Изучение влияния пиримидина – МАОП и тритерпеноида МЭК в композиции с анилокаином и фторхинолонами на клеточное звено иммунитета

В связи с этим целью наших исследований явилось обоснование применения композиций пиримидина МАОП (2-метил-4-амино-6-окси-пиримидин) и полусинтетического тритерпеноида МЭК (монометиловый эфира кетотетракарбоновой кислоты) с анилокаином (А) и фторхинолонами (энрофлоксацином [Э] и полифлоксацином [П]) при коррекции иммунитета у животных.

Материалы и методы исследований. Исследования проведены на 60 мышах гибридах первого поколения (F₁=С₅₇Bl♂ × CBA♀), разделенных на 12 групп. Животным назначали исследуемые композиции МАОП+А+Э (1:2:0,2), МАОП+А+П (1:2:0,2) и МЭК+А+П (1:2:0,2) в исследуемых дозах при однократном за 24 часа до начала исследований назначении и семикратном назначении в течение семи дней.

Функциональную активность перитониальных макрофагов оценивали по способности восстанавливать нитросиний тетразолий и фармазан в диформазан под действием продуктов НАДФ – оксидазной реакции при активации макрофагов («Дыхательный взрыв»). Оценку количества перитониальных макрофагов, несущих Fc–рецепторы, производили методом розеткообразования с эритроцитами барана (ЕА-РОК) [1].

Определение фагоцитарной активности нейтрофилов проводить по методу Н.В. Пучкова [2] с суспензией убитых микробных тел Staphylococcus aureus (Штамм 209).

Результаты собственных исследований. Одной из важнейших составляющих прогностических признаков, характеризующих изменение иммунобиологического статуса животных, является фагоцитарная активность лейкоцитов. По этой причине при изучении возможных иммуностимулирующих, -модулирующих или -супрессорных свойств лекарственных средств рекомендуется обращать особое внимание на динамику фагоцитарной активности нейтрофилов (как наиболее агрессивных фагоцитирующих форм лейкоцитов), а также фагоцитирующей активности перитониальных макрофагов.

Нашими исследованиями установлено, что уже через сутки после однократного применения изучаемых соединений происходит заметное увеличение фагоцитарной активности макрофагов.

Так, в группе животных, которым была назначена композиция монометилового эфира кетотетракарбоновой кислоты (МЭК) с анилокаином (А) и полифлоксацином (П) [МЭК+А+П (1:2:0,2)] в дозе 25 мг/кг цветовой показатель активности (ЦПА) макрофагов характеризовал более выраженную степень раздражения, отраженную в увеличении процента фармазан-позитивных клеток (с отложением диформазана в цитоплазме) при постановке цитохимической реакции с нитросиним тетразолием. Цветовой показатель при этом составил 0,047±0,004, что в 3,36 раз больше при сравнении с цветовым показателем в контрольной группе, а также в 1,52 и 2,24 раз больше в сравнении с аналогичным цветовым показателем в группах животных, получавших композиции пиримидина МАОП с анилокаином и энрофлоксацином (МАОП+А+Э [1:2:0,2]), МАОП с анилокаином и полифлоксацином (МАОП+А+П [1:2:0,2]) в тех же дозах, соответственно (таблица 1).

1. Динамика изменения функциональной активности перитониальных макрофагов к эритроцитам барана

Помимо увеличения фагоцитирующей активности перитониальных макрофагов при однократном назначении композиции МЭК+А+П (1:2:0,2) внутрь в дозе 25 мг/кг, нами отмечена значительная активация Fc-рецепторного аппарата, отраженного в увеличении процента ЕА-РОК в 1,8 раз по сравнению с контролем (54,80±2,04 %ЕА-РОК в опыте против 30,50±1,90 %ЕА-РОК в контроле), а также в увеличении количества эритроцитов барана (ЕА), прикрепленных к 100 макрофагам, в 2,67 раз по сравнению с контролем (259,50±20,99 ЕА/100 макрофагов в опыте против 97,00±6,11 ЕА/100 макрофагов в контроле). Тогда как при однократном назначении внутрь композиций МАОП+А+П (1:2:0,2) и МАОП+А+Э (1:2:0,2) в аналогичных дозах (25 мг/кг) эти показатели были значительно менее выраженными: процент ЕА-РОК был больше в сравнении с контролем в 1,42 и 1,27 раз соответственно, что на 38% и 53% соответственно меньше по сравнению с процентом ЕА-РОК в группе животных, однократно внутрь получавших композицию МЭК+А+П (1:2:0,2) в дозе 25 мг/кг. Число ЕА образующих розетки с перитониальными макрофагами в группах мышей, получавших однократно внутрь композиции МАОП+А+П (1:2:0,2) и МАОП+А+Э (1:2:0,2) в дозах 25 мг/кг было больше при сравнении с контролем в 1,64 и 1,52 раз соответственно, что в ~1,8 раз меньше при сравнении с группой мышей, получавших внутрь композицию МЭК+А+П (1:2:0,2) в той же дозе 25 мг/кг.

