Изучение влияния фракции полисахаридов из трутовика лекарственного на гуморальный иммунитет у животных

Цель исследования: изучение влияния фракции водорастворимых полисахаридов (ВРПС) из трутовика лекарственного (Fomitopsis officinalis (Will.) Вond. et Sing.) на гуморальные факторы неспецифической резистентности и на формирование первичного иммунного ответа у крыс.

Материалы и методы исследования. Фракцию ВРПС из трутовика лекарственного получали путем экстрагирования измельченного сырья горячей водой после предварительного удаления липидов смесью растворителей хлоро-форм-спирт этиловый 95% (2:1) в аппарате Сокслета. Из полученного водного извлечения выделяли и очищали фракцию полисахаридов, которую использовали для исследований [4]. Гуморальные факторы неспецифической резистентности изучали по определению бактерицидной активности сыворотки (БАС) крови нефелометрическим методом [5]. БАС – это свойство свежей сыворотки крови вызывать гибель проникших или внесенных в нее бактерий, она обусловлена раздельным или совокупным действием антител, комплемента, лизоцима и др. факторов. Уровень БАС является интегральным показателем антимикробных свойств сыворотки крови. Методика определения БАС крови основана на установлении количества выживших бактерий после воздействия на них свежей исследуемой сыворотки, т.е. определении титра сыворотки крови, задерживающий размножение стандартного количества бактерий. Для установления БАС в стерильные пробирки вносили исследуемую сыворотку крови (0,4 мл) и добавляли к ней 0,1 мл суточной бульонной культуры штамма кишечной палочки № 011 плотностью 250 млн. м.т./мл. В контрольную пробирку вместо сыворотки добавляют 0,4 мл физиологического раствора с добавлением 0,1% раствора желатина. Пробирки выдерживали на водяной бане при 37°С в течение 2-х часов. Выраженность реакции определяли по разнице процента гибели суточной культуры E.coli в контрольной и опытной пробах. Процент активности вычисляли по специальной формуле.

Специфические механизмы защиты определяли по формированию первичного иммунного ответа у крыс. Первичный иммунный ответ по гуморальному типу позволяет количественно исследовать антитела в селезенке у крыс. Число антителообразующих клеток (АОК) в селезенке крыс определяли методом безагарового локального гемолиза в монослое эритроцитов в модификации Каннингейма (A.J. Ganningham, 1965). Иммунный ответ оценивали по количеству АОК на 106 степени кариоцитов селезенки [6].

Исследования проводили на крысах линии Вистар. Животных делили на две контрольные и опытную группы. Контроль №1 – биологический (интактные животные) и контроль №2 – животные, получавшие препарат сравнения. Контрольной группе № 1 вводили физиологический раствор в тех же объемах и в те же сроки, что и животным опытных групп. В качестве препарата сравнения использовали официнальный препарат «Бефун-гин», аналог по действию, который вводили в перерасчете на терапевтическую дозу. В качестве опытной группы использовали животных, получавших исследуемое вещество – фракцию ВРПС из трутовика лекарственного. Вещество вводили в дозе 100 мл/кг в течение 5 дней. Иммунизацию животных осуществляли внутрибрюшинным введением эритроцитов барана в дозе 2х108 клеток /мл. Все травматические манипуляции на животных проводили под эфирным наркозом, как в контроле, так и в опыте. Животных для исследования получали из питомника лабораторных животных АМН РФ «Рапполово» и содержали в условиях вивария ПМФИ при одинаковых условиях и на стандартном рационе питания. Забой животных осуществляли в соответствии с «Правилами проведения работ с использованием экспериментальных животных». Статистическая обработка материала осуществлялась по t-критерию Стьюдента.

Результаты и обсуждение . В результате проведенных исследований установлено, что введение фракции ВРПС привело к выраженному снижению БАС (табл. 1).

Таблица 1. Влияние ВРПС трутовика на БАС крови у крыс

Примечание: р (достоверность) относительно контроля-1

Изучение специфических механизмов защиты на модели формирования первичного иммунного ответа по гуморальному типу показало, что применение «Бефунгина» привело к снижению АОК в селезенке у крыс (на 45,8% по сравнению с контрольной группой) (табл. 2). Введение фракции ВРПС также привело к снижению АОК в опытной группе на 39,8% по сравнению с контрольной группой (табл. 2). Лимфоидная ткань селезенки участвует преимущественно в иммунных реакциях гуморального типа, обеспечивая накопление больших количеств плазматических клеток, синтезирующих антитела. Это происходит после первичной иммунизации эритроцитами барана. Однако введение исследуемых веществ («Бефунгина», ВРПС трутовика) замедлило этот процесс.

Известно, что в реализации иммунного ответа участвуют три клеточные системы – это Т-лимфоциты, макрофаги и В-лимфоциты. Т-лимфоциты осуществляют иммунные реакции клеточного типа, а В-лимфоциты – гуморального. Ранее было показано, что под влиянием ВРПС трутовика произошла активация фагоцитоза и стимулирование первичного иммунного ответа по клеточному типу [1]. Повышенная активность одного из клонов Т-лимфоцитов (это Т-супрессоры) приводит к снижению антителоге-неза, и, как следствие, к снижению выработки иммуноглобулинов. Применение фракции ВРПС из трутовика лечебного, возможно, будет основываться именно на этих факторах: активации системы по клеточному типу и угнетение активной В-системы.

Таблица 2. Влияние ВРПС на гуморальный иммунный ответ у крыс

Примечание: критерий t – относительно контроля-1

Выводы: показано, что введение полисахаридов из трутовика лекарственного привело к иммунодепрессивному эффекту на гуморальные факторы, как специфической, так и неспецифической защиты. Показана перспективность использования ВРПС из трутовика лекарственного в качестве иммунодепрессантов при онкологических заболеваниях, в которых идет активация В-лимфоцитов.