Изучение влияния пассажа и адъювантов на иммуногенные свойства культур диссоциированных вакцинных штаммов бруцелл

В работе изложены результаты изучения влияния пассажей через организм морских свинок и ряда адъювантов на повышение иммунологической эффективности вакцинных штаммов B. abortus и S-, SR-, RS- и R-формах.

Установлено, что пассажи стабилизируют свойства вакцинных штаммов бруцелл, а адъюванты – полиоксидоний, фактор некроза опухолей-бета (ФНО-β), ларифан и тиосульфат натрия – повышают иммунологическую эффективность живых вакцин из штаммов бруцелл, особенно находящихся в RS-форме.

Однако ни пассажи, ни введение адъювантов практически не изменяли иммунологическую активность культуры штамма B. abortus R1096 (R-форма).

Несмотря на достигнутые успехи в борьбе с бруцеллезом в РФ и в мире, вопрос изыскания новых противобруцеллезных вакцин для крупного и мелкого рогатого скота, а также совершенствование специальных противобруцеллезных мероприятий с применением официальных биопрепаратов актуален по настоящее время.

В проблеме живых вакцин одним из важных является вопрос их стандартизации (А.А. Салтыков, 1976). Автор подчёркивает, что различные условия поддержания культур вакцинных штаммов в разных лабораториях ведут к иммунологической неравноценности одноимённых штаммов микробов.

Одним из самых активных способов стабилизации иммунологической полноценности вакцинных штаммов является анимализация – пассаж культур через организм животного с целью освобождения популяции вакцинного штамма от мутантов, характеризующихся, наряду с низкой иммуногенностью, ослабленной способностью приживаться в организме животных.

Другим способом повышения эффективности вакцин является использование адъювантов – веществ, повышающих специфические иммунные ответы на вводимые антигены. (В.В. Калмыков, 2000; Т.Н. Уразов и др., 2005)

Целью данной работы являлось установление влияния пассирования культур штаммов B.abortus 82-RTr и R-1096 через организм морских свинок и различных адъювантов на повышение их иммунологической эффективности.

Материалы и методы. Работу проводили на морских свинках, живой массой 450-550г. Было сформировано по принципу аналогов 13 групп животных и проведена их иммунизация.

Культуры всех штаммов B.abortus вводили подкожно в паховую область, в объёме 1 мл, при этом штамм 19 и 82 в дозе 1 млрд. м.к, а R-1096 и 82-RTr – 1,5 млрд. м.к. Адъюванты фактор некроза опухолей -β (ФНО-β) и полиоксидоний вводили раздельно от вакцин в объёме 1 мл в количестве, соответственно, 1×105 ЕД и 0,04 мг, а ларифан и тиосульфат натрия – сочетано, в количестве 0,5 и 150 мг, соответственно.

Через 15 суток, 1, 2 и 3 месяца после вакцинации у морских свинок каждой группы брали кровь из ушной вены для серологического исследования в РА, РСК и РСК с R-антигеном ВНИВИ. Через 3 месяца с момента прививки животных заражали культурой вирулентного штамма B.abortus 54-М ВГНКИ, подкожно в области паха, со стороны, противоположной месту введения вакцин, в дозе 50 м.к. и объёме 1 мл (10 минимальных инфицирующих доз). Контроль дозы заражения осуществляли высевом взвеси бруцелл на чашки Петри с триптозным агаром.

Спустя месяц со дня заражения проводили эвтаназию морских свинок с последующими серологическим и бактериологическим исследованиями. Высевы из лимфатических узлов и паренхиматозных органов осуществляли на печёночный бульон (ППГГБ) и 2 пробирки скошенного эритрит агара. Посевы инкубировали в течение 15 суток с 3-х кратным просмотром роста бруцелл с интервалом в 5 суток. Определяли индекс веса селезёнки (ИВС) и индекс инфицированности (ИИ) по общепринятым в микробиологии методикам.

По результатам исследований устанавливали процент иммунных животных в той или иной группе.

Результаты исследований. В результате проведенных исследований установили, что все культуры бруцелл в результате пассажа через организм морских свинок сохранили свои культурально-морфологические свойства.

Серологическое исследование морских свинок показало, что животные, привитые вакциной из штамма 19, в течение 3 месяцев со дня иммунизации реагировали положительно в РА, РСК и РСК с R-антигеном. Положительные показания РА и РСК с единым бруцеллезным антигеном сохранялись в высоких титрах во все сроки исследований.