При сравнении фагоцитарной активности перитониальных макрофагов к ЕА и фагоцитарной активности нейтрофилов периферической крови к убитым микробным телам Staphylococcus aureus (Штамм 209) – таблица 2 – можно отметить, что процент участвующих в фагоцитозе клеток распределен примерно в одинаковых соотношениях для изучаемых композиций, однако агрессивность нейтрофилов крови значительно выше агрессивности перитониальных макрофагов. Так, если в группе животных, получавших композицию МЭК+А+П (1:2:0,2) однократно внутрь в дозе 25 мг/кг, один перитониальный макрофаг (ФИ) в среднем образовывал розетку с 4,71±0,09 ЕА, то фагоцитарный индекс нейтрофилов крови к микробным телам убитых Staphylococcus aureus (Штамм 209) составлял 5,40±0,10, что на 14% больше чем у перитониальных макрофагов.

2. Динамика изменения функциональной активности нейтрофилов периферической крови к убитым микробным клеткам Staphylococcus aureus (Штамм 209)

Семикратное применение изучаемых соединений приводило к еще большему и вместе с тем стабильному повышению, как активности, так и агрессивности перитониальных макрофагов и нейтрофилов периферической крови, но, не выходя за допустимые пределы. Так, при семикратном, в течение семи дней, назначении композиции МЭК+А+П (1:2:0,2) в дозе 25 мг/кг, розеткообразующая активность перитониальных макрофагов и нейтрофилов увеличилась в 1,36 раз (с 54,80±2,04 %ЕА-РОК до 74,30±3,23%ЕА-РОК) и 1,34 раз (с 59,00±3,02% до 79,30±3,23%) соответственно; агрессивность перитониальных макрофагов увеличилась в 1,48 раз (с 259,50±20,99 ЕА/100 макрофагов до 384,60±15,36 ЕА/100 макрофагов), при увеличении фагоцитарного индекса на 9,3% (с 4,74±0,09 до 5,18±0,11), а агрессивности нейтрофилов на ~42% (с 318,70±21,46 до 451,60±24,33 фагоцитированных микробных тел убитых Staphylococcus aureus на 100 нейтрофилов). Подобная тенденция отмечена в отношении всех исследуемых композиций.

Вместе с этим необходимо отметить, что увеличение дозы композиции МЭК+А+П (1:2:0,2) до 50 и 100 мг/кг, как при однократном, так и при многократном применении не приводило к достоверно более выраженным изменениям активности перитониальных макрофагов и нейтрофилов периферической крови в сравнении назначением композиции МЭК+А+П (1:2:0,2) в дозе 25 мг/кг.

Выводы. Композиция МЭК+А+П (1:2:0,2) в дозе 25 мг/кг при назначении внутрь стимулирует клеточное звено иммунитета по средствам улучшения как активности, так и интенсивности фагоцитоза. Однократное применение композиции МЭК+А+П (1:2:0,2) внутрь в дозе 25 мг/кг может быть рекомендовано с профилактической целью при угрозе возникновения иммунодефицита, а семикратное – с лечебной целью.

ЛИТЕРАТУРА: 1. Земсков А.М. Достижения в исследовании физиологии и метаболизма фагоцитов. //Микробиология, эпидемиология и иммунология. –1985. –№12. –С.85-93. 2. Пучков Н.В., Некрасов А.В. Роль иммуномодулирующей терапии в общеклинической практике. //Иммунология. –2000. –№5. –С. 34-39.

ИЗУЧЕНИЕ ВЛИЯНИЯ ПИРИМИДИНА – МАОП И ТРИТЕРПЕНОИДА МЭК В КОМПОЗИЦИИ С АНИЛОКАИНОМ И ФТОРХИНОЛОНАМИ НА КЛЕТОЧНОЕ ЗВЕНО ИММУНИТЕТА

Чудов И.В., Исмагилова А.Ф.

Резюме

В статье представлены результаты исследований, доказывающие стимулирующее влияние композиции МЭК+А+П (1:2:0,2) на клеточное звено иммунитета животных. Усиление клеточного звена иммунитета охарактеризовано повышением фагоцитирующей активности макрофагов и нейтрофилов периферической крови при одно- и многократном применении. Табл. 2. Библ. 2.

STUDYING OF INFLUENCE OF PIRIMIDIN – MAOP AND TRITERPENOID -KETOTETRACARBOXYLIC ACID MONOMETHYL ETHER WITH ANILOCAIN AND POLIFLOXACIN ON A CELLULAR LINK OF IMMUNITY

Chudov I.V., Ismagilova A.F.