализ уровня специфических антител к ортопоксвирусам в сыворотке крови в РТГА

ских антител к ортопоксвирусам в РТГА было установлено, что титр антител 1:2 наблюдался у 1 (0,9%) привитого, 11 (10,9%) вакцинированных имели антитела в титре 1:8; 24 (23,8%) привитых – 1:16; 31 (30,7%) человек имел титр антител 1:32 и 30 (29,7%) – 1:64. Высокий уровень специфических антител – 1:128 наблюдался у 4 (4%) привитых (рис. 4). Средний геометрический титр специфических антител в РТГА составил (1,484078±0,03) lg, то есть 30,48 (28,45-32,66).

Таблица 4

Сравнительный анализ инфекционной и соматической заболеваемости добровольцев основной и контрольной групп в течение 3 месяцев после проведения второго этапа вакцинации против натуральной оспы

	Основная группа (n=101)	Контрольная группа (n=100)
Вирусные заболевания	04.05 г. – 10 человек 05.05 г. – 3 человека 06.05 г. – 7 человек 07.05 г. – 1 человек	04.05 г. – 12 человек 05.05 г. – 5 человек 06.05 г. – 6 человек 07.05 г. – 1 человек
Всего заболевших лиц:	21	24
Кожные и аллергические болезни	0	1

При анализе полученных данных процент сероконверсии оставил 100, а процент серопротекции равнялся 98. Проведенный корреляционный анализ выявил положительную статистическую линейную взаимосвязь между данными РБН и РТГА – коэффициент корреляции r = 0,638426, с уровнем значимости Р<0,001.

Учитывая то, что вакцинация против натуральной оспы проводилась в весенний период, нами было изучено влияние вакцинации на иммунную систему организма. С целью анализа заболеваемости проводилось наблюдение за лицами основной и контрольной групп в течение трех месяцев. В ходе наблюдения было установлено, что заболеваемость среди вакцинированных была аналогична заболеваемости лиц контрольной группы (табл. 4).

ЗАКЛЮЧЕНИЕ

Результаты проведенных клинических исследований показали, что инактивированная вакцина «ОспаВир» ареактогенна и безвредна. Применение ее при двухэтапном методе вакцинации против натуральной оспы сопровождается образованием грунд-иммунитета, что приводит к снижению степени проявления вакцинального процесса и не влияет на снижение общего иммунитета.

На основании данных, полученных в ходе клинического исследования, была утверждена инструкция по применению. Вакцина «ОспаВир» прошла реги- страцию, а двухэтапный метод вакцинации против натуральной оспы рекомендован Росздравнадзором РФ для практического применения в здравоохранении.

STUDYING REACTOGENEITY AND SAFETY OF INACTIVATED VACCINE «ОSPAVIR» AND THE ANALYSIS OF SPECIFIC ACTIVITY OF 2-STAGE VACCINATION METHOD AGAINST VARIOLA USING LIVING VARIOLA VACCINE

ON THE 2-ND STAGE