Морские свинки, привитые вакцинами из слабоагглютиногенного штамма 82, инагглютиногенного штамма R-1096 и этого штамма с адъювантами во все сроки исследований показывали отрицательный результат в РА и РСК с единым бруцеллёзным антигеном, реагируя положительно в РСК с R-антигеном в относительно высоких титрах антител в течение 3-х месяцев.

Морские свинки, привитые вакциной из антибиотико-резистентного штамма 82-RTr, также показывали во все сроки положительную РСК с R-антигеном в высоких титрах антител, но при этом реагировали положительно в РА и РСК, однако в невысоких титрах антител и не все животные.

Показатели изучения иммуногенных свойств пассажных культур бруцелл и этих культур с адъювантами представлены в таблице, из которой видно, что пассаж культур штаммов 19 и 82 через организм морских свинок практически не изменил их иммуногенные свойства. Иммуногенность пассажных культур, по сравнению с исходными, повысилась на 1,5 % и достигла 83,3 %.

Иммуногенность пассажной культуры из инагглютиногенного штамма R-1096 снизилась на 2,7 % - с 45,5 % до 42,8 %, а у слабоагглютиногенной антибиотикорезистентной культуры штамма 82-RTr повысилась на 16,6 % - с 66,7 % до 83,3 %. При этом у культуры сохранилась устойчивость к обоим антибиотикам - рифампицину и тетрациклину.

Адъюванты ФНО-в и ларифан повышали иммуногенность культуры штамма R-1096 на 7,2 % и 17,2 %, соответственно, а полиоксидоний и тиосульфат натрия - снижали на 2,8 % и 9,5 %.

Что касается культуры штамма 82-RTr, то здесь ФНО-в снизил иммуногенные свойства биопрепарата на 3,3 %, а все другие адъюванты повысили на 16,7 %.

1. Результаты сравнительного изучения эффективности пассажей и применения адъювантов для повышения иммуногенных свойств противобруцеллёзных вакцин из штаммов B.abortus R-1096 и 82-RTr на морских свинках (M ± m)

Вакцина, адъювант	к о й » о « *	ИВС	Серологическое исследование		Бактериологическое исследование			Заразилось (голов)			Иммунных (голов)				% иммун ных до пассажа
			Единый бруц. антиген		Выделено культур бруцелл		ИИ (%) вирулент. культурой		та о Я о я	to о о о	о н ^ Я Й	к о о о	to о о о	с
			РА (МЕ)	РСК	Вакц.	Вир.
19	6	1,81 ±0,19	106,7 ±106,7	16,7 ± 12,8	1	1	1,7 ± 1,7	–	1	1	4	1	5	83,3	81,8
82	6	1,59 ±0,23	1-40,0 5- отр.	1-1:10;5-отр.	2	3	5,0 ± 5,0	1	–	1	4	1	5	83,3	81,8
R-1096	7	2,60 ±0,60	82,9 ±45,5	1-1:5; 6-отр.	–	35	50,0 ±17,9	4	–	4	3	–	3	42,8	45,5
R-1096 + ФНО-β	4	1,55 ±0,28	1-40; 3-отр.	отриц.	–	6	15,0 ±11,9	1	1	2	2	–	2	50,0
R-1096+ полиоксидоний	5	2,06 ±0,53	40,0 ± 31,0	отриц.	–	19	38,0 ± 18,6	3	–	3	2	–	2	40,0
R-1096+ ларифан	5	1,70 ±0,03	отриц.	отриц.	–	8	16,0 ± 13,7	1	1	2	3	–	3	60,0
R-1096+ тиосульфат Na	3	2,30 ±0,50	53,3 ± 26,7	6,7 ± 6,7	—	10	33,3 ± 17,7	2		2	1		1	33,3
82-RTr	6	1,43 ±0,34	1-10; 5-отр.	5,0 ± 3,2	—	3	5,0 ± 5,0	1		1	5		5	83,3	66,7
82-RTr + ФНО-β	5	1,84 ±0,34	отриц.	1-1:5;5 - отр.	—	2	4,0 ± 4,0		1	1	4		4	80,0
82-RTr + полиоксидоний	3	1,89 ±0,20	отриц.	отриц.	—	—	0,0 ± 0,0				3		3	100
82-RTr + ларифан	7	1,77 ±0,10	1 – 10 6- отр.	1-1:10 6 - отр.	–	–	0,0 ± 0,0	–	–	–	7	–	7	100
82-RTr + тиосульфат Na	6	1,65 ±0,11	1 – 10 5- отр.	1-1:10, 1-1:5, 4-отр.	1	—	0,0 ± 0,0				5	1	6	100
Контроль шт. 54 М, 35 КОЕ	5	4,39 ±0,94	192,0 ± 60,0	80,0 ± 60,8	—	29	58,0 ± 14,7	5		5				0,0

Заключение. В результате проведённых исследований установили, что при 3-х – 4-хкратных пассажах культуры штаммов B.abortus 19, 82, R1096 и 82-RTr сохранили исходные культурально-морфологические свойства.

У пассажных культур штаммов 19 и 82, по сравнению с исходными культурами, иммуногенность повысилась на 1,5 %, у культуры штамма 82-RTr на 16,6 %, а у культуры штамма R-1096 – снизилась на 1,5 %.

Действие адъювантов также зависит от антигенных свойств культуры бруцелл. Так, при добавлении к культуре бруцелл штамма R-1096 ФНО-β и ларифана её иммуногенность повышалась, а при добавлении полиоксидония и тиосульфата натрия – снижалась.

При применении адъювантов с культурой штамма 82-RTr лишь ФНО-β незначительно снизил иммуногенность биопрепарата, а все остальные адъюванты – полиоксидоний, ларифан, и тиосульфат натрия – наоборот, повысили.

Вывод. Пассаж культур бруцелл с целью стабилизации их свойств и применение адъювантов – ФНО-β, ларифана, полиоксидония и тиосульфата натрия – в основном повышают их иммуногенные свойства.

ЛИТЕРАТУРА: 1. Салтыков, А.А. Стабилизация иммуногенных свойств вакцинных штаммов бактерий / А.А. Салтыков // ЖМЭИ. – 1976. -№ 8. – С. 3-9. 2. Калмыков, В.В. Влияние иммуномодуляторов на эффективность неагглютиногенной адъювант-вакцины против бруцеллёза крупного рогатого скота / А.А. Калмыков // Тез. докл. Всерос. научно-практич. конф., посвящ. 30-летию ВНИИТБП, 8-9 июня 2000 г. – Щёлково. – 2000. – С. 152-154. 3. Уразов, Т.Н. Изучение влияния тиосульфата натрия на иммуногенез и иммуногенные свойства рифампицинрезистентного штамма B.abortus 82-Rr на морских свинках / Т.Н. Уразов, А.М. Фомин, К.М. Салмаков, Г.М. Сафина и др. // Матер. Междунар. симпозиума, 28-30 ноября 2005 г. – ч. II. – Казань. – 2005. – С. 342-346.

ИЗУЧЕНИЕ ВЛИЯНИЯ ПАССАЖА И АДЪЮВАНТОВ НА ИММУНОГЕННЫЕ СВОЙСТВА КУЛЬТУР ДИССОЦИИРОВАННЫХ ВАКЦИННЫХ ШТАММОВ БРУЦЕЛЛ

Салмакова А.В., Фомин А.М., Сафина Г.М., Косарев М.А.

Резюме

В работе изложены результаты изучения влияния пассажей через организм морских свинок и ряда адъювантов на повышение иммунологической эффективности вакцинных штаммов B. abortus и S-, SR-, RS- и R-формах.

Установлено, что пассажи стабилизируют свойства вакцинных штаммов бруцелл, а адъюванты – полиоксидоний, фактор некроза опухолей-бета (ФНО-β), ларифан и тиосульфат натрия – повышают иммунологическую эффективность живых вакцин из штаммов бруцелл, особенно находящихся в RS-форме.

Однако ни пассажи, ни введение адъювантов практически не изменяли иммунологическую активность культуры штамма B. abortus R1096 (R-форма).

THE STUDY OF INFLUENCE OF PASSAGE AND ADJUVANTS ON IMMUNOGENIC PROPERTIES OF CULTURES OF DISSOCIATED VACCINE STRAINS OF BRUCELLA

Salmakova A.V., Fomin A.M., Safina G.M., Kosarev M.A.

In work results of studying of influence of passages through an organism of guinea pigs and a number of adjuvants on increase of immunological efficiency of vaccine strains B. abortus in S-, SR-, RS- and R-forms are stated.

It’s established, that passages stabilize properties of brucella vaccine strains and adjuvants – polioxidonium, the Tumor necrosis factor-beta (TNF-β), larifan and sodium thiosulfate – raise immunological efficiency of live vaccines from strainsof brucella, especially that being in the RS-form.

However neither passages nor adjuvants practically changed immunological activity of culture of strain B.abortus R-1096 (the R-form).